Componentes de un HPLC

Cromatgrafo Lquido (HPLC)

Detectores
Absorbancia

La misma mezcla a diferentes

Deteccin a 1
Abs.

Abs.

A1

214 nm

A2

B
a1
togram
Croma

Croma
tog

tA
Abs.

rama 2

tB

t (min)

230 nm

Deteccin a 2

B
1

(nm)

245 nm
tA

tB

t (min)

Componentes de un HPLC
Cromatgrafo Lquido (HPLC)
Detectores

Monocromador

Detectores
Diodos

Absorbancia

con

Absorbancia con Arreglo de

Componentes de un HPLC
Cromatgrafo Lquido (HPLC)
Detectores
Fluorescencia

Intensidad

de

Componentes de un HPLC
Cromatgrafo Lquido (HPLC)
Detectores
Refraccin

ndice

de

Componentes de un HPLC
Cromatgrafo Lquido (HPLC)
PC
y
Software
de
Control
Procesador de Datos o Software

Permite el ingreso de datos para llevar a cabo la

separacin cromatografica (Mtodo Analtico).
Procesa los datos obtenidos y permite
llevar a cabo ajustes para mejorar el
proceso de separacin.
Principales Caractersticas:
Amigable y Flexible.
Permite el control total del equipo, as como de sus accesorios

Permite confeccionar reportes personalizados.

Permite trabajar en forma Post-Run

Componentes de un HPLC
Cromatgrafo Lquido (HPLC)
PC
y
Control

Software

de
Computadora de Control
Permite introducir ordenes, revisar datos,
almacenar resultados, etc.
Debe de integrar totalmente las funcionalidades
del instrumento.

No necesariamente debe de ser una PC

de estacin. Tambin puede utilizarse un
Ipad, una Tablett o LapTops.
Caractersticas:
Rpida (Memoria de Alta Velocidad)
Capacidad de Almacenamiento de Datos

HPLC y
UFLC
HPLC

0.0

3.0
12.0

6.0
15.0
(Min)

9.0

UFLC

0.0

0.5
1.0
2.0
2.5
(Min)

1.5

HPLC y UFLC
Semejanzas

El mismo principio de separacin.

Los mismos componentes.
Las mismas Fases Mviles & Estacionarias.
Cualitativo y Cuantitativo
Las mismas aplicaciones.

Diferencias

En UFLC utiliza 02 Bombas de Alta Presin

En UFLC las columnas son mas pequeas.
En UFLC las partculas de relleno son menores
En UFLC la presin de trabajo es mayor.

HPLC y UFLC
Ventajas y Desventajas
HPLC Ventajas
Mtodos conocidos y optimizados.
Trabajos a baja presin.
Trabajo con Diferentes Detectores (UV, UV-Vis, DAD, FI, RI,
Conductividad, Electroqumico, ELSD, Masas.
Opciones de Derivatizacin.
Instrumento de bajo presupuesto.
Gradiente Cuaternaria.

UFLC Ventajas
Velocidad de anlisis (4 a 5 veces ms rpida que HPLC
Tradicional).
Mejor Resolucin.
Menor gasto de Fase Mvil.
Permite trabajar con solventes acuosos a mayor presion.
Ideal para LC-MS & LC-MS/MS.

HPLC y UFLC
Ventajas y Desventajas
HPLC Desventajas
Trabaja mejor a flujos relativamente altos, por lo que
requiere acortadores de flujo para trabajar con LC-MS.
Limites de Presin (Proporciones de solventes acuosos
limitados).
Mayor tiempo en las Corridas Cromatogrficas.
Mayor consumo de Fases Mviles.

UFLC Desventajas

Validacin de mtodos.
Columnas de mayor costo.
Sistema de mayor costo que un sistema HPLC.
Detectores de Absorbancia (UV, UV-Vis, DAD),
Fluorescencia.
Trabajos Binarios (No todos los sistemas)

UFLC
Tamao de Partcula y Separacin
Separacin rpida con resolucin, empleando
partculas menores

Flujo: 0.2
mL/min

Flujo: 0.7
mL/min

Separacin de
Parabenos
A 0,7 mL/min
A 0,2 mL/min
(Flujo Convencional)

(Flujo
Elevado)

Temperatura

in de Columna / Relacin con la Temperatura

Reduccin
de la
Presin

Curva de Van Deemter

La Eficiencia
de la columna
no es reducida
a tasas de flujo
ms elevadas

UFLC

Efecto de la Elevacin de la
Temperatura
Mejor Eficiencia de la Columna: Aumento de N y Reduccin
de la presin
Fase Mvil :
Agua/Acetonitrilo (3:7, V/V)
Flujo
Detector
Long. Onda
Picos

Consumo
de
Acetonitrilo
: 10.5 mL
Consumo
de
Acetonitr
ilo: 2.3
mL

:
:
:
:

1.5 mL/minuto
UV, UV-Vis o DAD
245 nm
1. Acetofenona
2. Propilfenona
3. Butilfenona
4. Pentilfenona
5. Hexanofenona
6. Heptanofenona
7. Octanofenona

UFLC
Consumo de
Acetonitrilo:
12,8 mL

Picos:
1. Cefadroxil
2. Cefaprina
3. Cefaclor
4. Cefalexina
5. Cefadina
6. Cefotaxima
7. Cefrazolina
8. Cefuroxima
9. Cefoperazona
10. Cefloxitina
11. Cefamandol A
12. Cefalotina
13. Cefamandol B

Consumo de
Acetonitrilo:
1,7 mL

Fase Mvil: a) Agua/Acido Frmico, b) Acetonitrilo. Gradiente a 40 C. Flujo: 1.0 mL/min

UFLC Minimiza el Ciclo de los Anlisis

Columna

: Shim-Pack XR-ODS (30 mm x 3 mm ID

x 2.2 um partcula)
Detector
: UV o UV-Vis o DAD
Long. Onda
: 245 nm
Fase Mvil
: Agua/Acetonitrilo 4:6 a 2:9 en 0.4 min
Flujo
: 3 mL/min
Volumen
: 4 uL
Picos:
1. Acetofenona
2. Propilfenona
3. Butilfenona
4. Pentilfenona
5. Hexanofenona
6. Heptanofenona
7. Octanofenona

HPLC y UFLC
Ventajas y Desventajas
125

VP-ODS (4.6 mm 150 mm,

5mm)
Flow rate : 1.0 mL/min

1
2

100

HPLC

75

N:14800

50

25
0
0.0

2.5

250mAU

7.5

200
150

5.0

UFLC

10.0

min

12.5

Peaks;

XR-ODS (3.0mm 75 mm,

2.2mm)
Flow rate : 1.2 mL/min

3
4

100

3: Butyrophenone
4: Valerophenone
5: Hexanophenone

50

1: Acetophenone
2: Propiophenone

N:14200

Increased speed

6: Heptanophenone
7: Octanophenone

0
0.00

0.25

0.50

0.75

1.00

1.25

1.75

1.50

2.00

2.25

2.50

min

Increased
separation
performance

mAU

150

XR-ODS II (3.0mm 150 mm,

2.2mm)
Flow rate : 1.3 mL/min

125

100

UFLCX

75
50

N:28100

25
0
0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

min

HPLC y UFLC
Ventajas y Desventajas
Programa de Transferencia
de Mtodo

30

Gracias
por su
Atencin