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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

MEDICINA VETRINARIA Y ZOOTECNIA


VIROLOGA
NOMBRE: Jessica Reza

CURSO: Tercero A

INMUNODIFUSION EN GEL DE AGAR


INTRODUCCIN
Cuando un anticuerpo es puesto en contacto con el antgeno
correspondiente, se forman complejos antgeno-anticuerpo que se
insolubilizan en su mayor parte, dando lugar a una reaccin de
precipitacin.
Empleando soportes adecuados es posible que los antgenos y anticuerpos
migren con diferentes velocidades, de modo que al encontrarse
interaccionen y precipiten. Los geles utilizados como soporte tienen como
base pectina, alginatos, poliacrilamida e incluso pueden utilizarse tiras de
acetato de celulosa gelatinizado. Los precipitados que se originan se
visualizan como bandas, que permanecern estables mientras un mayor
flujo de molculas de alguno de los reactivos empleados no provoque su
redisolucin.
Se utiliza normalmente el mtodo de Oucherlony o de doble difusin.
Consiste en enfrentar en pequeas perforaciones efectuadas en el agar, las
soluciones de antgeno y anticuerpo. Al difundir y ponerse en contacto,
producirn una banda de precipitacin slo si se encuentran en
concentraciones ptimas. Si sta concentracin es la que corresponde a la
zona de equivalencia de la banda de precipitacin estar situada
aproximadamente en la distancia media que separa los reservorios. Cuando
hay exceso de antgeno o anticuerpo, la banda estar ms prxima al pocillo
del anticuerpo o del antgeno, respectivamente.

Este sistema permite


identificar las bandas
de precipitacin mediante el empleo simultneo de antgenos y anticuerpos
conocidos.
Se pueden observar tres tipos de reacciones:

a. Reaccin de identidad: los dos sistemas difunden en una nica banda

de precipitacin.
de
no
identidad: cada
sistema
reacciona
independientemente, originando bandas de precipitacin que se
cruzan.
c. Reaccin de identidad parcial: Se produce cuando uno de los
antgenos tiene menos de un componente y es capaz de dar una
reaccin cruzada con un anticuerpo elaborado contra un antgeno
ms simple. En este caso las bandas de ambos sistemas se unen y
funden parcialmente en una banda, apareciendo una prolongacin o
espoln. Esto indica que en este antgeno hay componentes
antignicos no compartidos.
b. Reaccin

Este mtodo, que debido a su sencillez, se puede realizar en cualquier


laboratorio, ha sido utilizado prcticamente en todas las virosis como
mtodo de diagnstico serolgico. Debido a su limitante, la baja
sensibilidad, ha sido desplazada por otras tcnicas.
En virologa veterinaria se lo utiliza en la actualidad para identificar
reactores para las siguientes infecciones: Fiebre aftosa, Leucosis Bovina
Enzotica, Lengua Azul, Anemia Infecciosa Equina, Enfermedad de
Gumboro, Bronquitis Infecciosa.

TECNICA DE INMUNODIFUSION EN AGAR PARA LEUCOSIS BOVINA


ENZOOTICA
Materiales
a.
b.
c.
d.

Agar: Buffer Tris 0,05 M PH 8, CINa 8,5%, Agar Noble 0,85%.


Antgeno y antisuero control.
Sueros problema.
Otros: Portaobjetos
Pipetas
Cmara hmeda.

Mtodo.
a) Preparacin del agar:

Disolver a Bao Mara hasta que se vea transparente. Colocar 3,5ml.


sobre un portaobjeto limpio y desengrasado. Dejar enfriar en un
ambiente libre de polvo o tapado hasta que solidifique bien. Una vez

solidificado conservar tapado y a 4C hasta su uso. Perforar usando el


sacabocado convencional que indique el kit, de 7 bocas (una central y
6 perifricas). Extraer el agar de los pocillos con bomba de vaco.
b) Siembra:

Colocar el suero positivo de referencia en 3 de los pocillos perifricos


en forma alternada. Colocar luego los sueros problema en los orificios
restantes. Llenar los pocillos hasta la superficie, sin dejar menisco
(aproximadamente 25 ul.).
Colocar el antgeno en el pocillo central de la misma manera.
Incubar a temperatura ambiente (20 - 25), en cmara hmeda
durante 48 horas.
c) Interpretacin de resultados

Usar una fuente de iluminacin que provea y que incida en forma


oblicua al plano inferior de la placa.
Negativo (reaccin de no identidad): La lnea control contina

hasta el pocillo del suero problema.


Positivo (reaccin de identidad): La lnea control se une en

forma continua con la lnea producida por el suero problema.


Inespecfico: La lnea del suero problema se cruza con la lnea

control.
Positivo o dbil: La lnea control se curva ligeramente pero no

alcanza a formar una lnea completa entre el suero problema y


el antgeno.
ANEXOS

BIBLIOGRAFIA
Morilla, A., Bautista, C.,
1986.
Manual
de
Inmunologa pag. 51 - 62.
Alonso et al. 1992. Manual
enfermedades vesiculares.

dediagnstico

O.I.E. 1991. Manual of recommended


requirements for biological products.

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boratorio

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