Silvia Charris – Viviana Parada - Karen Rivera - Silvia Vásquez

¿Qué es?

Cromatografía líquida de alta resolución(HPLC)
Es utilizada por su sensibilidad, fácil adaptación a las determinaciones
cuantitativas exactas, su idoneidad para la separación de especies no volátiles y
su aplicación a sustancias de primordial interés en la industria, como son los
aminoácidos, proteínas, ácidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, entre
otros.
 ¿QUE SON LAS COLUMNAS?
partículas
esféricas
adsorbentes

Tubos de acero
inoxidable

La adsorción/desorción El diámetro de columna no afecta

de proteínas ocurre en la la resolución máxima, pero esto
realmente afecta la carga de
superficie de ellas.
muestra, el uso solvente y la
sensibilidad de detección.
 CLASES DE RELLENO
• Capa porosa de sílice
• Alúmina
• Una resina sintética de poliestireno ± divinil
Peculiar benceno o una resina de intercambio iónico
sobre la superficie de estas bolillas.

• Sílice, pero también pueden ser de

alúmina, una resina sintética de poliestiereno
Particular ± divinil benceno o una resina de
intercambio iónico.

Porosa
DETECTORES
 Mechanism of Interaction Between
Polypeptides and RP-HPLC Columns
Purificación de una proteína de 35
kDa rica en lisina, de
la fracción albúmina de
Amaranthus caudatus (kiwicha) [1]
Objetivo
 Purificar una proteína rica en lisina de la fracción
albúmina del grano de Amaranthus caudatus.

Importancia HPLC
 Purificación de la proteína
 Determinación del peso molecular
 Analizar la composición de aminoácidos
 Metodología

Harina
Semillas de
Molidas deslipidada con
amaranto
éter de petróleo

Tamizó, secó a
Extracción de
temperatura
proteína
ambiente
 La harina
deslipidada
Extracción de la
Centrifugación
albúmina
Agua desionizada

0,1 mM de
fenilmetilsulfonilflu
oruro
 HPLC Purificación

Electroelución Composición
de AA en la
proteína
 Resultados

Disminución
de AA
azufrados

Harina
deslipidada y
fracción de
albúmina
Determinación de la
Aflatoxina B1
 Extracción de la
Cloroformo Filtración del extracto
muestra
Mezcla agua +
metanol +
acetonitrilo

Columna en fase
Fase móvil Separación y determinación
reversa

Detección por Concentración

1 microgramo/Kg
fluorescencia detectable

http://www.youtube.com/watch?v=wYEDJu0pJy4
Determinación de Tocoferoles por
HPLC en Aceite de Quinua
(Chenopodium quinoa) y Kañiwa
(Chenopodium pallidicaule)
 Introducción
• Caracterización de la fracción lipídica de la Quinua y Kañiwa.
• Alimentos ricos en proteínas con un balance aminoacídico.

Determinar
HPLC Tocoferoles en aceites
vegetales
 Tocoferol
Materiales
99.9% en
hexano
Tocoferol
Detector 99.9% en
hexano

C18 de Fase
Reversa Aceite
Acetato de
crudo de
etilo
quinua

Aceite de
Metanol
Kañiwa
Resultados
Determinación simultánea de diez
fármacos antirretrovirales
mediante cromatografía líquida de
alta eficacia (HPLC)[2]
El tratamiento de las muestras de plasma de los pacientes se realiza
mediante una extracción en fase sólida utilizando cartuchos C18.
Los tiempos de retención obtenidos.
Minutos vs. Longitud de onda
Finalmente se determinaron las concentraciones plasmáticas de
antirretrovirales en pacientes VIH positivos.
 Bibliografía
1. VILLANUEVA, Orlinda y ARNAO, Inés. Purificación de una proteína de 35 kDa
rica en lisina, de la fracción albúmina de Amaranthus caudatus (kiwicha). An. Fac.
med. [online]. dic. 2007, vol.68, no.4 [citado 17 Abril 2013], p.344-350. Disponible
en la World Wide Web: <http://www.scielo.org.pe/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1025-55832007000400009&lng=es&nrm=iso>. ISSN
1025-5583.
2. 2. Alaguero Calero M 1, Gutiérrez García TJ 2, Rosado María C 1, Costa García A.
Servicio de Farmacia. Hospital Universitario Central de Asturias. Oviedo.
Departamento de Química Física y Analítica. Universidad de Oviedo.

• http://es.scribd.com/doc/17065477/HPLC-Aplicaciones-en-compuestos-organicos
• http://www.engormix.com/MA-micotoxinas/articulos/tecnicas-cromatografia-liquida-
alta-t150/p0.htm
• http://www.hca.es/huca/web/contenidos/websdepartam/farmacia/HPLC%20Poster.pdf