UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

CAMPUS IV

TEMA: INMUNOFLUORESCENCIA

MATERIA; VIROLOGIA

DR. JOVANI RUIZ TOLEDO

INTEGRANTES:
ANA LAURA GUTIERREZ PEREZ
JOSE ANGEL ALFARO MORGA
YANNIA LITZULLI VELAZQUEZ OSORIO
KEYLA YANETH VAZQUEZ MOLINA

TAPACHULA, CHIAPAS; 22 DE MARZO DEL 2023.

 INMUNOFLUORESCENCIA
Es una técnica de inmunomarcación
que hace uso de anticuerpos unidos
químicamente a una sustancia
fluorescente que permiten detectar la
presencia de un antígeno o anticuerpo
en células o tejidos.
 FLUORESCENCIA
La fluorescencia es un tipo particular de luminiscencia, que
caracteriza a las sustancias que son capaces de absorber
energía en forma de radiaciones electromagnéticas y luego
emitir parte de esa energía en forma de radiación
electromagnética de longitud de onda diferente.​
 FLUOROCROMO
Son compuestos químicos fotorreactivos que absorben la energía
de la luz de una cierta longitud de onda y emiten esa luz a una
longitud de onda más amplia..
Se emplea para marcar anticuerpos u otras moléculas, por su
propiedad de emitir luz de una determinada longitud de onda,
cuando se le estimula con un láser o con luz ultravioleta.
PARTES DEL
MICROSCOPIO
FLUOROCROMETRO

1-.LAMPARA DE MERCURIO.
2-.FILTROS DE BARRERA
3-.ESPEJO DICROICO
4-.FILTRO DE EXITACION
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA.
 INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA O
PRIMARIA.
Tiene que ver con la detección de antígenos
mediante el uso de anticuerpos
fluorescentes.
Hace uso de un único anticuerpo que se
encuentra químicamente unido a un
fluorocromo. El anticuerpo reconoce la
molécula diana y se une a ella directamente.
El procedimiento se realiza en un paso básico de reacción.
La muestra clínica que presuntamente contiene antígenos del
microorganismo bajo estudio es puesta en contacto con un anticuerpo
monoclonal dirigido contra dicho microorganismo conjugado con
fluoresceína.
Si el antígeno esperado está presente se formará un complejo antígeno-
anticuerpo.
La reacción positiva en forma de fluorescencia verde manzana puede verse
con la ayuda de un microscopio de fluorescencia.
Microfotografía de un corte histológico de piel humana preparado por inmunofluorescencia directa utilizando un
anticuerpo anti IgG. La piel proviene de un paciente que padece lupus eritematoso sistémico y muestra depósitos
en dos diferentes lugares: el primero es un depósito con forma de banda a lo largo de la membrana basal de la
epidermis (por eso se lo denomina "ensayo de la banda de lupus", y en este caso es positivo). El segundo es
dentro de los núcleos de las células epidérmicas. En este caso el ensayo ha detectado anticuerpos antinucleares.
APLICACIONES.
 Como pudo haberse notado anteriormente, la inmunofluorescencia es una técnica
sumamente versátil, a la cual se han dado multiplicidad de usos en el ámbito
científico y clínico. Puede ser utilizada para responder preguntas ecológicas,
genéticas y fisiológicas respecto a muchos organismos.

 Entre las aplicaciones clínicas se emplea para el diagnóstico directo de algunas

enfermedades dermatológicas, bien sea empleando inmunofluorescencia directa o
indirecta sobre tejido epitelial de los pacientes estudiados.

 Se ha dispuesto de las técnicas de inmunofluorescencia en organismos unicelulares

como las levaduras para visualizar los microtúbulos intranucleares y citoplasmáticos,
actina y proteínas asociadas, los filamentos de 10nm y otros constituyentes del
citoplasma, de la membrana y las paredes celulares.
 INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
(IFI)
• La técnica se basa en el reconocimiento de los anticuerpos que
reconocen estructuras antigénicas celulares nativas.
• La IFI es una técnica de tamizado inicial que, de acuerdo a los
sustratos utilizados permite identificar los posibles antígenos
reconocidos por los autoanticuerpos presentes en los sueros de los
pacientes con enfermedades autoinmunes.
 ETAPAS
1 Antígeno
(sustrato)
Anticuerpo
especifico
Complejo
Antígeno-anticuerpo

Anticuerpo
antihumano
2 Antígeno conjugado con Fluorescencia
fluoresceína
 APLICACIONES
• Se utiliza en los estudios de autoinmunidad para la detección de
anticuerpos anti-DNA de doble cadena(DNAcd) o DNA nativo
(DNAn)
•  Proporciona un método de alta afinidad, confiable y sencillo para el
diagnóstico de esporotricosis cutánea.
 IFD
VENTAJAS DESVENTAJAS

• RAPIDO PORQUE SOLO • FALTA DE SENSIBILIDAD

SE UTILIZA UN PARA DETECTAR BAJOS
ANTICUERPO Y SE NIVELES DE EXPRESION
NECESITAN MENOS DEL ANTIGENO.
ETAPAS • NECESIDAD DE MARCAR
• UNION ESOECIFICA CADA ANTICUERPO DE
DEL ANTICUERPO INTERES: CONSUME
PRIMARIO. TIEMPO
• MENOS COSTOSO EN
COMPARACION
 IFI
VENTAJAS DESVENTAJAS

• MAYOR SENSIBILIDAD • SE REALIZAN MAS ETAPA

Y GENERAL UNA Y ES MAS COSTOSA QUE
SEÑAL MAS INTENSA. LA IFD.
• MAYOR • NECESITA MICROSCOPIO
AMPLIFICACION DE LA DE FLUORESCENCIA DE
SEÑAL DEBIDO A LA GRAN RESOLUCION AL
UNION DE VARIOS IGUAL QUE LA IFD.
ANTICUERPOS
SECUNDARIOS A CADA
ANTICUERPO
PRIMARIO
 PHOTOBLEACHING
ES LA DISMINUCIONDE LA INTENSIDAD DE EMISION DE LA MUESTRA DEBIDO A
LA DESCOMPOSICION IRREVERSIBLE DE LA FLUORESCENCIA DE LAS
MOLECULAS.

PARA REDUCIR ESTE EFECTO PODEMOS UTILIZAR ANTIFADING (GLICERINA) EN

LA PREPARACION DE LAMUESTRA.