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PRÁCTICA # 5

PRÁCTICA # 5 CINÉTICA ENZIMÁTICA 2: EFECTO DEL PH Y TEMPERATURA

CINÉTICA ENZIMÁTICA 2:

EFECTO DEL PH Y TEMPERATURA

PRÁCTICA # 5 CINÉTICA ENZIMÁTICA 2: EFECTO DEL PH Y TEMPERATURA

Experimento No. 1 Efecto del pH

Experimento No. 1 Efecto del pH
Experimento No. 1 Efecto del pH
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 Sacarosa 0.3 1.0 1.0 ml 1.0 1.0 1.0
Tubo
1
2
3
4
5
6
7
Sacarosa 0.3
1.0
1.0 ml
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
ml
M
ml
ml
ml
ml
ml
Amortiguador
ph 2.5
0.5
0
0
0
0
0
0
ml
Amortiguador
ph 3.5
0
0.5 ml
0
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Amortiguador
ph 4.5
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0.5
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0
0
ml
Amortiguador
ph 5.5
0
0
0
0.5
0
0
0
ml
Amortiguador
ph 6.5
0
0
0
0
0.5
0
0
ml
Amortiguador
ph 7.5
0
0
0
0
0
0.5
0
ml
Invertasa
1.0
1.0 ml
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
ml
ml
ml
ml
ml
ml
Agua
0
0
0
0
0
0
1.5 ml

Mezclar e incubar a 35°C durante 20 min. Posteriormente agregar 1 ml de Dinitrosalicilato a cada uno de los tubos. Mezclar y calentar en baño de agua a ebullición hasta cambio de color. Enfriar y leer a 540 nm ajustando a cero con el tubo No. 7

Mezclar e incubar a 35°C durante 20 min. Posteriormente agregar 1 ml de Dinitrosalicilato a cada
Mezclar e incubar a 35°C durante 20 min. Posteriormente agregar 1 ml de Dinitrosalicilato a cada

Resultados

Tubos Absorbancia Ph 540 1 0.005 2.5 2 0.006 3.5 3 0.969 4.5 4 1.264 5.5
Tubos
Absorbancia
Ph
540
1
0.005
2.5
2
0.006
3.5
3
0.969
4.5
4
1.264
5.5
5
1.302
6.5
6
1.271
7.5
Resultados Tubos Absorbancia Ph 540 1 0.005 2.5 2 0.006 3.5 3 0.969 4.5 4 1.264
Según los resultados obtenidos se determina que el ph al que la enzima Invertasa alcanza su

Según los resultados obtenidos se determina que el ph al que la enzima Invertasa alcanza su mayor punto de actividad enzimática es de 6.5 por lo cual se considera su ph optimo

Según los resultados obtenidos se determina que el ph al que la enzima Invertasa alcanza su

Conclusiones

Conclusiones  Al pH en donde la enzima presenta máxima actividad se le conoce con el

Al pH en donde la enzima presenta máxima actividad se le conoce con el nombre de pH óptimo. Estos resultados se pueden interpretar pensando que en el pH óptimo la enzima tiene la conformación tridimensional que le permite la mayor actividad catalítica. Si se modifica este pH, la conformación nativa se pierde y la enzima ya no puede catalizar adecuadamente.

Conclusiones  Al pH en donde la enzima presenta máxima actividad se le conoce con el

Efecto del pH en la ionización del sitio activo: la concentración de H+ afecta la velocidad de la reacción el proceso catalítico usualmente requiere de que la enzima y el substrato tengan grupos químicos en una forma ionica particular para poder interactuar. Por ejemplo la actividad catalítica puede necesitar a un grupo amino en estado protonado (-NH3+) o no (-NH2+), el pH modifica este estado y por tanto a la velocidad de la reacción.

  Efecto del pH en la ionización del sitio activo: la concentración de H+ afecta

Efecto del pH para la desnaturalización de la enzima: pH extremos pueden ocasionar la desnaturalización de las enzimas, debido a que la estructura con estos cambios es posible modificar las interacciones ionicas que intervienen en la estabilidad de la enzima en su estado nativo.

  Efecto del pH en la ionización del sitio activo: la concentración de H+ afecta

El método DNS (técnica de miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido 3,5 dinitrosalicílico para la hidrólisis de polisacáridos presentes en una muestra. Determina las absorbancias por medio de un espectrofotómetro a 540nm para cuantificar los productos de una reacción enzimática.

 El método DNS (técnica de miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido 3,5 dinitrosalicílico

El DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. La sacarosa es un disacárido no reductor, pero tras su hidrólisis en medio ácido se liberan glucosa y fructosa que sí son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por métodos espectrofotométricos es proporcional a la concentración de sacarosa.

 El método DNS (técnica de miller) es una técnica colorimétrica que emplea ácido 3,5 dinitrosalicílico
Experimento No. 2 Efecto de la Temperatura

Experimento No. 2 Efecto de la Temperatura

Experimento No. 2 Efecto de la Temperatura
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 Sacarosa 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0
Tubo
1
2
3
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5
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Sacarosa
1.0
1.0 1.0
1.0
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1.0
0
0.3
Amortiguad
or PH 4.7
0.5
0.5 0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
Invertasa
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
Agua
0
0
0
0
0
0
1.0
temperatura
4
26
37
45
60
100
25

Mezclar e incubar 20 minutos a la temperatura indicada. Agregar 1 mL de Dinitrosalicilato a todos los tubos.

Mezclar y calentar en baño de agua a ebullición hasta cambio de color. Enfriar y leer a 540 nm ajustando a cero con el tubo No. 7

Tubo 1 2 3 4 5 6 7 Sacarosa 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 0

Resultados

Tubo Absorbancia Temperatura 540 1 0.834 4 2 1.842 26 3 2.039 37 4 2.008 45
Tubo
Absorbancia
Temperatura
540
1
0.834
4
2
1.842
26
3
2.039
37
4
2.008
45
5
2.235
60
6
1.463
100
Resultados Tubo Absorbancia Temperatura 540 1 0.834 4 2 1.842 26 3 2.039 37 4 2.008
Según los resultados obtenidos se observa que el punto De temperatura a la que la Invertasa

Según los resultados obtenidos se observa que el punto De temperatura a la que la Invertasa alcanza su mayor actividad Enzimatica es de 60 °c por lo cual se considera su temperatura optima

Según los resultados obtenidos se observa que el punto De temperatura a la que la Invertasa

conclusiones

Incremento de la velocidad con la temperatura: En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto máximo es alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de moléculas ricas en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de transición, para formar a los productos.

conclusiones  Incremento de la velocidad con la temperatura: En general, la velocidad de la reacción

Sin embargo la elevación excesiva de la temperatura del medio que contiene a las enzimas, resulta en un decremento de la velocidad como resultado de la desnaturalización, es decir, la pérdida de la estructura tridimensional de las enzimas y en consecuencia perdida de los sitios activos evitando la transformación del sustrato dando como resultado la disminución de la actividad catalítica

conclusiones  Incremento de la velocidad con la temperatura: En general, la velocidad de la reacción