454 ROCHER

LA SECUENCIACIÓN DEL ADN

DE PRÓXIMA GENERACIÓN
 Representa un solo formato
en la que una amplia gama
Se especializa en
de fenómenos biológicos
secuencias de ADN.
puede ser proyectado para
la recopilación de datos.

Las plataformas de
Tiene el potencial de
secuenciación de ADN han
acelerar de forma
llegado a ser ampliamente
espectacular la
disponible, reduciendo el
investigación biológica y
coste de la secuenciación
biomédica.
del ADN.

Reducen el coste de la
secuenciación del ADN por
más de dos órdenes de
magnitud.
 Los fragmentos de
ELECTROFORESIS ADN se inyectan en el
CAPILAR capilar de
electroforesis.

Los picos de
Llegan a un detector fluorescencia
en tiempo real. corresponden a cada
nucleótido.

Los datos se pueden

se pueden Muestra los
transformar resultados de la
informáticamente en secuencia de ADN.
una cromatograma.
La secuenciación de ADN
de segunda generación
Métodos
Microelectrophoreticos

La Secuenciación Por
Hibridación

Observación En Tiempo
Real De Moléculas
Individuales

La Secuenciación
Cíclica-array
Pirosecuenciación Es una tecnología que
La pirosecuenciación se diferencia
del método de Sanger en que se

454 permite determinar una

secuencia de ADN a gran
basa en la detección de la
liberación de pirofosfato cuando se
escala, aplicable incorporan los nucleótidos, mientras
a genomas completos, que en la segunda la detección se
mediante luminiscencia. da por la terminación de la cadena
con didesoxinucleótidos.

permite secuenciar
25 millones de bases,
con 99% de precisión
en una corrida de 4
horas”
 Microchip-basado en secuenciación
electroforética
 secuenciación electroforética convencional puede llevarse a cabo en un
dispositivo microfabricado
 Las principales ventajas de este enfoque incluyen tiempos de
procesamiento más rápidos y reducciones sustanciales en el consumo de
reactivos.
Secuenciación por hibridación

 La hibridación diferencial de
fragmentos de ácido
nucleico marcados a una
matriz de sondas de
oligonucleótidos puede
usarse para identificar con
precisión las posiciones
variantes.
 Los oligos atados a la matriz
están diseñados como una
representación de baldosas
de la secuencia de
referencia correspondiente
al genoma de interés.
 secuenciación en
tiempo real
 Nanopore sequencing, en el cual
conducen ácidos nucleicos por un
nanopore (proteína biológica de la
membrana como la alfa-hemolysin o un
poro sintético)
 Las fluctuaciones en la conductancia de
ADN por el poro, o, potencialmente, la
detección de las interacciones de bases
individuales con el poro, son usadas para
deducir la secuencia de nucleótido.
Ventajas y desventajas DE
Técnicas DE Secuenciación
DE Segunda Generación
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454 Roche y otras técnicas
 Tamaño de secuenciación de
aprox 400-500 pb.
 Cundo hay una sección de
homopolímeros la cantidad de
luz emitida ya no es
proporcional al numero de
nucleótidos.
 En términos de precisión lleva
ventaja sobre el método
convencional.
Técnica convencional
 Tamaño de secuenciación de aprox
800000 pb.
 Coto de: Reactivo
Procesamiento de muestras
múltiples
Mantenimiento de estructura
basada en capilares.
 Coto alrededor de 300 000-1 000
000 $.
  Gestión de datos para
eliminar la taza de errores.
DESAFIO PARA  Lecturas útiles para
LAS TECNICAS mapear variantes
DE SEGUNDA estructurales.
GENERACION  Un mayor competencia
entre vendedores.
 Calidad de secuencias.
PLICION DE Técnicas DE Secuenciación
DE Segunda Generación

CUANTIFICACION MAPEO DE
RESECUENCIACION MAPEO DE DE RANGO PARA LA INTERACCIONE
DEL GENOMA REORDENAMIENTOS ANOTACION DE S ADN-
ESTRUCTURALES UNIONES DE PROTEINA
EMPALME Y LIMITES
DE TRANCRIPCION