Q.

F OSCAR FLORES LOPEZ

OBJETIVOS
1. Medios de cultivo:
Son necesarios para el aislamiento, mantenimiento,
la reproducción y la identificación de los
microorganismos.
 Contienen sustancias nutritivas
 pH adecuado
 Deben estar estériles.

2. Incubación:
Depende del metabolismo del microorganismo a
cultivar.
 La atmósfera empleada.(aerobio, microaerofílico,
anaerobio)
 Tiempo.
 Temperatura.
1. Según su estado físico: líquidos, semisólidos y
sólidos.

2. Según su finalidad en microbiología:

 No selectivos: contienen suficientes nutrientes como para
soportar el crecimiento de gran variedad de microorganismos.

 Selectivos: permiten el crecimiento de sólo un tipo de

microorganismo.

 Enriquecido: son medios no selectivos que se le agrega

sustancias como ser sangre, suero, albúmina, etc... Para
microorganismos exigentes.

 Diferenciales: son medios de cultivo que permiten establecer

diferencias entre diferentes tipos microorganismos.
Los requerimientos de los
medios de cultivo son
específicos de :

 La muestra que se
analiza.
 De los microorganismos a
ser detectados.
 SÓLIDOS

LÍQUIDOS

SEMISÓLIDOS

Clasificación de los medios de

cultivo según consistencia
semisólido
Caldo nutritivo

Caldos de enriquecimiento

Caldos revitalizadores
 Enriquecimiento

Nutritivo

Selectivo y
diferencial

Clasificación de los medios de

cultivo según utilización
MEDIOS NUTRITIVOS

Contienen nutrientes que

favorecen el desarrollo de la
mayoría de los microorganismos
sin requerimientos especiales de
cultivo.

No promueven el crecimiento
de ningún agente en particular
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
MEDIOS SELECTIVOS

Contienen uno o más agentes que inhiben

el crecimiento de los microorganismos que
no se quieren estudiar

Agentes inhibidores: colorantes, sales

biliares, alcoholes, ácidos y antibióticos
 MEDIOS DIFERENCIALES

Contienen un factor o factores que permite que las colonias de

una especie o un tipo bacteriano exhiban ciertas características
metabólicas o de cultivo que puedan utilizarse para diferenciarlas
de otras bacterias que crecen en el mismo agar
Medios para bacterias no exigentes
- agar
- extracto de carne
- peptona
- NACL
- leche descremada (congelar cepas)
 1. En el laboratorio a partir de sus diferentes
componentes.
2. A partir de productos en polvo deshidratados
comerciales o
3. Pueden adquirirse medios listos para su uso.

Se puede tomar como base el documento

ISO 7218:1996(E) Microbiology of food and animal
feeding stuff- General rules for microbiological
examinations para:
-La preparación y esterilización de medios.
-Tiempos de almacenamiento recomendados.
 Loslotes de medios deben estar
debidamente identificados.

 Cadalote recibido debe ir acompañado de

evidencias del cumplimiento de las
especificaciones de calidad.
REQUISITO:

El fabricante en el
momento de la entrega de Nombre del medio y lista de
medio de cultivo debe componentes, incluido
cualquier suplemento.
proveer información Fecha de vencimiento del
acerca de las medio.
especificaciones de Condiciones de
calidad, como mínimo almacenamiento.
debe incluir lo siguiente: Control de esterilidad.
Control del crecimiento de los
microorganismos de interés
(target) y de los
microorganismos no deseados
(no target) y criterios de
aceptabilidad.
Controles físicos y criterios de
aceptabilidad aplicados.
Fecha de emisión de las
especificaciones.
1. El laboratorio debe registrar la fecha :
 de recepción
 de apertura del envase.
 de caducidad

2. El almacenamiento debe realizarse en las

condiciones apropiadas.
 Envases: deben estar herméticamente cerrados.
(especialmente medios deshidratados)
 No deben utilizarse medios deshidratados que
presenten apelmazamiento o un cambio de
color.
Para la preparación de medios, soluciones y
tampones, debe utilizarse agua destilada que haya
sido sometida a controles periódicos que aseguren su
calidad.
Controles periódicos:
Requisitos del agua destilada:
-Conductividad.
-pH
- Contaminación microbiana
-Libre de sustancias bactericidas, inhibidoras o
interferentes.
-Se debe llevar un registro actualizado de los
mismos.
 Los medios de cultivo, soluciones y reactivos deben
prepararse, almacenarse y utilizarse de acuerdo con
un procedimiento documentado.

 En dicho procedimiento debe haber una

descripción del equipamiento necesario.
 El laboratorio debe colocar una etiqueta indicando
la identificación y otros datos en los medios de
cultivo y reactivos.
 Debe haber un registro de preparación de medios
de cultivo y reactivos.
 Debe determinarse y verificarse
el período de validez de los medios preparados
en las condiciones de conservación especificadas.

En general los medios preparados se guardan:

 En heladera no más de tres meses
 A temperatura ambiente no más de un mes en
condiciones que impidan que su composición sea
modificada.

Observar cambio del color, evaporación,

la deshidratación o el crecimiento microbiano.
Se debe verificar (siempre que sea necesario) que los
medios de cultivo y diluyentes preparados por el
laboratorio tengan las características adecuadas con
respecto a:
 Recuperación o supervivencia de los
microorganismos de interés.(Productividad)
 Inhibición o supresión de los microorganismos no
deseados.(Selectividad)
 Propiedades bioquímicas (diferenciales y
diagnósticas)
 Propiedades físicas (por ejemplo, pH, volumen).
 Sea estéril.
 Agua: recipientes dónde se almacena el agua debe
ser inerte.

 pH: la medida a 25 oC. pH +0.2. ajuste el pH con 1

M NaOH o 1M CLH

 fundir en el agua hirviente volúmenes <500ml.

 15 ml de espesor agar en placas petri 90 mm.

 Secado de placas estufa 25-55 oC (20 min.) o en

flujo laminar.

 Incubación: las pilas de platos < 6.

 Todos los medios y diluyentes que se suministren
en una forma directamente utilizable o
parcialmente completa deben ser validados antes
de su utilización.

Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio

respecto a:
 la recuperación o supervivencia de los
microorganismos de interés
 la inhibición o supresión de los microorganismos
no deseados tiene que ser cuantitativa.
 los atributos (por ejemplo: Propiedades físicas y
bioquímicas).

Parte de esa validación es provista por las

especificaciones de calidad del proveedor.
 Permiteel crecimiento de bacterias Gram
positivas mientras inhibe el crecimiento de
Gram negativas.
 Contieneuna alta concentración (7.5%-
10%) de sal (NaCl), haciéndolo selectivo
para Staphylococco (y Micrococcaceae).
 Contieneel manitol inhibidor de bacterias
Gram negativas y un indicador de pH de
fermentación, rojo de fenol.
 Coagulasa-
positivo Staphylococco producen
colonias amarillas con zonas
amarillas, mientras
que coagulasa-negativo
Staphylococco producen colonias
rojas o ligeramente rosadas sin
cambio en el medio.
 Se usa para el aislamiento
selectivo de
Staphylococco sospechosas
de ser patógenas.
 El
agar MacConkey con cristal violeta es un
medio selectivo y diferencial para detección
de Enterobacterias y E. coli en muestras de
origen diverso.
Este medio ha sido especialmente diseñado
para detectar la fermentación de la lactosa
mediante un cambio de color al rojo neutro.
 Las sales biliares y el cristal violeta hacen el medio
selectivo para las bacterias Gram-positivas.
 colonias lactosa (+): rosa a rojas, a veces rodeadas
por un halo de sales biliares precipitadas.
 colonias lactosa (-): incoloras o ligeramente beige.

Agar Macconkey con

bacterias Lac+ (Izquierda)
y Lac- (Derecha).
El medio de CLED (Cistina Lactosa Electrolito
Deficiente) es útil para aislamiento de
microorganismos del tracto urinario.
Las bacterias lactosa (+) producen
colonias de amarillo pálido a amarillo
por acidificación del medio.
 Las bacterias no fermentadoras

de lactosa producen colonias

verdes, azules o incoloras.
Colonias lactosa fermentadoras
(amarillas) y NO fermentadoras
(azul)
 Susceptibilidad a antibióticos y sulfonamidas
 La composición del medio Mueller Hinton
2 permite el crecimiento de las bacterias no
exigentes (enterobacterias, bacilos Gram-
negativos no fermentadores, estafilococos y
enterococos) encontrados en patología
humana.
 Estemedio de cultivo ha sido recomendado
universalmente para la prueba de
sensibilidad a los antimicrobianos. Además
es útil con el agregado de sangre para el
cultivo y aislamiento de microorganismos
nutricionalmente exigentes.
 Medio empleado para la diferenciación de
enterobacterias, en base a la fermentación de
glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción
de ácido sulfhídrico.
 El extracto de carne y la pluripeptona,
aportan los nutrientes adecuados para el
desarrollo bacteriano.
 El rojo de fenol es el indicador de pH, y el
cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico. El agar es el agente solidificante.
 Por fermentación de azúcares, se producen ácidos,
que se detectan por medio del indicador rojo de
fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.
 El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidró-
geno que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el típico sulfuro de hierro de color
negro.
 En el medio de SIM se
mide la motilidad de
las bacterias, es
positiva cuando existe
turbidez en el
medio pero negativo,
cuando se observa la
penetración del
inóculo.
 Esta prueba permite
diferenciar enterobacterias.
Entre las enterobacterias
citrato negativas están
Escherichia y Shigella y entre
las citrato positivas Arizona,
Citrobacter, Klebsiella,
Salmonella y Serratia.
 El desarrollo de crecimiento
en este medio y el viraje del
indicador de verde a azul,
indican que elmicroorganismo
es capaz de utilizar el citrato
como fuente de carbono.
Es un medio que sirve para demostrar la presencia
de sales de hierro y para detectar la producción de
H2S por algunos microorganismos.
A: Reacción acida. Color amarillo
K: Reacción alcalina. Color violeta
R: Reacción alcalina: color rojo
K/K: Descarboxilacion lisina
K/A: Fermentación glucosa.
Descarboxilacion lisina
R/A: Desaminacion lisina.
Fermentación glucosa.
 Medio utilizado para la
identificación de
microorganismos, en base a la
actividad ureásica.
 Sus productos metabólicos
alcalinizan el medio, haciendo
virar el indicador rojo fenol
del amarillo al rojo.
I. Siembra con rastrillo

II. Siembra con asa de cultivo

- Diseminación en superficie
- Agotamiento en superficie
- Tubos en superficie
- Tubos en profundidad o picada

III. Siembra con tórula

 Siembra con rastrillo
Manual de microbiología 2011, U. Mayor
Siembra de diseminación en superficie
Manual de microbiología 2011, U
Mayor
Siembra semi-cuantitativa de
agotamiento en superficie.
Manual de microbiología 2011, U Mayor
 Siembra de tubo en superficie.

Manual de microbiología 2011, U Mayor

 Siembra de tubo profundidad.

FLO
Oscarflores.l@hotmail.com