PRÁCTICA 7

Práctica 7. Esterilización del sistema de biorreacción

Esterilización de medios de
Cultivo en biorreactores

INTRODUCCIÓN

Un medio de cultivo contiene varios compuestos que aportan los distintos elementos
necesarios para hacer crecer y producir al microorganismo de interés, entre los que
sobresalen por su cantidad las fuentes de carbono, nitrógeno, fósforo, potasio, magnesio y
azufre (macroelementos). También es necesario adicionar otros compuestos que
aportarán los microelementos (Fe, Mn, Zn, Cu, Co, etc.). A excepción de la fuente de
carbono, todos los demás elementos son proporcionados como sales al medio de cultivo.
En la Tabla 1 se observan algunas sales que se utilizan en la formulación de medios de
cultivos.

Tanto el agua, como las distintas sales y las fuentes de carbono que se utilizan en la
formulación y preparación de los medios de cultivo no están estériles y pueden llegar a
contener una gran cantidad y variedad de microorganismos, que de permanecer viables
en el medio pueden a llegar a competir por el sustrato con el microorganismo de interés y
hacer que la biorreacción no alcance los rendimientos óptimos o la productividad máxima.
La contaminación microbiológica trae como consecuencia, en el mejor de los casos: una
disminución en la productividad o la pérdida total del lote de producción. Por lo que desde
el punto de vista técnico y económico la contaminación es indeseable en una biorreacción.

La esterilización es todo proceso mediante el cual los microorganismos pierden su

capacidad reproductiva. Esta se puede llevar a cabo por varios métodos entre los que se
encuentran los siguientes:

• Con calor húmedo para medios de cultivo, biorreactores y tuberías.

• Con microfiltración para aire

9
Entre las razones que existen para realizar la esterilización de un medio de cultivo que se
empleará para la producción de algún metabolito están:

• Maximizar la productividad (evitando la competencia por el sustrato entre los

microorganismos contaminantes y los empleados en el proceso fermentativo).
• Evitar la dispersión al ambiente de microorganismos patógenos o potencialmente
patógenos.
• Evitar la contaminación del producto (fármacos inyectables y productos
relacionados).

Tabla 1.- Algunas sales utilizadas en la formulación de medios de cultivos.

SAL ELEMENTO CONCENTRACIÓN
QUE APORTA
CaCl3 Ca 50 g a 500 mg
CuSO4 Cu, S 80 g
FeCl3, FeSO4 Fe, S 1 g a 70 mg
KCl, KI, K2HPO4, KH2PO4 KoP 200 g a 7 g
MgCl2, MgSO4 Mg, S 02 a 10 g
MnCl2, MnSO4 Mn, S 30 g a 100 mg
NaCl, NaHPO4, Na2SO4 Na, P, S 50 a 100 mg
Na2MoO4 Mo 10 g
(NH4)Cl, (NH4)2SO4, (NH4)2HPO4 N, NH4 0.2 a 8 g
ZnSO4 Zn, S 80 g a 7 mg
H3BO3 B 200 g

Por ello, una esterilización adecuada del medio de cultivo es importante para garantizar el
éxito de muchas fermentaciones industriales.

Por su simplicidad, confiabilidad y economía, el método que se utiliza con mayor

frecuencia para esterilizar medios líquidos es la aplicación del calor húmedo.

La esterilización de medios de cultivo con calor húmedo puede efectuarse en procesos por
lote o continuos. En los procesos continuos el medio por lo general fluye, a través de un
determinado circuito de tuberías, a alta temperatura, mientras que en los procesos en lote
el medio por lo general está confinado en un determinado recipiente (un matraz, un
biorreactor, etc.).

ESTERILIZACIÓN EN LOTE DE MEDIOS DE CULTIVO.

Cuando se esteriliza con calor húmedo un medio de cultivo contenido en un biorreactor

en un proceso por lote, el medio se calienta desde la temperatura ambiente hasta la
temperatura de esterilización, una vez que se alcanza esta se mantiene durante un

10
determinado tiempo y entonces se procede a enfriar el medio hasta la temperatura de la
fermentación (Figura 1). Así se distinguen las siguientes 3 etapas que componen al “ciclo
de esterilización”:
1) Calentamiento (desde la temperatura ambiente hasta la temperatura de
esterilización).
2) Mantenimiento de la temperatura de esterilización (durante un determinado
tiempo).
3) Enfriamiento (desde la temperatura de esterilización hasta la de operación de la
biorreacción).

Existen distintas formas de calentar y enfriar el medio de cultivo contenido en el

biorreactor (inyección directa de vapor al medio de cultivo; calentamiento con vapor a
través de la chaqueta; calentamiento con vapor a través de serpentines inmersos en el
medio; calentamiento con resistencias eléctricas; enfriamiento con agua a través de la
chaqueta; enfriamiento con agua a través de serpentines inmersos en el medio). El perfil
temperatura-tiempo durante las etapas de calentamiento y enfriamiento dependerá de la
forma en que se lleve a cabo la transferencia del calor. En la Tabla 2 se muestran las
relaciones temperatura-tiempo de acuerdo a la forma en la que se transfiere el calor.

Tomando como ejemplo “didáctico” los resultados mostrados en la Figura 1, se puede

decir que en dicho proceso se aplicó una determinada cantidad de trabajo calórico que dio
como resultado una cierta efectividad en el proceso de esterilización. Lo importante del
caso es saber “cuantitativamente” que tan efectivo fue ese proceso o el de otros procesos
similares. Para ello se debe conocer a fondo la “Cinética de Muerte Térmica”.

11
Tabla 2.-Perfiles temperatura - tiempo de diferentes formas de calentamiento de medios
de cultivo contenidos en biorreactores.
Adición constante  t  hs  = s/ M
T = T 0 1 +  =
de vapor al  1 + t  MC p T0
medio.
(HIPERBÓLICO)

Calentamiento T = T0 (1 + t ) Q
=
eléctrico MC p T0
(LINEAL).

Calentamiento T = TH (1 +  e −t )  = Ua / ( MC p ) T0 − TH
=
por vapor en TH
chaquetas
(LOGARÍTMICO)

Enfriamiento a T = Tco (1 + e − t ) WC p ' 

 UA   T0 − Tco
 −
WC '  
 =
través de  = 1 − e  p   Tco
chaquetas  MC p  
LOGARÍTMICO

En la que: T = Temperatura absoluta (K).

T0 = Temperatura inicial del medio (K).
t = Tiempo de exposición al calor (min).
h = Entalpía de vapor relativo a la temperatura del medio (BTU/lb).
s = Velocidad de flujo de vapor (Lb/min).
M = Masa del medio inicial (Lb).
Cp = Calor latente de vaporización (BTU/Lb K).
Q = Tasa de transferencia de calor (BTU/min).
TH = Temperatura de la fuente de calor ( K).
TCO = Temperatura del fluido de enfriamiento ( K)
U = Coeficiente de transferencia de calor [BTU/(min ft2 K)].
a = Área superficial sometida al calentamiento (ft2).
W = Flujo del fluido de enfriamiento (lb/min).
Cp' = Calor específico del fluido de enfriamiento (BTU/LbK).

12
CINÉTICA DE MUERTE TÉRMICA

La muerte de los microorganismos por calor húmedo sigue una reacción de primer orden,
por lo que la velocidad de muerte térmica es proporcional al número de individuos
presentes y su expresión matemática es:

dN/dt = - KN (1)

El signo negativo en la ecuación 1 se debe a que los microorganismos están muriendo

durante el tratamiento térmico. Su forma es la de una ecuación diferencial de variables
separables, por lo que puede ser integrada entre límites definidos. Si el proceso se
realizara a temperatura constante, al integrar la ecuación 1 entre límites definidos se
obtendría:

𝑁 𝑡
∫𝑁0 𝑑𝑁⁄𝑁 = ∫0 −𝐾𝑑𝑡 ln N0/N = Kt (2)

Ecuación en la que N0 es el número total de individuos o esporas viables al inicio del

tratamiento térmico, N sería el número total de individuos o esporas viables al final del
mismo y K es la constante de la velocidad de reacción que varía con la temperatura en una
forma semejante a la ecuación de Arrhenius.

K = Ae( − E A / RT ) (3)

En esta ecuación (3):

• K = Constante de velocidad de la reacción [=] min-1.
• A = Constante de Arrhenius para la velocidad de muerte térmica [=] min-1.
• EA = Energía de activación [=] cal/mol.
• R = Constante universal de los gases = 1.9872 cal/(Mol K)
• T = Temperatura absoluta [=]K.

Los valores de A y EA de los distintos microorganismos, varían de acuerdo a la especie y al

estado fisiológico en el que se encuentren (vegetativos o en forma de esporas).
Normalmente las esporas resisten mucho más el tratamiento térmico, por lo tanto,
deberá elegirse un microorganismo de referencia que sea aquél que soporte más el
tratamiento térmico. Se da por entendido que destruyendo a este, se destruirán todos los
demás que son más sensibles a él. En varios trabajos relativos a esta área se toma como
microorganismo de referencia a las esporas de Bacillus stearothermophilus. Los valores de
Ea y A para este género microbiano se muestran a continuación:
Ea = 67480 cal/mol
A = 4.93x1037 min-1

13
Si se define un “Criterio Total de Diseño (tot)” como el logaritmo natural de la relación
N0/N o [lnN0/N = tot], la ecuación 1 se transformaría en:

𝑁 𝑡
∫𝑁0 𝑑𝑁⁄𝑁 = 𝑙𝑛 𝑁0 ⁄𝑁 = ∇ = ∫0 𝐾𝑑𝑡 (4)

El problema con la integración de la parte derecha de las ecuaciones 2 o 4, es que “K” no

es constante en 2 de las 3 etapas que componen al ciclo de esterilización (sólo es
constante en la etapa de mantenimiento de la temperatura), por lo que se debe conocer
la funcionalidad de “K” con la temperatura. En las etapas de calentamiento y enfriamiento
la temperatura varía con el tiempo (como ya ha sido indicado) y en la integración se
tendría que considerar la ecuación que define el perfil temperatura - tiempo. Una solución
al problema es aplicar propiedades de logaritmos e integrar por partes la ecuación entre
límites bien definidos. Así se obtiene:

𝑡
𝑙𝑛 𝑁0 ⁄𝑁1 = ∫𝑡 1 𝐾𝑑𝑡 = ∇𝑐𝑎𝑙 (5)
0

𝑡
𝑙𝑛 𝑁1 ⁄𝑁2 = ∫𝑡 2 𝐾𝑑𝑡 = 𝐾(𝑡2 − 𝑡1 ) = ∇𝑚𝑎𝑛 (6)
1

𝑡
𝑙𝑛 𝑁2 ⁄𝑁 = ∫𝑡 𝐾𝑑𝑡 = ∇𝑒𝑛𝑓 (7)
2

𝑙𝑛(𝑁0⁄𝑁) = 𝑙𝑛 (𝑁0 ⁄𝑁1 ) + 𝑙𝑛 (𝑁1⁄𝑁2 ) + 𝑙𝑛 (𝑁2 ⁄𝑁) (8)

∇ 𝑇𝑜𝑡 = ∇𝑐𝑎𝑙 + ∇𝑚𝑎𝑛 + ∇𝑒𝑛𝑓 (9)

Ecuaciones en las que (ver Figura 2):

• “to” es el tiempo inicial del ciclo total o de la etapa de calentamiento.
• “t1” es el tiempo final de la etapa de calentamiento e inicio de la etapa de
mantenimiento.
• “t2” es el tiempo final de la etapa de mantenimiento e inicio de la de enfriamiento.
• “t” es el tiempo final de la etapa de enfriamiento o del ciclo total.
• “N0” es el número total de individuos viables al inicio del ciclo total o del inicio de
la etapa de calentamiento.
• “N1” es el número total de individuos viables al final de la etapa de calentamiento
o inicio de la etapa de mantenimiento.
• “N2” es el número total de individuos viables al final de la etapa de mantenimiento
e inicio de la de enfriamiento.
• “N” es el número total de individuos al final de la etapa de enfriamiento o final del
ciclo.
• “tot” es el criterio total de diseño.
• “cal” es el criterio de diseño de la etapa de calentamiento.
• “tot” es el criterio de diseño de la etapa de mantenimiento.
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 • “tot” es el criterio de diseño de la etapa de enfriamiento.

DISEÑO DEL CICLO DE ESTERILIZACIÓN.

Como puede apreciarse de la Figura 2, la muerte térmica de los microorganismos ocurre

en cada una de las etapas en que está constituido el ciclo de esterilización. Teóricamente
el valor del criterio total de diseño (tot) se ha propuesto para obtener una baja
"probabilidad" de sobrevivencia de las esporas de un microorganismo de referencia:
Bacillus stearothermophilus. Puesto que el valor de “N” no puede ser cero de acuerdo a la
ecuación 4, una buena práctica de esterilización exige el cumplimiento de los siguientes 2
puntos: 1) que en la esterilización de 1000 lotes al menos 1 resulte contaminado (1/1000),
o lo que es lo mismo N = 10-3 y 2)la consideración de que el número de esporas(n0) de B.
stearothermophilus presentes en el material sea del orden de 104 a 106esporas/ml (así el
valor de N0 queda determinado como: “N0= n0*Vop).

De esta manera y en acuerdo con las buenas prácticas de esterilización, el valor del
criterio total de diseño (tot) variará con el volumen de operación y con el valor a elegir de
N0 (recordar que N0 = n0*Vop). Así por ejemplo, aplicando estos criterios para un volumen
de operación de 100 m3 dicho valor debería oscilar entre 34.54 y 39.14 para obtener una

15
esterilización adecuada (un valor de N = 10-3), mientras que para un volumen de 0.01 m3
(10 litros) el valor oscilaría entre 25.33 y 29.93, como puede observarse de los siguientes
cálculos:

Vop = 100 m3.

n0 = 104esporas/ml
N0 = n0*Vop = 104*100*106 = 1012
N = 10-3
 = Ln (N0/N) = Ln (1012/10-3) = Ln 1015 = 34.54

Vop = 100 m3.

n0 = 106esporas/ml
N0 = n0*Vop =106*100*106 = 1014
N = 10-3
 = Ln (N0/N) = Ln (1014/10-3) = Ln 1017 = 39.14

Vop = 0.01 m3.

n0 = 104esporas/ml
N0 = n0*Vop =104*0.01*106 = 108
N = 10-3
 = Ln (N0/N) = Ln (108/10-3) = Ln 1011 = 25.33

Vop = 0.01 m3.

n0 = 106esporas/ml
N0 = n0*Vop =106*0.01*106 = 1010
N = 10-3
 = Ln (N0/N) = Ln (1010/10-3) = Ln 1013 = 29.93

De acuerdo con estos valores, si en un proceso de esterilización de un medio de cultivo

contenido en un biorreactor de 100 m3 se alcanzara un valor de tot de 30, el proceso de
esterilización se calificaría como “subdiseñado” y el medio de cultivo tendría el riesgo de
“no estar adecuadamente esterilizado” ya que el valor de tot debería estar entre 34.54 y
39.14. Por el contrario, si se alcanzara un valor de 44, el medio estaría “adecuadamente
esterilizado” pero el proceso térmico habría gastado energía de más, estaría
“sobrediseñado”. En ingeniería tanto el “sub” como el “sobre” diseño están igualmente
penados tanto técnica como económicamente.

16
CÁLCULO DE LA EFECTIVIDAD DE UN PROCESO DE ESTERILIZACIÓN EN LOTE CON CALOR
HÚMEDO.

Como ya se mencionó anteriormente, lo importante del caso en un proceso de

esterilización en lote y con calor húmedo de un medio de cultivo en un biorreactor, es
saber “cuantitativamente” que tan efectivo fue dicho proceso (conocer el valor obtenido
de tot).

Existen 4 formas de conocer dicha efectividad. Cada una de ellas tiene sus ventajas y
desventajas. Estas 4 formas son:

1) Método experimental.
2) Método analítico.
3) Método gráfico.
4) Método de Richards.

El método experimental consiste básicamente en lo siguiente: se inocula un determinado

volumen de medio de cultivo contenido en un biorreactor con una cierta cantidad de
esporas de B. stearothermophilus, se procede a realizar el proceso térmico de
esterilización y se toman muestras al inicio y al final de cada una de las etapas que
componen al ciclo, para conocer el número total de esporas sobrevivientes (N0, N1, N2 y N
respectivamente) y así obtener el criterio total de diseño (tot) de acuerdo con la ecuación
4. Industrial y prácticamente este método no es aplicable. Entre las múltiples desventajas
de este método se encuentran las siguientes:
1. Consumidor de tiempo, de reactivos y de materiales.
2. Costoso.
3. Sujeto a la probabilidad de que en la muestra tomada se encuentren los
microorganismos sobrevivientes.
4. El mínimo valor de “N” que se puede obtener está comprendido entre 1 y 0 (no
cabe la posibilidad de obtener un valor de N = 0.001).

El método analítico consiste en resolver analíticamente las ecuaciones 5 y 7 al considerar

las formas en las que se transfirió el calor durante las etapas de calentamiento y
enfriamiento (Tabla 2) para así obtener el criterio de diseño de cada una de estas etapas
(cal y enf). La solución de la ecuación 6 es directa y da el valor de man. Una vez obtenido
los valores de los criterios de diseño de cada una de las etapas, la suma de las mismas es
el criterio total de diseño (tot) del ciclo de esterilización (ecuación 9).

El método gráfico consiste en graficar los valores de “k” en función del tiempo durante
todo el ciclo de esterilización (Figura 3). Las áreas bajo las curvas de cada una de las etapas
son las soluciones de las integrales de las ecuaciones 5, 6 y 7 respectivamente. Así se
obtienen los valores de los criterios de diseño de las etapas de calentamiento,
mantenimiento y enfriamiento, por lo que la suma de cada uno de los valores obtenidos
será el valor del criterio total de diseño (tot).

17
En el método de Richards, el autor, basado en la observación y análisis de distintos perfiles
temperatura - tiempo encontrados en la industria, realiza 2 suposiciones: i) temperaturas
menores a 100 ºC tienen un efecto despreciable sobre la muerte térmica de B.
stearothermophillus y sobre latot ; ii) la velocidad de calentamiento y enfriamiento en los
intervalos de temperatura comprendidos entre 100ºC y la de esterilización tienen perfiles
lineales con pendientes absolutas de 1 °C/min.

Con dichas consideraciones se puede construir una tabla de valores de K y de valores

acumulativos de para temperaturas mayores a 100 ºC y con incrementos de 1 ºC por
minuto (Tabla 3)

18
Tabla 3. Valores acumulativos de  para B. stearothermophilus con EA = 67480 cal/mol y A
= 4.93x1037 min-1.
T ºC K(min-1)  T ºC K(min-1)  T ºC K(min-1) 

100 0.0143 0.0000 112 0.244 1.12 124 3.51 17.7

101 0.0182 0.0325 113 0.307 1.43 125 4.35 22.05

102 0.0232 0.0558 114 0.385 1.81 126 5.39 27.45

103 0.0296 0.0854 115 0.483 2.29 127 6.67 34.11

104 0.0376 0.1229 116 0.605 2.90 128 8.24 42.36

105 0.0477 0.171 117 0.757 3.66 129 10.18 52.54

106 0.0604 0.231 118 0.945 4.60 130 12.55 65.08

107 0.0765 0.308 119 1.18 5.78 131 15.46 80.54

108 0.0967 0.404 120 1.47 7.25 132 19.02 99.56

109 0.122 0.526 121 1.83 9.08 133 23.38 122.95

110 0.154 0.681 122 2.28 11.36 134 28.71 151.66

111 0.194 0.875 123 2.83 14.19 135 35.23 186.89

Los valores acumulativos de  mostrados en la tabla, se obtienen considerando que el

valor de este parámetro a 100 ºC es cero, así, al realizar una integración por "pasos" a
intervalos de 1 minuto se van obteniendo dichos valores acumulativos. Lo anterior
permite el cálculo de una forma rápida, simple, pero muy aproximada de un proceso de
esterilización con sólo conocer los tiempos requeridos: i) para pasar de 100 °C a la
temperatura de esterilización (calentamiento); ii) de mantenimiento de la temperatura de
esterilización; iii) para pasar de la temperatura de esterilización hasta 100 °C durante el
enfriamiento. El siguiente ejemplo dará una idea del procedimiento de cálculo.

EJEMPLO 1. Los tiempos de calentamiento, mantenimiento y enfriamiento de un proceso

de esterilización fueron los siguientes:
Calentamiento de 100 a 121°C = 35 minutos.
Mantenimiento a 121 °C = 10 minutos.
Enfriamiento de 121 a 100°C = 20 minutos.
Calcule el valor de tot alcanzado en dicho proceso.

SOLUCION.- La Tabla 3 indica que al pasar de 100 a 121 ºC el valor acumulativo de  es de

9.08, y aunque no lo indique directamente, el tiempo tomado es de 21 minutos
(correspondiente a un incremento de temperatura de 1 ºC por minuto). Si el proceso
hubiese requerido 21 minutos en pasar de 100 a 121°C el criterio de diseño de

19
calentamiento (cal) sería 9.08 (indicado en la Tabla 3). Sin embargo, en este ejemplo se
toman 35 minutos, por lo que el valor de cal (para este caso) se puede calcular
multiplicando el valor de 9.08 por un factor obtenido de la división del tiempo real del
proceso entre 21 minutos que es el ideal. De la siguiente manera:

cal = 9.08*35/21 = 15.13

De forma análoga se puede calcular el valor del criterio de diseño de la etapa de

enfriamiento (enf):

enf = 9.08*20/21 = 8.65

El valor del criterio de diseño para la etapa de mantenimiento se puede calcular de la

siguiente manera:

( )
 mant = k * t = A e − E A / RT t = 4.93  1037  e −67480 /(1.9872 394 )  10 = 18.31
 

Por tanto, el valor alcanzado del criterio total de diseño en este proceso sería:

tot = cal + man + enf = 15.13 + 18.31 + 8.65 = 42.09

OBJETIVO

El alumno aplicará los procedimientos para la esterilización en lote de un medio de cultivo

en un biorreactor, con calor húmedo y conocerá la forma de calcular la efectividad del
mismo.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

• Agregar 12 litros de agua al biorreactor e inocular con esporas de Bacillus

stearothermophilus para tener un determinado valor de N0 (el profesor les indicará
el valor apropiado de este valor).
• Cerrar todas las válvulas que conectan con el interior del biorreactor, excepto la de
la purga de aire. Esta deberá permanecer abierta hasta alcanzar la temperatura de
ebullición.
• Establecer la temperatura de esterilización (a elegir 115, 118 o 121 °C).
• Inyectar vapor a la chaqueta del biorreactor para iniciar la etapa de calentamiento
(anotar la presión de vapor a la entrada de la chaqueta). Tomar una muestra del
medio de cultivo contenido en el biorreactor y tomar lecturas de la temperatura
del medio de cultivo cada minuto durante todo el ciclo de esterilización. La
muestra se denominará MN0.

20
 • Aproximadamente 2 minutos después de alcanzada la temperatura de ebullición o
cuando salga un rosario de vapor continuo a través de la válvula de purga, cierre
esta válvula. No deje de tomar las lecturas de temperatura contra tiempo.
• Alcanzada la temperatura de esterilización, con sumo cuidado y siguiendo las
instrucciones del profesor, tomar una muestra del medio de cultivo. Esta muestra
se denominará MN1.
• Mantener la temperatura de esterilización durante un tiempo determinado (a
elegir 8, 12 y 15 minutos).
• Al final de la etapa de mantenimiento de la temperatura, con sumo cuidado y
siguiendo las instrucciones del profesor, tomar una muestra del medio de cultivo.
Esta muestra se denominará MN2.
• Inmediatamente después de terminar el tiempo de mantenimiento, cerrar la
válvula de entrada de vapor y empezar a introducir el agua de enfriamiento a
través de la chaqueta para enfriar el medio (se debe conocer el flujo del agua de
enfriamiento y su temperatura de entrada).
• Alcanzada la temperatura de fermentación (o si lo desea al alcanzar 45°C), se toma
la última muestra con los mismos cuidados que las tomas anteriores. Esta muestra
se denominará MN.
• De cada una de las muestras tomadas, se hace una dilución seriada y se siembran
por vaciado en placa y por duplicado en cajas de Petri (con medio de agar
nutritivo) las últimas tres diluciones de cada serie. Se incuban a 30 °C. Realizar el
conteo de colonias cada 24 h, durante tres días.

En la Tabla 4 se muestran las diluciones sugeridas para cada una de las muestras o series.
Pueden cambiar de acuerdo a las instrucciones del profesor.

Tabla 4.- Diluciones sugeridas a realizar para cada una de las muestras tomadas durante el
ciclo de esterilización.
MUESTRA SERIE DE DILUCIONES
MN0 10-1 a 10-8
MN1 10-1 a 10-7
MN2 10-1 a 10-4
MN 10-1 a 10-3

FORMULACIÓN DE RESULTADOS

1) Presente los valores de temperatura y tiempo para el ciclo de esterilización en

forma de tabla.
2) Grafique el perfil de Temperatura VS tiempo del ciclo total de esterilización,
distinguiendo las etapas de calentamiento, mantenimiento y enfriamiento.
3) Obtenga los valores experimentales de N0, N1, N2 y N y con ellos calcule los
criterios de diseño para cada una de las etapas del ciclo de esterilización, así como
el valor del criterio total de diseño (tot) alcanzado en el proceso térmico.

21
 4) Apoyándose en el método de Richards, calcule los valores de los criterios de diseño
para cada una de las etapas del ciclo de esterilización,así como el valor del criterio
total de diseño alcanzado en el proceso térmico.
5) Compare los valores obtenidos de los criterios de diseño con el método
experimental (punto 3) y con el método de Richards (punto 4) y obtenga sus
conclusiones.
6) En caso de que la esterilización haya sido sub o sobrediseñada (de acuerdo a las
buenas prácticas de esterilización), proponga sus alternativas para que en el
proceso se alcance una población final de microorganismos viables de 10 -3
(probabilidad de que en mil lotes a esterilizar, uno resulte contaminado).

BIBLIOGRAFÍA

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