GOLDEN GATE

TECHNOLOGY
Presentado por:
• Sarah Fernanda Leon Ortiz
• Nelsith Fonaris Hurtado

Faculta de Ciencias, departamento de Biología.

Técnicas en Biología molecular
INTRODUCCIÓN
Los métodos de ensamblaje de ADN son
herramientas esenciales para la investigación
biológica y la biotecnología.

Los diferentes métodos utilizados requieren varios

pasos de clonación para generar una construcción de
interés

En los últimos años, se han desarrollado una serie de

métodos para facilitar y acelerar este proceso. Como
lo es el GOLDEN GATE
 El objetivo principal es crear
proteínas sintéticas similares a
los activadores de transcripción
(TAL) con el uso de repeticiones
diseñadas.
 Principal conclusión del artículo  es que las
proteínas TAL pueden diseñarse para dirigirse a una
secuencias de ADN específicas y así activar la
transcripción y al sustituirse el dominio de
activación , por un dominio heterólogo aumenta la
actividad transcripcional.  
 MÉTODO
GOLDEN GATE
Principios y métodos
PRINCIPIO DE CLONACIÓN
MÉTODO  GOLDEN GATE

Este método permite ensamblar

hasta nueve fragmentos de ADN en
un solo paso de clonación

“Método de clonación de precisión en un solo paso,

con gran capacidad de rendimiento”
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Enzima clásica
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Enzima tipo II

LI
LI G
G AS
AS A
A
PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO
VENTAJAS DEL MÉTODO DE
GOLDEN GATE

La secuencia saliente creada no está dictada por REase y, por lo

1 tanto, no se introduce ninguna secuencia de cicatriz.

La secuencia específica de fragmentos de los voladizos

2 permite el ensamblaje ordenado de múltiples fragmentos
simultáneamente.

El sitio de restricción se elimina del producto ligado, por lo que

3 la digestión y la ligadura pueden llevarse a cabo
simultáneamente.
CONSTRUCCIÓN DE
LOS MODULOS DE 6
REPETICIONES
Identificación
de los
elementos
genéticos de
interés

Diseño de
cebadores para
PROCEDIMIENTO DE
mutar los sitios
de restricción CONSTRUCCIÓN DE LOS
MODULOS DE 6
Amplificacón
por PCR
REPETICIONES

Clonación y
emsamble
 MODELO DE
CONSTRUCCIÓN
 Se clonan las repeticiones TAL
individuales con sitios de
restricción flanqueantes, se
generan “voladizos” específicos

Diseño de proteínas TAL

sintéticas que propiciaran la
expresión de genes
endógenos
 MODELO DE
CONSTRUCCIÓN
Se ensamblan las
repeticiones de 1-6
veces en un vector de
ensamblaje.
Ordenadas por los SR
Se ensamblaron los
TAL en un vector de
expression o
plásmido.
LIBRERÍA DE LOS MÓDULOS

Conjunto de módulos estándar con elementos definidos:

• Promotores
• Regiones no traducidas de 5’
• Secuencias de codificación o terminadores
 DISCUSIÓN DEL ARTÍCULO

Proteínas de activación transcripcional sintéticas

Repeticiones diseñadas para activar la expresión de

genes endógenos y exógenos

“Golden TAL technology” como herramienta de

Biotecnología
GRACIAS POR SU
ATENCIÓN
REFERENCIAS

• Engler C, Kandzia R, Marillonnet S (2008) A one pot, one step, precision cloning method with
high throughput capability. PLoS One 3:e3647

• Engler C, Gruetzner R, Kandzia R et al (2009) Golden gate shuffl ing: a one-pot DNA shuffl ing
method based on type IIs restriction enzymes. PLoS One 4:e5553

• Geibler R, Scholze H, Hahn S, Streubel J, Bonas U, et al. (2011) Transcriptional Activators of

Human Genes with Programmable DNA-Specificity. PLoS ONE 6(5): e19509.
doi:10.1371/journal.pone.0019509

• synbio@tsl. (2014, 1 diciembre). Golden Gate Cloning Video 3 - The Golden Gate MoClo
Assembly Standard [Vídeo]. YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=_bag7cdwZpY