Diseño de un ciclo de esterilización

1. Breve introducción
La esterilización lo definiremos como el proceso de eliminación de la capacidad de reproducción de
los microorganismos no deseados en un medio de cultivo. En este sentido, el diseño del ciclo de este-
rilizaión está dirigido a eliminar los microorganismos que en un inicio vienen con el medio de cultivo,
una vez que este se prepara. Para esto, se debe comprender la relación que existe entre la velocidad
de muerte térmica de los microorganismos y las variables del proceso como la temperatura.

El criterio de diseño de un proceso esterilización está definido como

 
n0
∇ = ln (1)
nf
donde n0 y n f son las concentraciones de microorganismos viables al inicio y al final del proceso
de esterilización, respectivamente. Dado que en un inicio, el medio de cultivo recien preparado tiene
una carga microbiana baja, el valor de la concentración de células viables al inicio es n0 = 6 × 1012
por cada litro de medio de cultivo. Pero en el caso de la concentración de células viables final se
elije como n f = 0.001 por litro. No es que esta concetración de células viables sea real, más bien, la
debemos entender como la probabilidad de que uno de cada mil lotes salga contaminado. Ası́, el nivel
de esterilización que es deseable en cualquier proceso de esterilización es
 
6 × 1012
∇ ≥ ln = 34
1 × 10−3
Analı́ticamente, el criterio de esterilización ∇ lo podemos expresar como
Z tf
∇= k(t, T (t))dt (2)
t0
donde k(t, T (t)) es la función velocidad de muerte térmica del microorganismo modelo, que en este
caso es Bacillus stearothermophilus. La función que describe la velocidad de muerte térmica es la
ecuación de tipo Arrhenius:
 
Ea
k(t, T (t)) = k0 exp − (3)
RT (t)
Como se puede ver en la ecuación (3), la velocidad de muerte térmica, y en consecuencia el criterio
de diseño del proceso esterilización, depende del perfı́l de temperaturas T (t) que describe al proceso
de esterilización.

Tı́picamente, un proceso de esterilización por lotes se lleva a cabo mediante lo que se conoce como
cı́clo de esterilización (ver Figura 1).

Este ciclo consiste en una etapa calentamiento del medio de cultivo desde la temperatura ambiente
T0 hasta la temperatura de esterilización Te , una etapa de mantenimiento donde la temperatura se
mantiene constante (Te ) y, finalmente una etapa de enfriamiento desde la temperatura de esterilización
hasta la temperatura de proceso T f . De lo anterior, la ecuación (1) la podemos escribir como:
Mantenimiento
Z t1   zZ }| { Z  
− RTEa(t) t2 Ea tf − RTEa(t)
∇= k0 e dt + k0 e( − RTe )
dt + k0 e dt (4)
t0 t1 t2
| {z } | {z }
Calentamiento Enfriamiento

1
 400

380

Temperatura (Kelvin)
360

Calentamiento
340
Mantenimiento
320 Enfriamiento

300

0 50 100 150
Tiempo (min)

Figura 1: Ciclo de esterilización de un biorreactor de 20 L nominales y 14 L de volumen de trabajo.

La ecuación (4) nos inidca que, por un lado, cada etapa del ciclo de esterilización contribuye con el
nivel de esterilización total (∇ ≥ 34), y por otro lado, la contribución en el nivel de esterilización de la
etapa de mantenimiento dependerá exclusivamente de la temperatura que se seleccione y del tiempo
que dure esta etapa. Mientras que las contribuciones de las etapas de calentamiento y enfriamiento
dependerán del tiempo que tarden en pasar desde sus correspondientes temperaturas iniciales hastas
sus temperaturas finales. Por esta razón, es que necesitamos conocer los correspondientes perfiles de
temperaturas de cada una de las etapas mencionadas. Es decir, necesitamos conocer cómo varı́a la
temperatura respecto al tiempo de los procesos de calentamiento y enfriamiento, para poder deermia-
nar los valores correspondientes de las integrales definidas en la ecuación (4).

2. Actividades
1. Descargue el archivo de Excel que tiene los datos de temperatura versus tiempo de un ciclo de
esterilización de un biorreactor tipo tanque agitado: CicloEsterilización.csv.

2. Construya la gáfica Temperatura vesus Tiempo, donde la temperatura esté en grados Kelvin y
el tiempo en minutos.

3. Utilizando la ecuación (3), calcule el valor de la velocidad de muerte térmica k(t, T (t)) para
cada valor de temperatura del ciclo de esterilización.

4. Construya la gráfica Velocidad de muerte térmica versus Tiempo, donde la velocidad de muerte
térmica esté en min−1 y el tiempo en minutos. Observe que el área bajo la curva de esta gráfica
es justamente el valor numérico de la ecuación (4).

5. Utilizando la regla del trapecio, determine el área bajo la curva de la gráfica del inciso anterior.
Para esto, puede usar los software Matlab, Mathematica, Excel, Python, C, C++, R, etc. En fin,
usa el software con el que te sientas más cómodo.

6. ¿El ciclo de esterilización cumple con el criterio establecido (∇ ≥ 34)?

2
7. Si el criterio de esterilización es mucho mayor a 34, ¿Usted que modificarı́a para que el valor
de ∇ experimental sea lo más cercano posible a 34? Justifique su respuesta.