BIOPROCESOS AVANZADOS

M.Sc. Ing. Joshelyn M. Paredes Zavala

jparedesz@ucsm.edu.pe
 FUNDAMENTOS DE
TECNOLOGÍAS MOLECULARES
La unidad de vida: La Célula

La molécula de la vida: El DNA

La unidad de la herencia: El Gen

La fuente de material genético: Los Cromosomas

Replicación del DNA

Transcripción y traducción del código genético

 Fundamental en Clonación
e
DNA el estudio de los
Bioprocesos Ingeniería
Genética

Manipulaciones
Molécula
esenciales en
de vida
Bioprocesos
UNIDAD ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE TODA FORMA DE
VIDA

Bacterias Ser Humano  Comportamiento

• 1 célula • 75 trillones  Capacidad de
degradación
 Producción de enzimas
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
 SECUENCIA DE NUCLEÓTIDOS QUE PROPORCIONA A
LAS CÉLULAS INSTRUCCIONES PARA LA SÍNTESIS DE
UNA PROTEINA ESPECÍFICA O UN TIPO PARTICULAR DE
RNA
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
 Células
Gametos
somáticas

MITOSIS MEIOSIS

2 células Hasta 4
hijas células hijas

23 pares de 23
cromosomas cromosomas

Diploide: 2n Haploide: n
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
REPLICACIÓN DEL ADN
• https://www.youtube.com/watch?v=TNKWgcFPHqw

TRANSCRIPCIÓN Y TRADUCCIÓN
• https://www.youtube.com/watch?v=8_f-8ISZ164
 Si la secuencia de una cadena de una molécula de
DNA es
5'-AGCTCTACGGCTGCTATTC-3‘
¿cuál es la secuencia de la cadena complementaria?

Considera la siguiente secuencia de mRNA: 5'-

AGCACCAUGCCCCGAACCUCAAAGUGAAACAAAAA-
3'.

¿Cuántos codones están incluidos en este mRNA?

¿Cuántos aminoácidos son codificados por esta
secuencia?
Si la secuencia de una cadena de una molécula de DNA es
5'-AGCTCTACGGCTGCTATTC-3‘
3’-TCGAGATGCCGACGATAAG-5’
¿cuál es la secuencia de la cadena complementaria?

Considera la siguiente secuencia de mRNA: 5'-

AGCACCAUGCCCCGAACCUCAAAGUGAAACAAAAA-3'.
Met-Pro-Arg-Tre-Ser-Lis-Parada

¿Cuántos codones están incluidos en este mRNA? ¿Cuántos

aminoácidos son codificados por esta secuencia?
7/5
 Considera la siguiente secuencia de DNA:
5‘-TTTATGGGTTGGCCCGGGTCATGATT-3'
3'-AAATACCCAACCGGGCCCAGTACTAA-5

¿Qué secuencia de
DNA (superior o
Transcribe cada una
inferior) produce un
de estas secuencias a
mRNA funcional que
mRNA.
contiene un codón de
inicio?

¿Cuál es la secuencia
de aminoácidos del
polipéptido producido
a partir de este mRNA?
 Considera la siguiente secuencia de DNA:
5‘-TTTATGGGTTGGCCCGGGTCATGATT-3‘
3’-AAAUACCCAACCGGGCCCAGUACUAA-5’
3'-AAATACCCAACCGGGCCCAGTACTAA-5
5’-UUUAUGGGUUGGCCCGGGUCAUGAUU-3’

¿Qué secuencia de DNA

Transcribe cada una de (superior o inferior)
estas secuencias a produce un mRNA
mRNA. funcional que contiene
un codón de inicio?

¿Cuál es la secuencia de
aminoácidos del
polipéptido producido a
partir de este mRNA?
Met-Lys-Trp-Pro-Gly-
Ser-Par
TECNOLOGÍA DEL DNA
RECOMBINANTE
Enzimas de Restricción

Plásmidos de DNA

Transformación

Selección

Características y tipo de vectores

Aplicaciones
 70’s: Realidad:
Descubrimiento
de Enzimas de
60’s: Restricción y
Especulación: Plásmidos de DNA
Cortar y Pegar

Molécula, célula
u organismo
que ha sido
CLON producido a
partir de otra
entidad única
 Tecnología
del DNA
recombinante

Clonación de
Genes

Ingeniería
Genética
Endonucleasas de restricción

Rompen el enlace fosfodiester que une

nucleótidos adyacentes

Secuencias de reconocimiento o posición de

restricción.

Cortan usualmente de 4 a 6 pb. Algunas cortan

8 pb.

Secuencias de reconocimiento: palíndromos.

Extremos cohesivos (sobresalientes) y

extremos romos (no sobresalientes).
Fuente: Thieman & Palladino 2010
Fuente: Thieman & Palladino 2010
Fuente: Thieman & Palladino 2010
Forma circular de DNA autorreplicante

DNA extracromosómico (citoplasma bacteriano)

Tamaño pequeño: 1000 – 4000 pb

Replicación independiente del cromosoma bacteriano

Vehículo para la inserción y clonación del DNA

Primer vector plásmido para clonación: pSC101

Fuente: Thieman & Palladino 2010
Fuente: Thieman & Palladino 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Proceso Tratamiento de células bacterianas con
de soluciones de cloruro cálcico
inserción
de DNA Añade DNA de plásmido a células puestas a
foráneo enfriar en hielo
en
bacterias
Calentamiento breve de la mezcla de células y
DNA

Plásmido de DNA ingresa a las células

bacterianas, se replican y expresan sus genes

Electroporación: pulso breve de electricidad de

alto voltaje para hacer agujeros minúsculos en la
pared celular bacteriana para el ingreso de DNA
 • Facilita la identificación de
Selección bacterias recombinantes

a favor

• Evita el crecimiento de
Selección bacterias no transformadas
y de bacterias que
en contra contienen plásmidos sin
DNA foráneo
 • Células bacterianas se siembran en agar
con diversos antibióticos para identificar
bacterias recombinantes y células no
Selección transformadas

antibiótica

• Gen lacZ codifica B-gal (enzima que

Selección
degrada lactosa en glucosa y galactosa).
• Interrupción por gen insertado: gen
incapaz de producir B-gal funcional
azul- • Sustrato cromogénico: X-gal (similar a
lactosa en estructura, se vuelve azul

blanca
cuando lo rompe B-gal
• Recombinantes blancas / No rec azules
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
Fuente: Thieman & Palladino, 2010
CLONACIÓN DE UN GEN
• https://www.youtube.com/watch?v=arQU-bbxcUM

CONSTRUCCIÓN DE UN PLÁSMIDO VECTOR

• https://www.youtube.com/watch?v=KRpik9mNRm0
 • Suficientemente pequeños para que se puedan
separar fácilmente del DNA cromosómico de la
Tamaño bacteria hospedadora

• Sitio de replicación del DNA que permite a los

Origen de plásmidos replicarse de forma separada del
replicación cromosoma de la célula hospedadora
(ori)

• Número de plásmidos que hay en una célula.

Normalmente menos de 12 plásmidos, deseable alto
Número de
copias número de copias (cientos de miles por célula)

• Sitio de clonación múltiple (MCS). Fragmento de DNA

con secuencias de reconocimiento para varias
Polylinker enzimas de restricción
 • Permiten la selección e identificación de bacterias
transformadas mediante un plásmido recombinante en
Genes comparación con las no transformadas. Ej. ampR, tetR, lacZ.
marcadores

• Se utilizan para la transcripción del RNA in vivo e in vitro por

RNApol. In vivo permite a células bacterianas fabricar RNA a
Secuencias del partir de genes clonados y sintetizar proteínas. In vitro
promotor de permite sintetizar sondas para estudiar la expresión génica.
RNApol

• Estos cebadores (primers u oligonucleótidos) permiten la

secuenciación de nucleótidos de fragmentos de DNA
Secuencias de clonado que hayan sido insertados en el plásmido.
cebadores
 Desde el punto de vista comercial, una ventaja de
las patentes es que proporciona a las empresas
privadas un incentivo para llevar al mercado una
tecnología. Al mismo tiempo, esto puede ralentizar
los avances en la búsqueda y aplicación de
soluciones a problemas ambientales.
¿Patentar o no patentar? TÚ DECIDES.