Quimioluminiscencia

Licda. Karin Richter

Laboratorio de Serología y Genética
 Luminiscencia
Fenómeno producido
por las moléculas de
la materia, que al ser
lo suficientemente
excitadas, emiten luz
visible.

Bahía Mosquito, Isla Vieques, Puerto Rico

Plancton microscópico dinoflagelados
Generalmente, la luz(energía), proviene de
fuentes externas, como es el caso de la
electricidad en las lámparas de neón, o el calor
proveniente de una combustión.

Sin embargo, también es posible producir luz

por medio de reacciones químicas, con baja
producción de calor, aunque la emisión es
bastante breve, llamada luz fría
 Luminol
5-amino-2,3-dihidroftalazina-1,4-diona
 Bluestar
Es un compuesto químico que
exhibe quimioluminiscencia,
emitiendo luz azul al ser
mezclado con el agente
oxidante adecuado.
Es un sólido cristalino
cuyo color varía desde el
blanco al amarillo.

Es soluble en la mayoría
de disolventes polares,
como el dimetilsulfóxido,
pero es insoluble al
agua.
 Historia

• 1853 sintetizado por primera vez.

• 1938 Se descubre que el Luminol presentaba

luminiscencia en presencia de sangre.
• 1951: luminol, carbonato de sodio
(Na2CO3) y perborato de sodio (NaBO3)
y agua.

• Carbonato de sodio produce una

reacción lenta en el proceso de oxidación
de la hemoglobina.

• La vida útil de la solución corta, inestable y

tóxica, debido al perborato de sodio.
 • 1966, Weber:
Luminol, hidróxido de
sodio o potasio
(NaOH),
peróxido de hidrógeno
(H2O2) diluido en
agua destilada.
Vida útil corta.
Componentes de la reacción

1. Un medio alcalino (NaOH, Na2CO3), el

cual sirve para disolver y cargar
negativamente la molécula.
2. El oxidante (H202, NaBO3), libera y
reemplaza dos de los Nitrógenos, llevando
así a la molécula a un estado de
excitación.
3. Un catalizador Hierro (Fe) de la
Hemoglobina.

4. Finalmente se obtiene el luminol oxidado

y cargado, el fotón y Nitrógeno gaseoso,
luminiscencia.
El grupo hemo cataliza la oxidación de
luminol en solución alcalina.
Reacción positiva emisión de luz.
 Uso forense
Detectar trazas de sangre ya que ésta, cataliza
la oxidación del luminol con peróxido de
hidrógeno produciendo una emisión de luz.
 Identificación de
manchas de sangre
Es la primera y más importante etapa en la
investigación.

Los métodos se basan en la presencia de

células sanguíneas, proteínas séricas y
Hemoglobina.
 Muestra de sangre

Laboratorio
Muestra Hisopos
Serología

Pruebas
presuntivas
Pruebas presuntivas
• Fenoftaleina
• O-toluidina
• Tetrametilbencidina
• Verde de leucomalaquita
• Aminofenazona (4-amino-antipirina).
 FENOLFTALEÍNA
• Prueba de Kastle-Meyer (1903).
• Prueba presuntiva de sangre.
• Químico fenolftaleína detecta la posible
presencia de hemoglobina en:
– Tela
– Hisopo
– Levantado de un objeto (hisopo)
– Pañal
– Etc.
 FENOLFTALEÍNA
• La hemoglobina en la sangre tiene la capacidad
de oxidar la fenolftaleína que se torna visible en
color rosado brillante.
1. Se agrega una gota de fenolftaleína.
2. Se agrega una gota de peróxido de hidrógeno.
3. Si se torna rosado rápidamente es presuntiva de
sangre positiva.
4. Si se torna rosado después de 30 segundo es
negativa.
 Prueba
presuntiva/confirmatoria

Hematrace
 HEMATRACE
• Determinación de sangre humana.
• Reacción Ag – Ac.
• Ac presentes en la tarjeta HT, si el Ag está
presente (grupo hemo de la hemoglobina),
ocurre la reacción (T).
 CONFIRMACIÓN
• Ambas pruebas son presuntivas de sangre.
• Posterior a esto se confirma con análisis genético.
Pero cuando no hay mancha de sangre
visible….
La prueba de luminol es una
alternativa.

Genera resultados que indican la posible

presencia de sangre en patrones
luminiscentes observados tales como
arrastres, salpicaduras, impresiones de
calzado, entre otros.
 VENTAJAS
•Sensible. Diluciones hasta 1 ppm (partícula por peso
molecular).

•Permite tratar en forma rápida grandes

superficies para la localización no visible al
examen ocular directo (spray).
•No interfiere en la ejecución de ensayos
similares o de otro tipo.
•Casos de hasta 25 años de antigüedad.
• Revela patrones que fortalecen la historia
del hecho. (arrastres, salpicaduras, huellas,
recorridos, dirección, goteo, charco,
figuras, mensajes escritos, etc).

• No necesita equipo especial.

• En presencia de autoridades.
• Reacción rápida en segundos

• Puede documentarse con fotografías

 DESVENTAJAS
• NO ES CONFIRMATORIO: actividad
peroxidasa (ciertos metales, jugo de fruta,
detergentes y productos de limpieza en general).
• No determina si es humana o animal.
• La aplicación del reactivo y el levantamiento de
muestras realizada por personal calificado.
• Requiere oscuridad total.
• Alto costo.
 Uso eficiente del luminol
• No es aplicable en escenas ya documentadas o
con muestras ya tomadas.

• La información sobre el hecho permitirá en

determinando momento saber, qué demos
aplicar y en que forma.

• No aplicar indiscriminadamente ya que puede

darse a confusión con falsos positivos.
 Inconvenientes durante la
diligencia
• No recomendable en escenas abiertas al medio
ambiente.
• Presión de las partes y personas no autorizadas.
• Falta de previsión del equipo por parte de
especialistas o el perito.
• Manejo previo de la escena inadecuado (no se
levantaron muestras, no se cerró el local, investigación tardía,
vehículos capturados en predios sin protección, etc.)
 Falsos positivos
• Químicos oxidantes: Sales de Cu y Ni,
• Plantas: Peroxidasas (papa, rábano, manzana,
fresas)
• Sustancias de origen animal: Pus, saliva,
tejidos
 No es pertinente
• Cuando se observan manchas de posible
sangre.

• Exterior de vehículos que han

permanecido expuestos a la intemperie.

• En tierra
Se conserva el ADN
• Luminol, degrada el ADN
• Bluestar no degrada el ADN

Al usar Bluestar se puede determinar a

quién pertenecen las trazas de sangre y
células que se encontraron en la prueba
de quimioluminiscencia
 Muestra de sangre
luminiscencia
Laboratorio
Muestra Hisopos
Genética

Importante: tener
muestra de
ADN referencia con qué
comparar
 MANCHA SANGRE

ES SANGRE

ES SANGRE HUMANA

GRUPO SANGUINEO ABO

IDENTIFICACION - COTEJO
PROTEINAS

ADN
Dictámenes de ejemplo