Universidad de Valparaíso

Escuela de Química y Farmacia

Bioquímica

Enzimas
 Enzimas
• Casi todas son proteínas
globulares (3ª y 4ª)
• Participan en todos los
procesos del organismo
– Metabolismo
– Procesos de señalización
celular
• Diagnóstico y tratamiento
de patologías.
• Producción de alimentos
 Complejo enzima-sustrato

  Velocidad de reacción

La enzima no sufre

modificaciones y puede
reutilizarse.

 Son muy específicas por el

Estereoespecificidad
sustrato.
 Centro activo
• Sitio de unión del sustrato.

• Suele ser bolsillo o

hendidura.

• Sustrato y centro activo

tienen forma
complementaria

• Interacción por enlaces

débiles.
Clasificación
Lactato
deshidrogenasa

Glutamato
Oxalacetato
Transaminasa

Quimiotripsina
Clasificación de enzimas
Fumarasa

Triosa fosfato
isomerasa

Piruvato
carboxilasa
Clasificación de enzimas
 Enzimas
ENZIMAS

SIMPLES CONJUGADAS

COFACTOR COENZIMA
 Enzimas
 Grupos prostéticos: unión
covalente o no covalente
Fosfato de piridoxal , flavina
mononuclótido (FMN),
pirofosfato de tiamina, biotina.
 Co, Cu, Mg, Mn, Zn.

Cofactor: unión transitoria

ATP
Iones metálicos

Coenzima:
Vitaminas B hidrosolubles
FAD, NAD
Coenzima A
 Enzimas: Energía de activación
Energía de activación (Ea): energía necesaria para que el sustrato se
transforme en producto.

Disminuyen la energía de activación (aceleran la reacción ).

 ¿Cómo funcionan las enzimas?
Complementariedad geométrica
 Mecanismos de catálisis enzimática

Catálisis por
proximidad

Catálisis por
deformación
 Mecanismos de catálisis enzimática
Ej: Proteasa del VIH

Catálisis
covalente
Ej: Quimiotripsina
Cinética Enzimática
 Reacción química
Sustratos Productos

Reacción balanceada

Energía libre de Gibbs

Si G es negativo: reacción espontánea

G0 = RT ln Keq
Si G es cero: equilibrio

Si G es positivo: reacción no Keq = [P]/[S]

espontánea.
 Factores que afectan la actividad enzimática

Concentración de enzima Concentración de sustratos

A pH y temperatura constantes
Concentración saturante de sustrato
 Factores que afectan la actividad enzimática

• Temperatura
 Factores que afectan la actividad enzimática

• pH

pH y medio iónico afectan a la conformación tridimensional de la proteína

Determinación de velocidad de reacción
enzimática
Determinación de velocidad de reacción
enzimática
 Hipótesis de Michaelis–Menten

Km: concentración de sustrato a la

cual la velocidad de reacción es la
mitad de la velocidad máxima
(Vmax)

A menor Km >>> afinidad por sustrato

A mayor Km <<< afinidad por sustrato

 Constante Km
1. Constante de equilibrio de disociación del
complejo.
2. Medida inversa de la afinidad de la enzima
por el sustrato.
3. Concentración de sustrato a la que la
velocidad es igual a la mitad de la velocidad
máxima (1/Vmáx).
4. Se define para una pareja enzima-sustrato.
Ejemplo
Gráfico del doble recíproco o de Lineweaver-
Burk
 Inhibición de la actividad enzimática

• Inhibidor: disminuye la actividad enzimática.

No incluye a los agentes denaturantes.
• 2 tipos:

– Isostéricos: ejercen su acción en sitio activo.

– Alostéricos: actúan sobre otra parte de la
molécula (cambio conformacional).
 Inhibición reversible
• Unión no covalente de inhibidor y enzima. Ej:
inhibidor de tripsina.

• Tipos:
– Inhibición competitiva
– Inhibición no competitiva
– Inhibición acompetitiva
 Inhibición competitiva
• El inhibidor “compite”
con el sustrato por
unión a la enzima.
 Inhibición
competitiva

• Km aumenta.
• Vmáx no se altera. A > [S] se desplaza el
inhibidor de la unión con enzima.
• Inhibidores son análogos de sustrato
 Inhibición no competitiva
• El inhibidor se une en
otro sitio diferente del
sitio activo.
• Puede formar
complejos EI o EIS.
 Inhibición no competitiva

• Km no cambia.
• Vmáx se reduce. [S] no desplaza el inhibidor de la unión con enzima.
 Inhibición acompetitiva
• Inhibidor se une sólo a complejo
ES.
– Km aumenta
– Vmáx disminuye
En resumen…
 Inhibición irreversible
• Unión covalente entre inhibidor y enzima. Ej: toxinas. Pueden
provocar la muerte.

• Inhibidor suicida. Ej. alopurinol

• Produce inactivación permanente de la enzima.

• Interfieren con normal desarrollo de reacción o vía metabólica.

• Su acción se describe por una constante de velocidad ki. El efecto

depende del tiempo de actuación del inhibidor.

• No cumplen Michaelis – Menten.

 Inhibición irreversible
Unión covalente con la enzima

Inhibidor suicida
Inhibición irreversible
 Regulación de la actividad enzimática

1) Disponibilidad de sustrato

2) Regulación por retroalimentación

3) Activación/inhibición alostérica

4) Modificaciones covalentes
 Reversible
 Irreversible
1) Disponibilidad de sustrato
 2) Regulación por retroalimentación
Una enzima de una vía
biosintética es inhibida
por el producto final de la
misma vía

Ejemplos: Glucólisis, Ciclo de Krebs

 2) Regulación por retroalimentación
-
G
+

N
+

-
Ejemplo: Síntesis de purinas y pirimidinas
 3) Enzimas alostéricas

 Sitio alostérico: se
une una molécula
regulatoria.

Modulador
negativo:  la
afinidad de la
enzima por el
sustrato.

Modulador
positivo:  la
afinidad de enzima
por sustrato.
 3) Activación/inhibición alostérica
Homoalosterismo

• Cooperatividad de unión del sustrato.

• Las enzimas tienen múltiples subunidades que pueden unir más de un
sustrato. La unión de un sustrato favorece la unión de otros sustratos.
3) Activación/inhibición alostérica
Heteroalosterismo
Efectores alostéricos pueden ser inhibidores o activadores de
la enzima. Son diferentes al sustrato.
 3) Activación/inhibición alostérica
Heteroalosterismo
Aspartato carbamoiltransferasa

CAA: N-carbamoil-L-aspartato
 4) Modificaciones covalentes

• Reversible:
fosforilación,
metilación,
acetilación, ADP-
ribosilación, etc.
 4) Modificaciones covalentes
Irreversible: activación proteolítica

Enzimas inactivas se convierten en enzimas activas

Regulación de la actividad enzimática
 Isoenzimas
• Diferentes formas
moleculares de una
misma enzima.
• Catalizan la misma
reacción.
• Km y Vmáx diferente.
Isoenzimas