Esterilización

Esterilización: eliminación de todos los microorganismos por remoción o

muerte, así como la eliminación de los virus

■ Métodos físicos ■ Destrucción de microorganismos

• Filtración* • Calor húmedo**
• Ultrafiltración* • Calor seco*
• Flotación • Radiación electromagnética (radiación UV,
• Atracción electrostática gamma y rayos X)*
• Radiación sónica
• Agentes químicos

* Se aplican a nivel industrial y planta piloto

** es el más utilizado a nivel industrial
Mortalidad térmica
La destrucción térmica de los microorganismos depende de muchos factores:
pH, estado de las células, presencia de iones metálicos, etc.
No. Sobrevivientes

B A: células vegetativas
(escala log)

A B: esporas bacterianas

C C: Organismos sensibles al calor

tiempo
B

Tasa de mortalidad
A

tiempo
Continuemos el análisis considerando una población de microorganismos que
está expuesta a condiciones letales y cuya cinética de extinción es
aproximadamente lineal

Gráfica A
Todas las células del cultivo son igualmente sensibles y el tiempo de extinción de
cualquier célula se determina por probabilidad
se demuestra

Considerando que la destrucción térmica de microorganismos es similar a una reacción de primer orden
No = numero inicial de células/mL
- (1)
N´ = numero de células destruidas
N = numero de células sobrevivientes
Kd = constante especifica de muerte

Como kd es función de la temperatura, la ecuación anterior puede integrarse a temperatura

constante:

(2)
= factor de inactivación

𝑁 = factor de supervivencia
=exp⁡(−𝑘¿¿𝑑𝑡)¿
𝑁0 criterio de diseño

Kd = constante especifica de muerte

Con respecto a Kd…
• Puede obtenerse experimentalmente a partir de la Ec(2) − 𝐸𝑎 / 𝑅𝑇
• Kd puede evaluarse en función de la ecuación de Arrhenius: 𝑘𝑑 = 𝐴𝑒

Material biológico T(C) K (E-03 seg- Ea(Cal/mol)

1)
Bacillus subtilis 110 450 74,000
Esporas B. subtilis 121.1 51.2 ---- Ea alta
Esporas de B. 104 0.57 67,000
estearothermophilus
Clostridium biotulinium 104 7.0 82,100
Enzimas y vitaminas ---- ---- 50,000-100,000
Células y esporas en --- --- 2000 – 20,000
germinación
Kd puede evaluarse en función de la ecuación de Arrhenius:

Para B. Subtillis
T(C) K (min-1)
100 0.019 ---
115 0.666 3.154
118 1.307 6.314
121 2.538 12.549
130 17.524 90.591
140 135.9
150 956.1
Esterilización por lote

■ Es el proceso más utilizado a nivel planta piloto y planta industrial

■ Los líquidos se esterilizan en los recipientes donde se van a utilizar
■ El líquido se calienta hasta la temperatura de esterilización al introducir
vapor en las chaquetas o intercambiadores
■ A veces el vapor se mete directo al medio, o el recipiente se calienta
eléctricamente
■ El vapor debe ser de buena calidad, para evitar contaminación.
Un perfil típico de
esterilization por lote…
■ Debemos estimar el tiempo de
mantenimiento requerido para alcanzar el
nivel requerido de destrucción celular
■ Pero la esterilización puede destruir también
los nutrientes
■ Entonces el tiempo de mantenimiento debe
ser lo más corto posible.
En la esterilización por lote cada etapa contribuye a la eliminación de microorganismos y por tanto se
puede hablar de un criterio de diseño total (total)

total = calentamiento + mantenimiento + enfriamiento

La total puede estimarse de acuerdo a su definición

total = V =

1/1000  la probabilidad de contaminación de 1 corrida

en mil falle

Por ejemplo:
No = 106/mL total = V = = 36.8
Vr = 10,000 L = 107 mL
N = 1/1000 cada etapa….
Recordemos que:

Y que Kd puede evaluarse en función de la ecuación de Arrhenius:

Por tanto para cada etapa, se puede integrar:

para la fase de calentamiento:

𝑡1
𝑁0
cal=ln =∫ 𝐴 𝑒
− 𝐸𝑑/ 𝑅𝑇
𝑑𝑡
𝑁1 0 para la fase de mantenimiento:
t1 = tiempo de 𝑡1 Y para la fase de enfriamiento:
𝑁1
mant=ln =∫ 𝐴𝑒
calentamiento − 𝐸𝑑/ 𝑅𝑇
𝑑𝑡 𝑁2
𝑡1
𝑁2 0 enfo=ln =∫ 𝐴 𝑒
− 𝐸𝑑/ 𝑅𝑇
𝑑𝑡
𝑁𝑓 𝑡 2
t2 = tiempo de
mantenimiento t3 = tiempo de
enfriamiento
Para resolver las ecuaciones se requiere
conocer los perfiles de temperatura – tiempo en
cada etapa

• No es posible completar la integración

de las ecuaciones hasta saber cómo varía
la temperatura con el tiempo durante los
periodos de enfriamiento y
calentamiento.
• Normalmente la muerte celular a
temperaturas por debajo de 100 °C es
mínima
• Usualmente el tiempo de mantenimiento
es del orden de minutos, mientras que
los de calentamiento y enfriamiento
puede durar horas, sobre todo cuando se
tratan elevados volúmenes.
• Si hay partículas sólidas en el líquido, se
generan gradientes de temperatura, y eso
hace requerir mayores tiempos de
mantenimiento
Ejemplo:
Procedimiento general para determinar las condiciones de esterilización en un proceso por
lote

1. Información requerida
a) Volumen de medio a esterilizar:60,000 kg de medio de cultivo
b) Temperatura inicial del medio:40 C
c) Nivel de contaminación: No = 105/mL
d) Nivel de esterilidad: N = 10-3/mL
e) Tasa especifica de desnaturalización de esporas: K = 7.94x10 38 exp (-68.7x108/RT)
f) EL medio se debe mantener a 120 C
g) Calentamiento por vapor directo a una tasa de 180 Kg/min a una presión de 4kg/cm 2
h) Enfriamiento con agua a 20C circulando a una tasa de 4x10 3 kg/min
i) El medio se enfría de 120 a 35C
j) El área de transferencia del fermentador es de 240 m2
k) El coeficiente global de transferencia: 600 kcal/m 2 h C

2. Se debe obtener el tiempo de duración de cada etapa y la correspondiente

3. solución

Se calcula la  total con No, N y el volumen total de medio

total = V = 36.4

Se calcula la calentamiento y  enfriamiento con la ecuación integrada y el perfil temperatura-tiempo

correspondiente :
𝑡1
𝑁0
cal=ln =∫ 𝐴 𝑒
− 𝐸𝑑/ 𝑅𝑇
𝑑𝑡
𝑁1 0
Proporciona t1 = 49.79 min

Se integra
 𝑡1
𝑁2
enfo=ln =∫ 𝐴 𝑒
− 𝐸𝑑/ 𝑅𝑇
𝑑𝑡
𝑁𝑓 𝑡 2

Proporciona t3 = 72.37 min

Se integra

Finalmente se calcula :
mantenimiento = total -calentamiento - enfriamiento
= 9.52
Considerando que la temperatura es constante y conociendo el valor de se despejar t:

t4 = 2.63 min
El ciclo completo de esterilización generalmente es de 3- 5 h y los valores típicos para cada etapa son:

calentamiento /total = 0.2

mantenimiento /total = 0.75 Tiene la mayor contribución
enfriamiento /total = 0.05