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Tabla comparativa de métodos de secuenciación primera, segunda, tercera generación

LONGITUD DE MÉTODO DE
GENERACIONES CARACTERÍSTICAS ADN MOLDE LECTURA SECUENCIACIÓN

 Secuenciación de genes individuales.


 Secuenciar hasta 96 muestras.
 Identificación de patógenos. 1 kb
1ra Método de Sánger  Análisis de fragmentos. Molécula única Polimerasa
 Análisis de microsatélites

 Utiliza enzimas, reacciones acopladas y


bioluminiscencia para controlar la
liberación de pirofosfato. PCR por emulsión 500-700 pb Polimerasa (Pirosecuenciación)
Roche - 454  Determinar una secuencia de DNA a Liberación de pirofosfato
gran escala, aplicable a genomas
completos, mediante luminiscencia.
2da  Capacidad de extremo emparejado de
Illumina – GA II inserción corta para la secuenciación Polimerasa (terminadores
del genoma de alta resolución. reversibles)
 lecturas de extremo emparejado de PCR emulsión 35 pb
inserción larga para un ensamblaje de
secuencia eficiente.
 Secuenciación por ligación
SOLiD (Applied  Posicionamiento de nucleosomas
Biosystems)  Secuenciación de ARN de cadena PCR emulsión 50 pb Ligasa (octámeros con código
sensible y secuenciación humana de dos bases)

 Secuenciar miles de fragmentos


Helicose distintos de DNA. Molécula única 100 – 200 pb Polimerasa

 Mejora la capacidad de asignación para


SMRT Pacifico la resecuenciación y simplifica el
Biosciences ensamblaje de novo.
 Resolución de una sola molécula Molécula única 35,000 pb – 45 Kb Polimerización
 Mayor precisión de consenso
 Cobertura uniforme
 Uso de nucleótidos marcados con
Illumina = HiSeQ, fluoróforos que bloquean de forma
MiSeQ reversible la elongación de la cadena
3ra Molécula única 2x150 pb Secuenciación por síntesis
 Secuenciación completa de todo el
genoma (humano, vegetal, animal)
 Perfil de expresión génica con ARNm-
Seq
 Primer aparato que utiliza tecnología
superconductora, usando fluidos
integrados y micromaquinaria para
Ion Torrent traducir la información de DNA a
información digital. Molécula única 100 pb Polimerización
 No usa nucleótidos modificados
químicamente

 Se analiza el ADN de forma directa al


empujarlo a través de un poro
suspendido en una membrana
 Los nucleótidos o letras que componen Molécula única 100 kb Nanoporos exonucleasa -
Oxford Nanopore el ADN se diferencian debido a los acoplados
cambios de corriente eléctrica que se
producen durante su paso por la
membrana.