ECLIA & EIA

LIC. T.M. FERREYRA HURTADO,

CHRISTIAN Y.
 ECLIA
HISTORIA:
La luminiscencia ha sido conocida
proximadamente desde 1667.
La existencia de la bioluminiscencia
fue reconocida por Boyle en Alemania
la describi como luz caliente.
En 1887, Rad Ziszewki descubri
algunos componentes qumicos que
tienen propiedades luminiscentes.

 ECLIA
En 1928, Abrech descubri las
propiedades del luminol un
componente el cual cuando se
oxida por medio de perxido de
hidrgeno emite luz como fotones
individuales.
El primer ensayo de
quimioluminiscencia fue descrito en
1976 con un reporte de Schroeder
et. al.; este ensayo utiliz como
 ECLIA
TECNOLOGA DEL ECLIA:
La tecnologa del eclia se basa
principalmente en la utilizacin de
dos componentes principales:
Tris-bipiridil-rutenio
Tripropilamina.

Ambos componentes mencionados
participan activamente en el
proceso de excitabilidad de la
reaccin electro-
 ECLIA
Para el desarrollo de los inmuno-
ensayos se utiliza un ester de N-
hidroxisuccinimida de un complejo
de Rutenio (bpy)3.
Este componente tiene la facilidad de
acoplarse a los grupos aminos de
los protidos, haptenos, AN, etc.
 ECLIA
Reaccin de ECLIA:
La reaccin de ECLIA tiene lugar en la
superficie de los electrodos de
platino.
En est superficie se forma un campo
elctrico por la utilizacin de un
voltaje determinado.
Los componentes ya mencionados
sufren excitacin por perdida de un
electrn en su configuracin
electrnica.
 ECLIA
Este voltaje transforma la
tripropilamina en radical TPA,
debido a la perdida de un electrn
y un protn.
En el caso de rutenio hay solo la
perdida de un electrn este
componente formado recibe el
nombre de catin de rutenio.

 ECLIA
El catin rutenio reacciona de esta
manera con el radical TPA,
produciendose un fenmeno
llamado reduccin.

R 3

3
R 2

3
 ECLIA
A travs de est reduccin se
produce la emisin de fotones a
una longitud de onda de 620 nm.
El cual el fotomultiplicador los capta
y transforma en absorvancia.
Est seal final resultante lo enfrenta
al factor de calibracin para
encontrar una concentracin
conocida con COI.

 ECLIA
Principios utilizados por CLIA:

Competitivo
Sndwich
Formacin de puentes.
 ECLIA
PARTES FUNDAMENTALES DEL
COBAS e 411:

ESTACIN DE MUESTRAS.

ESTACIN DE PROCESAMIENTO.

ESTACIN DE PROGRAMACIN.
 ECLIA
Estacin de muestras:
Se distinguen los siguientes
componentes:
Guia A,B,C.
Bandeja de entrada.
Bandeja de salida
 ECLIA
Estacin de procesamiento:
Pipetas de hamiltom
Pipeta s/r
Pipeta de procesamiento.
Gripper.
Cmara de incubacin.
Cmara de reactivos.
Set pro cell, clean cell
Copas de lavado


 ECLIA
REACTIVOS:

Los reactivos del equipo cobas e 411
y las otras generaciones de la marca
ROCHE, se ordenan de la siguiente
forma:
Microparticulas paramagneticas unido
a streptavidina
Ag/Ac unido a biotina
Ag/Ac unido a ritenio.
mp Ag/Ac - b Ag/Ac - R
EIA
 ELISA

La tcnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay).

Se basa en la deteccin de un antgeno inmovilizado sobre una fase

slida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una
reaccin cuyo producto por ejemplo un colorante, puede ser medido
espectofotomtricamente.
 Dispositivos empleados en ELISA

Fase solida

L o s le cto re s E L IS A so n e sp e ctro fo t m e tro s

Fases de un ensayo ELISA
 Tipos de ELISA
Competitivo
Directo

No competitivo
Indirecto

 ELISAs HETEROGENEOS
para detectar anticuerpos
Competitivo No competitivo
Detector limitante Detector en exceso

Ag marcado

Trazador Muestra
Muestra
< Marca > Ac especfico > Marca > Ac especfico

Ag
Fase slida
Ac anti Fc

Conjugado > Marca > Ac especfico

Muestra

Ag
 ELISAs para detectar anticuerpos
Directo Indirecto

Enzima
Fosfatasa alcalina; para nitro fenilfosfatasa
Peroxidasa. Anticuerpo s
conjugado
s anti-especie E P

E P

Ag

Fase Fase Ag
slida slida
 Elisa.
1. Generacin: Primeros ensayos usaban lisados
de VIH
purificado, a menudo les faltaba sensibilidad y
especificidad.

2. Generacin: Los ensayos mejorados basados

en
protenas recombinantes y/o los peptidos sintticos,
que
tambin permitieron la produccin de VIH 1 y 2
combinado.

3. Generacin: tipo sndwich, usan un antgeno

marcado como conjugado, muy sensibles.

4. Generacin: detectan antgenos y

anticuerpos,
reducen el perodo de ventana.
 Prefiramos tener 1
amigo verdadero en
donde compartamos
momentos de alegra
y algazara donde la
vida sea cada vez
mas fcil y
sencilla de ver y
luchar
A mi amigo kike el verdadero
amigo.