Histotecnología e Histoquímica:

TECNOLOGÍA MÉDICA
Histoquímica para pigmentos
Laboratorio Clínico y de Anatomía Patológica

Prof. Gian Carlos Ramirez Ubillus

Lic. TM en Laboratorio clínico y Anatomía Patológica
Mg. Ciencias en Investigación Epidemiológica
Especialista en Histotecnología
Xilol Xilol Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol Agua de
absoluto absoluto corriente corriente caño

Desparafinar Hidratar
Hematoxilina de Harris
Solución de trabajo de eosina
 -Eosina
+
-Eosina
-Eosina
Solución de trabajo de eosina Y
 Agua de Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol
Xilol Xilol
caño corriente corriente absoluto absoluto

5 lavadas 5 lavadas 5 lavadas 5 minutos 5 minutos 5 minutos 5 minutos

Deshidratar Desalcoholizar
y montar con
bálsamo de
Canadá
 Corte de hígado 40X
Qué señala el puntero
 Lipopigmentos exógenos (bcaroteno).
 Plata (argiria)
 Plomo (saturnismo)
 Polvos inhalados de carbón
 Hemosiderina.
 Bilirrubina.
 Melanina.
 Lipopigmentos endógenos.
Precauciones para la demostración:

Fijación
• Recomendable el alcohol corriente.

• Formol al 10%

• No usar fijadores oxidantes y ácidos.

Limitaciones:

• Solubilidad
La melanina se decolora en fijadores oxidantes

• Desplazamiento
Los depósitos de hierro trivalente son desplazados por los
fijadores ácidos
Requerimientos:
• Aplicable a:
• Secciones de tejidos fijados en formol al 10% y procesados por el
método de la parafina
• Secciones de tejidos obtenidos por el método de congelación

• Reacción visible

• Reacción estable “in situ”

• Criterios para validación del examen

histoquímico:

• Lámina patrón positivo.

• Lámina problema.
Pigmentos
(lat. pigmentum = color)

Sustancias que tienen color propio en estado natural,

presentes en la mayoría de seres vivos 1, no necesitan de
colorantes para ser observados. Hay que darles mayor
intensidad por medio de coloraciones o reacciones
histoquímicas para poder diferenciarlos.

1 MOHAN, Harsh: Patología, 6ª edición. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires,

Argentina 2010, p 40.
Clasificación según su
origen:
 Pigmentos exógenos.
 Pigmentos endógenos.
 Pigmentos exógenos
Son generados fuera del cuerpo e
introducidos a nuestro organismo desde el
exterior por inhalación, ingestión o
inoculación2.

2 MOHAN, Harsh: Patología, 6ª edición. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires,

Argentina 2010, p 43.
 Pigmentos ingeridos
 Lipopigmentos exógenos (bcaroteno).
 Plata (argiria)
 Plomo (saturnismo)
 Pigmentos inhalados:
 Polvos inhalados de carbón
 Pigmentos inyectados.
Pigmentos ingeridos
El caroteno
(lat. carota = zanahoria)

Pigmento vegetales que da a la zanahoria y al

tomate su color característico. Familia de
compuestos liposolubles que imparten color a
algunos componentes tisulares que contienen
grasa (hipodermis).
Carotenemia

Presencia de caroteno en la sangre, causado por

su consumo excesivo, quienes lo muestran tienen
aspecto ictérico. Raro en adultos, se observa en
bebés que toman demasiado jugo de verduras.
Minerales

Se ingieren o absorben por la superficie

del cuerpo. Por ejemplo, la acumulación
de plata imparte una pigmentación
grisácea al organismo, el plomo absorbido
forma una línea azul en las encías (ribete
de Burton).
Pigmentos inhalados
(polvo de carbón)
Captados por el organismo con el aire
inspirado, dan un color oscuro a los pulmones
de: fumadores por cúmulo de partículas de
carbón del humo del tabaco y a sujetos que
viven en la ciudad por cúmulo de partículas
de carbón del humo de escapes.
Partículas de carbón son tomadas por
los macrófagos, que se encuentran en
las paredes de los alvéolos pulmonares y
ser transportados por vía linfática.
Pigmentos inyectados
Tatuajes, se introducen pigmentos, como tinta
china y partículas de cinabrio (sulfuro de
mercurio) y carbón, en la dermis, donde estos
son captados por macrófagos, residiendo en el
tejido conectivo3

3 MOHAN, Harsh: Patología, 6ª edición. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires,

Argentina 2010, p 45.
Pigmentos endógenos

Son generados por el organismo, a

partir de precursores no pigmentados.
 Hemosiderina.
 Bilirrubina.
 Melanina.
 Lipopigmentos endógenos.
Hemosiderina

Se forma en los lisosomas secundarios a

partir de hemoglobina, es un pigmento
ferroso de color pardo dorado, se identifica
normalmente en macrófagos de bazo,
médula ósea e hígado (estadio fetal).
 Una vez que es absorbido, el hierro es
transportado en la sangre a través de la
transferrina en forma férrica

HEMOSIDERINA

APOFERRITINA FERRITINA
 Características:
 Es insoluble en álcalis
 Es soluble en soluciones ácidas fuertes.
 Después de la fijación con formol al
10%, es débilmente soluble en
soluciones ácidas diluidas.
Xilol Xilol Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol Agua de
absoluto absoluto corriente corriente caño

Desparafinar Hidratar
Métodos de estudio:
 Métodos histoquímicos
 Reacción de Perls.
 Fe(CN)6K4

Fe +++ [Fe(CN)6]3Fe4
Fe(CN)6K4

Fe+++ [Fe(CN)6]3Fe4
Fe(CN)6K4
Fe+++ [Fe(CN)6]3Fe4

Fe(CN)6K4
Fe+++ [Fe(CN)6]3Fe4

H.Cl
• Interpretación del examen histoquímico:
• Color
• Forma
• Lugar
40X

Los depósitos de hierro trivalente se

observarían de color azul de Prusia
con el método de Perls.
Melanina
Piel, cabello, coroides, cuerpo ciliar,
iris del ojo, leptomeninge y sustancia
negra del cerebro. Existe dos formas:
eumelanina de color negro parduzco y
feomelanina de color amarillo rojizo.
Los melanocitos contienen tirosinasa que
actua sobre el aminoácido tirosina, a partir
de aquí se producen reacciones y productos
intermedios, como la dopa
(dihidroxifenilalanina), para terminar por
último en melanina.
Características:

 Insoluble en agua y en los solventes

orgánicos.
 Se decolora por agentes oxidantes (H2O2,

KMnO4, KClO3).
 Es argentafín (método de Masson-Fontana).
 Es soluble en álcalis fuertes
Xilol Xilol Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol Agua de
absoluto absoluto corriente corriente caño

Desparafinar Hidratar
Una lámina se decolora por agentes oxidantes (H2O2,
KMnO4, KClO3).

Solución de agua oxigenada

Una lámina se decolora por agentes oxidantes (H2O2,
KMnO4, KClO3).
 Facultad de Tecnología Médica

A la otra lámina se le hace el método de

Masson-Fontana

Solución de nitrato de plata amoniacal

A la otra lámina se le hace el método de
Masson-Fontana
Plata amoniacal +1

+ Plata amoniacal +1

Plata amoniacal +1
Facultad de Tecnología Médica
Histotecnología e Histoquímica:
TECNOLOGÍA MÉDICA
Impregnaciones argénticas
Laboratorio Clínico y de Anatomía Patológica

Prof. Gian Carlos Ramirez Ubillus

Lic. TM en Laboratorio clínico y Anatomía Patológica
Mg. Ciencias en Investigación Epidemiológica
Especialista en Histotecnología
 CONTENIDO

 HISTORIA

 DEFINICIÓN

 FUNDAMENTO

 UTILIDAD
 CONTENIDO

 HISTORIA

 DEFINICIÓN

 FUNDAMENTO

 UTILIDAD
 Mecanimos para diferenciar estructuras en células/tejidos

NO Sí

¿Hay formación
 Cromóforo de algo nuevo?
 Cromógeno
 Auxocromo COLORACIÓN REACCIÓN HISTOQUÍMICA

Propiamente Histoquímica
dicha
 IMPREGNACIONES
 Hematoxilina  Alcian Blue
- eosina  IHQ
 Rojo de
 Azul de Congo - Luz
metileno polarizada
 Rx químicas de
desplazamiento
simple, doble, etc
Se hace uso de sales
metálicas (cromo, plata, oro,
etc) para originar precipitados
metálicos en alguna
estructura, objeto de estudio.
 CONTENIDO

 HISTORIA

 DEFINICIÓN

 FUNDAMENTO

 UTILIDAD
 ARGIROFILIA Ag+
Von Kossa, Warthin
- Starry, Gomori O-
para reticulina,
Grocott, etc.

SÍ, reductor
externo

ARGENTAFINIDAD
Masson Fontana,
Llombart, Río
Hortega, etc
Ag (0)
NO, reductor Ag+
externo
O-
Colágeno, -CHO = 0.55% Exposición de
KMnO4 - Oxidación grupos aldehídos
Reticulina, -CHO = 4.2% fibras reticulares

-
  Adición de disulfito de Neutralizar el exceso de
sodio/potasio o ácido oxálico oxidación

 NH4Fe(SO4)2 - Fe+3

SENSIBILIZACIÓN
 2 AgNO3 + 2 NaOH Ag2O + 2NaNO3 + H2O

 Ag2O + 4NH3 [Ag(NH3)2]2O

PLATA
AMONIACIAL
 [Ag(NH3)2]+

Sustitución
simple

[Ag(NH3)2]+ + CHOH = Ag (0)........

(FORMOL)
  Au₂Cl₆ Depósitos de Ag (0)

Depósitos
de Au (0)

Ag +
Ag +
 Na2S2O3
Ag +

Remueve la plata
no reducida
*RECOMENDACIONES:

¡Utilizar siempre controles y mantener la

limpieza de los materiales de vidrio!
 CONTENIDO

 HISTORIA

 DEFINICIÓN

 FUNDAMENTO

 UTILIDAD
Miofibroblasto
Muchas gracias
por su atención