TECNICAS DE PRECIPITACION

Para la realizacin de estas tcnicas se requiere que tanto el Ac como el Ag se encuentren en un medio fluido en el que sea posible la precipitacin del complejo Ag-Ac. Existen diferentes modalidades siendo las principales: 1. Tcnica de precipitacin propiamente dicha. 2. Tcnica de difusin radial de Ouchterlony. 3. Tcnica de inmunoelectroforesis. 4. Tcnica de difusin radial simple de Mancini. Tcnica de precipitacin El complejo Ag-Ac precipita espontneamente o por centrifugacin cuando la proporcin de Ags y Acs de la mezcla es equivalente. En laFigura 17.1 se muestra un esquema de los tipos de complejos formados al mezclar, en tubos de ensayo, soluciones con diferentes cantidades de antgenos a los que se aaden igual cantidad de un antisuero. La precipitacin es mxima all donde la proporcin entre ambos es ptima (parte central de la curva), pero va disminuyendo a medida que predomine el Ac o el Ag (izquierda y derecha de la curva respectivamente) Este tipo de reaccin no es muy utilizado al requerirse grandes concentraciones de antgeno y de anticuerpo para poder medir el precipitado formado.

Tcnica de difusin radial doble de Ouchterlony Esta tcnica se realiza en placas de agar en donde se practican pocillos (Figura 17.2). En uno de estos pozos se coloca el suero o muestras a investigar y en el resto se coloca el anticuerpo preparado frente a la sustancia que se quiere identificar. Cuando difunden, ambos sistemas se encontrarn y se formar en la

zona de equivalencia el complejo Ag-Ac correspondiente que se hace visible en forma de una lnea de precipitacin. En una preparacin que contenga varios antgenos, se obtendrn mltiples lneas de precipitado. La tcnica de Ouchterlony permite identificar sustancias segn la forma de unirse las lneas de precipitacin de dos o varios sistemas.

Tcnica de inmunoelectroforesis La inmunoelectroforesis es una tcnica que se realiza en dos fases. Primero se separa la mezcla de Ags por electroforesis y posteriormente el antgeno que se desea detectar se hace reaccionar con un anticuerpo especfico colocado en un pocillo lateral. Por difusin llegan a encontrarse los antgenos y el antisuero, apareciendo el complejo Ag-Ac visible en forma de lneas de precipitacin que pueden ser estudiadas por comparacin con un sistema estndar (Figura 17.3). En Inmunologa clnica, esta tcnica puede utilizarse en la identificacin de las protenas de mieloma.

Tcnica de difusin radial simple de Mancini Esta tcnica se basa en la difusin de un antgeno colocado en un pocillo en un gel de agarosa que lleva incorporado un anticuerpo especfico. Este anillo de precipitacin es fcilmente visible y las concentraciones antgnicas estn en relacin directa con el rea del crculo de precipitacin. Al difundir el antgeno se genera un gradiente de concentracin desde el pocillo donde se ha colocado. Cuando la concentracin del antgeno es la adecuada (zona de equivalencia) el inmunocomplejo se insolubiliza y se forma un anillo de precipitacin