MUERTE TÉRMICA

Biotecnología Industrial
Escuela de Microbiología
Profesor: Wilman Alcaraz Zapata
 ¿ cuál es el objetivo?
 prevenir transmisión de enfermedades o
formas de vida no deseada al ambiente o
medio de cultivo.

 remover competencia por el medio de

cultivo.

 evitar la generación de tóxicos, cambios de

pH.
PROBLEMAS ASOCIADOS CON LA
NO ESTERILIZACIÓN

 desplazamiento del organismo deseado

 contaminación del producto final
 producción de sustancias no deseadas
 lisis del cultivo
 Descenso de la productividad
Precauciones para evitar la contaminación

 Inóculo puro
 medio de cultivo estéril
 aire estéril
 recipientes estériles
 sustancias que se adicionan estériles
 construcción y manejo del biorreactor de
manera adecuada para mantener la
asepsia
 MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN
1. DESTRUCCIÓN, MUERTE E INACTIVACIÓN
Fuego directo:
Es un proceso muy drástico se aplica en las bocas de los
recipientes y asas.
Calor:
Calor húmedo (autoclaves)
Calor seco (estufas)
Radiación:
Radiación UV (acondicionamiento de áreas)
Radiación GAMMA (Materiales sensibles al calor)
Agentes químicos:
Gases (áreas de trabajo)
2. REMOCIÓN FÍSICA
Filtración:
Aire, gases y líquidos
PROCESOS A GRAN ESCALA

De todos los métodos de esterilización disponibles,

entre los que se incluyen el tratamiento químico, la
exposición a radiación ultravioleta, rayos gamma y
rayos X, sonicación, la filtración y el calentamiento,
sólo los dos últimos se utilizan en operaciones a gran
escala.
 Calentamiento:
Esterilización
discontinua de líquidos
mediante calor
El líquido se calienta hasta alcanzar la temperatura
de esterilización ya sea:
introduciendo vapor en los serpentines o en la
camisa del reactor.
Introduciendo vapor directamente en el reactor o
calentando el recipiente utilizando energía eléctrica

Si se utiliza la inyección directa de vapor, debe

tenerse en cuenta la posibilidad de dilución del
medio debido a la condensación del vapor (10-20%
del volumen del líquido)
 EFECTOS ADVERSOS DE LA
ESTERILIZACIÓN

• Interacción entre los componentes del

medio de cultivo
– Generación de materia orgánica insoluble
– cambios de pH
– reacciones de oscurecimiento (reacción de
Maillard)

• degradación de compuestos
 ASPECTOS QUE SE DEBEN TENER EN
CUENTA EN LA ESTERILIZACIÓN

Debe poder calcularse el tiempo que es necesario

mantener el reactor a temperatura constante para
alcanzar el nivel de destrucción celular deseado.

Para minimizar la destrucción de los nutrientes, los

tiempos durante los que se mantiene el medio a la
temperatura de esterilización deben ser tan cortos
como sea posible.
La muerte celular se produce durante todo el proceso
de esterilización, incluyendo los períodos de
calentamiento y enfriamiento. El tiempo a temperatura
constante (periodo isotérmico), puede hacerse mínimo
teniendo en cuenta la destrucción celular que se
produce durante estos períodos.

Perfil típico de
temperatura vs tiempo
que se produce durante la
esterilización discontinua
de reactores.
 ESTERILIZACION POR CALOR

El número de
contaminantes presentes
en un medio de cultivo se
denomina No.

Durante el período de
calentamiento este
número se reduce a N1.

Al final del periodo isotermo el número de células es N2

y al final del período de enfriamiento es Nf.

ESTERILIZACION POR CALOR

Si se conocen No y Nf, se
puede calcular el tiempo (a
temperatura constante)
necesario para reducir el
número de células desde
N1 hasta N2, teniendo en
cuenta la cinética de
muerte celular.

Normalmente, el nivel de contaminación deseado se expresa como fracción de

una célula, que está relacionado con la probabilidad de contaminación.
Por ejemplo: para alcanzar un valor de Nf de 10-3 significa que se acepta el
riesgo de que no se alcance la esterilización al final del proceso en una carga
sobre 1000 realizada.
 Influencia de la temperatura (T) en la cinética de
muerte térmica

Fracción de
sobrevivientes

N= # de microorganismos
presentes a t=t

N0= # de microorganismos
presentes a t=0
 CINÉTICA DE MUERTE CELULAR
La pérdida de viabilidad celular (muerte) puede describirse
matemáticamente de la misma manera que la desactivación
enzimática
 CINÉTICA DE MUERTE CELULAR

Integrando esta expresión

se obtiene la ecuación
lineal que describe el
proceso de muerte celular
Ejemplo:

En un experimento llevado sobre muerte térmica,

se ha determinado que la concentración de
células viables (N) de un microorganismo en un
medio líquido desciende un tercio por cada 12
segundos que es sometido a una temperatura
constante de 60°C.
Bajo estas condiciones ¿cuál es el valor de la
constante de muerte térmica.
La concentración inicial de mo. (No) es de 4,3 x
109 microorganismos/mL.
Solución:
Cuántos microorganismos quedarán al cabo de 2
minutos de ser sometido a esta temperatura?.
CALCULO DE PARAMETROS CINETICOS PARA
MUERTE TERMICA

-Kd=constante de muerte térmica

Kd= Puede entenderse
como la medida de la
resistencia térmica del
microorganismo
La constante de muerte térmica para un microorganismo
dado, se correlaciona bien con la temperatura T a través de la
ecuación de Arrhenius

Ecuación de Arrhenius E= Energía de activación

A = factor exponencial o
constante de Arrhenius (s-1)
R =constante de los gases
(J/mol.ºK)
T = temperatura absoluta
(ºK)
Valores de energía de activación para algunos compuestos
o reacciones de presencia común en medios de cultivo
Esterilización con calor a temperatura variable
(factor nabla )
, corresponde a la reducción fraccional de t  Ln N o  Kd  t
microorganismos en el proceso de esterilización N

Constituye una metodología apropiada para casi todos los

propósitos de la esterilización por calor con temperatura
variable.

Ej: Si se desea esterilizar 10000L de un caldo de cultivo con una

población inicial de 1000 esporas/ml y si se acepta que el número
final de esporas viables es N=0,0001; entonces el nabla total (t )
sería:

t
Sin embargo, en un
proceso de esterilización
real, la temperatura varía
con el tiempo, por lo
tanto, la fracción de
supervivencia cambia y
se representa de la
siguiente manera
   Ea    Ea 
ts te
No
t  Ln  K o  exp  dt  Kd * t s  K o  exp  dt
N to  RT  ts  RT 
 total    enfr.  mant.
Se asume que: VARIACIÓN LINEAL

•Nabla de enfriamiento y calentamiento varían en forma lineal.

•Ocurre un número apreciable de muertes de contaminantes a partir
de temperaturas mayores a 1000C.
•Se asume despreciable las secciones de estas curvas por debajo de
100ºC.
 Tabla de Richards

Permite correlacionar las

etapas de calentamiento y
enfriamiento con el
incremento de
temperatura
Ej: esterilización de un caldo de cultivo
• Volumen reactor = 1.000 L
• Carga = 105 esp./mL
• Carga final deseable de esporas = 10-3
• Equipo = tiempo de calentamiento=21 min.
tiempo de enfriamiento=21 min.

Ln N0/N=k.t

Calcular el ?????
 Por tabla de Richards para 21 minutos
cal.  12.549  enf .

total    enfr.  mant.

32.2 12.549 12.549

Representa un criterio de diseño Se asume:

de un proceso *destrucción de esporas a partir
de los 1000C
*calentamiento y enfriamiento
lineal
mant .  k .tmant.  tmant.  mant . / k
Por tabla de Richards=2.53

Cuánto será el tiempo de

mantenimiento???