INMUNODIFUSION EN GEL DE AGAR

INTRODUCCION
Cuando un anticuerpo es puesto en contacto con el antgeno
correspondiente, se forman complejos antgeno-anticuerpo que se
insolubilizan en su mayor parte, dando lugar a una reaccin de
precipitacin.
Empleando soportes adecuados es posible que los antgenos y anticuerpos
migren con diferentes velocidades, de modo que al encontrarse
interreaccionen y precipiten. Los geles utilizados como soporte tienen como
base pectina, alginatos, poliacrilamida e incluso pueden utilizarse tiras de
acetato de celulosa gelatinizado. Los precipitados que se originan se
visualizan como bandas, que permanecern estables mientras un mayor
flujo de molculas de alguno de los reactivos empleados no provoque su
redisolucin.
Se utiliza normalmente el mtodo de Oucherlony o de doble difusin.
Consiste en enfrentar en pequeas perforaciones efectuadas en el agar, las
soluciones de antgeno y anticuerpo. Al difundir y ponerse en contacto,
producirn una banda de precipitacin slo si se encuentran en
concentraciones ptimas. Si sta concentracin es la que corresponde a la
zona de equivalencia de la banda de precipitacin estar situada
aproximadamente en la distancia media que separa los reservorios. Cuando
hay exceso de antgeno o anticuerpo, la banda estar ms prxima al pocillo
del anticuerpo o del antgeno, respectivamente. (Fig. 1)
Este sistema permite identificar las bandas de precipitacin mediante el
empleo simultneo de antgenos y anticuerpos conocidos.
Se pueden observar tres tipos de reacciones
a. Reaccin de identidad: los dos sistemas difunden en una nica banda
de precipitacin.
b. Reaccin de no identidad: cada sistema reacciona
independientemente, originando bandas de precipitacin que se cruzan.
c. Reaccin de identidad parcial: Se produce cuando uno de los antgenos
tiene menos de un componente y es capaz de dar una reaccin cruzada con
un anticuerpo elaborado contra un antgeno ms simple. En este caso las
bandas de ambos sistemas se unen y funden parcialmente en una banda,
apareciendo una prolongacin o espoln. Esto indica que en este antgeno
hay componentes antignicos no compartidos.
Este mtodo, que debido a su sencillez, se puede realizar en cualquier
laboratorio, ha sido utilizado prcticamente en todas las virosis,. Como
mtodo de diagnstico serolgico. Debido a su limitante, la baja
sensibilidad, ha sido desplazada por otras tcnicas.

En virologa veterinaria se lo utiliza en la actualidad para identificar

reactores para las siguientes infecciones: Fiebre aftosa, Leucosis Bovina
Enzotica, Lengua Azul, Anemia Infecciosa Equina, Enfermedad de
Gumboro, Bronquitis Infecciosa.

RT-PCR (reaccin encadena de polimerasatranscripcin inversa)

Se utiliza para la deteccin y amplificacin de ARN. Permite estudiar la
expresin de determinados genes (su traduccin a protenas). En primer
lugar se extrae el ARNtotal de las clulas en estudio y se separa la fraccin
correspondiente al mensajero (ARNm). Tras purificarlo el ARN se transcribe
a ADN mediante una transcriptasa inversa, por cada molcula de ARNm se
sintetiza una molcula de cADN monocatenaria que posteriormente se ha de
convertir en bicatenaria utilizando una ADN polimerasa (la rTth ADN
polimerasa de Thermus thermophilus es un enzima recombinante y
termoestable que acta como transcritasa inversa y como ADN polimerasa
simultneamente). A partir de aqu se aplica la tcnica de PCR lo que
permite una deteccin de la expresin de ARNm mucho ms sensible que
con Northern blot o con hibridacin in situl76. La,80. secuencia del
fragmento amplificado se determina mediante secuenciacin automtica de
ADN. Existen diversos kits comerciales, como Gene Amp de ARN-PCR
(Pekin-Elmer, Alemania) que pueden ser utilizados para RT-PCR,50,80