Espectrofotometría
Espectrofotometría infrarroja (FT-IR)
Espectrofotometría de absorción atómica (EAA)
Espectrofotometría ultravioleta visible (UV-VIS)
Lámpara de Wood, radiación ultravioleta
Referencias
Lección 1 de 5
Espectrofotometría infrarroja (FT-IR)
La espectroscopia infrarroja es una técnica muy empleada en la
investigación de indicios periciales porque es muy versátil, no siempre
destructiva y provee información rápida de lo estudiado. Emplea el rango
medio de la irradiación infrarroja, se suele emplear para estudiar fibras,
tintas, pólvora, telas, pinturas, restos de incendio e hidrocarburos, entre otras
muestras más.
Para el caso propuesto en la lectura 1 del presente módulo y siempre que se
tenga cantidad de muestra dado las particularidades del caso, de
considerarlo necesario, Juan Carlos podría estudiar GSR(o) como
complemento a otros periciales, es decir, los residuos orgánicos de la
deflagración de la pólvora y dependiente de los componentes de la misma
por medio de la técnica FTIR. Cabe mencionar que no es lo habitual, dado
como se ve en la lectura sobre microscopía electrónica de barrido, está
normada la búsqueda del GSR (i) por SEM, que es lo primordial a estudiar.
Principios de funcionamiento por medio de la vibración molecular.
Fuente de generación infrarroja. El interferómetro de Michelson.
Reflectancia total atenuada (ATR) y difusa (DRS), celdas para
líquidos con paso graduable. Muestras de estudio pericial líquidas y
sólidas. Microscopia FT-IR
La luz infrarroja interacciona con las moléculas orgánicas y provoca vibración
molecular. Esta vibración produce un decaimiento de la emisión en un
determinado espectro de absorción de energía. Las posiciones relativas de
los átomos en una molécula no son fijas, ya que hay un movimiento de
fluctuación continuo de vibraciones y rotaciones diferentes alrededor de los
enlaces en la molécula. En la figura 1, se grafican los tipos de vibraciones
moleculares. “Si la molécula es sencilla, como en el caso de aquellas
diatómicas, se puede definir el tipo de vibración, pero en los casos complejos
de moléculas poli-atómicas, es de difícil interpretación” (Holler et al., 2008, p.
432).
Figura 1: Tipos de vibraciones moleculares
El equipo que aparece en la figura 2, un espectrofotómetro infrarrojo por
transformadas de Fourier (FTIR), es en una fuente de emisión de luz
infrarroja con diferentes accesorios que permiten posicionar la muestra en
reflexión total o atenuada, posee transmitancia y un detector. El detector
recibe un determinado rango espectral de longitud de onda IR, luego, al
interponer una muestra, esta absorbe energía en diferentes longitudes, que
el detector recepta en esas mismas longitudes de absorción de energía.
Figura 2: Esquema simplificado de un FTIR
Fuente: Holler et al., 2008, p. 442.
En la figura 3 se puede ver un equipo comercial FTIR. A este también se le
puede acoplar un microscopio IR, que permite mirar muestras pequeñas y así
obtener su espectro infrarrojo.
Figura 3: FTIR: Shimadzu 8400s
Fuente: Ministerio de Seguridad, Buenos Aires Provincia, s. f., http://goo.gl/XiaaUF
El espectrómetro IR de transformada de Fourier funciona de la siguiente
manera: debido al interferómetro de Michelson, la radiación de la fuente IR
pasa por el divisor de haz y llega hasta el espejo fijo, regresa al divisor de haz
u atraviesa la muestra, por último, alcanza el transductor de IR. Al mismo
tiempo, al pasar por el divisor, la radiación de la fuente IR viaja al divisor del
haz, que se refleja en el espejo móvil, regresa por el divisor de haces hasta la
muestra y llega al transductor. Cuando los dos rayos se encuentran de nuevo
en el divisor de haces, tienen la aptitud de interferir uno con otro, si la
diferencia de fase es apropiada. El interferograma consiste en una gráfica de
la señal. El espectro o intensidad contra número de onda es una
transformada de Fourier del interferograma, es decir, un cálculo matemático
que transforma la señal de un dominio de frecuencia y viceversa. Este
cómputo se realiza por medio de una PC a partir de la señal IR contra el
desplazamiento del espejo. Siempre se toma un blanco, que es una señal del
compartimiento para la muestra en vacío que permite los cálculos restantes.
Luego se coloca la muestra en el compartimiento y se obtiene su espectro,
de esta manera se determina la absorción de cada número de onda a partir
de la relación entre la intensidad de la muestra y se resta la intensidad de
referencia medida previamente (Holler et al., 2008, p. 441).
Figura 4: Esquema simplificado del interferómetro Michelson
Fuente: Holler et al., 2008, p. 443.
Por medio de un PC a partir de la señal IR contra el desplazamiento del
espejo. Siempre se toma un blanco, que es una señal del compartimiento
para la muestra en vacío que permite los cálculos restantes. Luego se coloca
la muestra en el compartimiento y se obtiene su espectro, determinando de
esta forma la absorbancia a cada número de onda a partir de la relación
entre la intensidad de la muestra restando la intensidad de referencia
medida previamente. (Holler et al., 2008, p. 441).
Los tipos de muestras que permite estudiar el IR para identificación y
también para cotejo pericial son: sólidas (tales como cauchos, polvos, papel,
tela, hilos, películas, plásticos, películas de revestimiento en metales,
películas de revestimiento en resinas); líquidas, tales como mediciones del
contenido de aceite no volátil orgánico, disolventes, compuestos orgánicos
volátiles, disolventes, soluciones acuosas y soluciones de extracto. Para
cada tipo de muestra hay diferentes métodos que se puede aplicar, como
son: uso de polvos, por ejemplo, el método de pastilla de bromuro de potasio
KBr; celdas con paso óptico variable, con ventanas como la de KBr para
líquidos no acuosos (figura 8); el método de reflectancia difusa, DRS (figura
5) que emplea un pequeño dispositivo de superficie áspera que permite
levantar muestras (figura 6); el método de la celda de transmisión micro para
líquidos y para muestras microscópicas; el método de reflectancia especular
o transmitancia. También el accesorio de reflectancia total atenuada (ATR),
(figura 7), posee implementos para el FTIR que permiten el estudio de
líquidos, que es en sí mismo una cuba horizontal con espejos a los costados
que permiten el rebote en su paso óptico en todo su recorrido de la
iluminación infrarroja. Dentro aloja una sustancia líquida, a este mismo
accesorio se le puede anexar una prensa con tornillo micrométrico, lo que es
muy útil para el estudio de telas.
Figura 5: Accesorio DRS: reflectancia difusa
Fuente: Ministerio de Seguridad, Buenos Aires Provincia, s. f., http://goo.gl/XT5P13
Figura 6: Accesorio DRS reflectancia difusa: papel con depósito de carburo
de silicio
Fuente: Shimadzu, s.f., http://goo.gl/WWCNJN
Figura 7: Reflectancia total atenuada: Simple y múltiple rebote
Fuente: Termo Scientific, s.f., https://goo.gl/ZqhLsy
Figura 8: Celdas para líquidos: paso óptico regulable
Fuente: Ministerio de Seguridad, Buenos Aires Provincia, s. f., http://goo.gl/rkOsFL
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Lección 2 de 5
Espectrofotometría de absorción atómica (EAA)
La técnica de espectrometría de absorción atómica es clave en la aplicación
del análisis cuantitativo de precisión para un determinado metal por medio
de absorción atómica, de manera muy rápida y fiable de un elemento con
alta sensibilidad. En la investigación criminal, permite determinar tóxicos
metálicos en diferentes matrices biológicas, tanto de analito como de
metabolito y presencia de trazas de metales en la deflagración de la pólvora,
entre otras determinaciones.
Retomando el caso propuesto de lectura 1 del presente módulo, donde se
habían recolectado muestras de prendas remitidas por la morgue judicial,
Juan Carlos decide efectuar estudios de metales presentes con EAA en las
mismas. Esto lo hace con el objetivo de detectar la presencia de metales
como plomo, antimonio y bario que, bajo un cierto parámetro, podemos
determinar que son consistentes con partículas de residuos de disparos
inorgánicas GSR(i).
Sistemas de atomización: horno de grafito, llama, generador de hidruros.
Agua ultrapura, recolección y preparación de muestras en casos periciales.
Digestión por microondas. Valores límites en casos específicos
Con las prendas en laboratorio se procede a la recolección de la muestra
para indagar residuos metálicos en muy baja proporción, dado a que permite
la comparación de su composición cualitativa y cuantitativa. Para ello se
posee una fuente de luz, una lámpara de cátodo hueco (como se ilustra en la
figura 9) que emite en una determinada longitud de onda, que solamente
puede ser interrumpida en su paso óptico por elementos de estado basal del
propio elemento. Aprovechando esta propiedad, el detector recibe toda la
intensidad y luego, cuando está estudiando la muestra, al verse interrumpido,
el haz incidente llega al detector con menor concentración por haber ocurrido
una absorción de la intensidad.
También se emplea esta técnica para cotejar muestras de pinturas, vidrios,
tierras, lacres y objetos metálicos.
Figura 9: Esquema de lámpara de cátodo hueco
Fuente: Holler et al., 2008 p. 238.
En la figura 10 se sintetiza un esquema del funcionamiento descrito del EAA.
Allí se puede observar la fuente de potencia que alimenta la lámpara de
cátodo hueco del elemento determinado, el sistema de atomización, que en
este ejemplo es una llama, un monocromador –cuyo fin es filtrar las
interferencias y concentrar lo que se está midiendo–, un amplificador de
señal y, finalmente, la lectura obtenida, que generalmente es del orden de los
nanogramos por litro ng/l.
Figura 10: Esquema de funcionamiento EAA
Fuente: Holler et al., 2008 p. 240.
Esta técnica permite, por diferentes medios de atomización, ver el metal de
interés y su concentración, previa curva de calibración. Un método utilizado
es por medio de absorción atómica de llama (FAAS), en el cual la
presentación de la muestra es en estado líquido en suspensión coloidal en
solución generalmente ácida con agua ultrapura, esta se aeroliza por medio
de un microaspersor en una llama de acetileno, aire cuyo quemador se
denomina cola de pescado. El rango de la llama varía dependiendo lo que se
quiera ver y los gases que se combustionan. Durante la combustión, los
átomos de los elementos de interés en la muestra son reducidos a átomos
libres, átomos en estado basal que absorben luz a longitudes de onda
características que son emitidas por la lámpara colocada para ese
elemento.
Hay otros sistemas de atomización que frecuentemente se emplean y a los
cuales vamos a referirnos. En primer lugar, el horno de grafito consiste
literalmente en un tubo de grafito por el cual circula corriente. Esto provoca
un calentamiento del tubo y permite realizar rampas de temperaturas para ir
quemando los materiales que puedan interferir en la muestra –por ejemplo,
material biológico– hasta alcanzar la temperatura necesaria para atomizar
los átomos de interés pericial y llevarlos a su estado basal. Otra forma es por
medio del vapor frío y un generador de hidruros. Este método se lleva a cabo
por medio de la formación de hidruros covalentes volátiles, que luego serán
estudiados.
Así llegamos a la ley de Lambert-Beer, una ecuación matemática cuyo
razonamiento de esta relación explica el fenómeno. Consiste en que, si hay
un material absorbente o muestra, material sólido, líquido o gaseoso, en el
cual incide un haz de radiación monocromático paralelo de potencia P0, este
choca de forma perpendicular. Después de atravesar una longitud b de
material, que contiene n átomos, iones o moléculas absorbentes, su potencia
disminuye hasta un valor P como resultado de la absorción.
Considera ahora una sección transversal del bloque con área S y
espesor infinitesimal dx. Esta sección contiene dn partículas
absorbentes; es posible imaginar, asociada con cada partícula,
una superficie en la cual tendrá lugar la captura del fotón. Es
decir, si un fotón alcanza por casualidad una de estas áreas, de
inmediato tendrá lugar la absorción. El área total proyectada de
estas superficies de captura dentro de la sección se designa
como dS; la relación entre el área de captura y el área total es
entonces dS/S. En un promedio estadístico, esta relación
representa la probabilidad de capturar fotones dentro de la
sección. La potencia del haz que entra en la sección, Px, es
proporcional al número de fotones por unidad de área,
A = - log T = log P0 / P = abc.
Es una relación lineal entre absorbancia y concentración de
especies absorbentes, la ley general es usualmente escrita
como donde: (A) es la absorbancia medida, (a) es el coeficiente
de absortividad [sic] dependiente de la longitud de onda. (b) es el
trayecto óptico.
C es la concentración del analito. Cuando se trabaja en unidades
de concentración de molaridad, la ley de Lambert-Beer se
describe como: A = * b * c. (Holler et al., 2008, p. 337).
Donde b es el coeficiente de absorción molar dependiente de la longitud de
onda. Así como otras técnicas analíticas, EAA requiere una cuidadosa
calibración, la verificación de interferencias de la muestra, de la calibración,
de los estándares de calibración y un blanco de control. Esta técnica también
puede presentar interferencias, debido a que algunos elementos pueden
interrumpir el paso de luz en esa determinada longitud, provocando un ruido
o detección espuria en la medición.
Por EAA es posible determinar más de setenta elementos, metales y
metaloides.
Para la toma de muestras, una vez ubicados los puntos de interés pericial, el
personal de laboratorio debe realizar siempre un blanco de control y se
emplea una solución conocida de ácido nítrico al 5% diluido en agua ultra
pura.
El agua es ultra pura porque el agua normalmente posee minerales, es decir,
presencia de metales que tenemos que eliminar para que no estén dentro de
nuestra propia solución. Es por esto mismo que se realiza un blanco de
control para poder medirlo después.
Cada muestra y material que se desea medir en EAA, posee sus
propias condiciones instrumentales, que por lo general están
bastante normalizadas en su uso. Para determinar presencia de
deflagración de un arma de fuego por experiencia se toma
valores de corte que superando esos límites significa que existe
una probabilidad de coincidencia que los determinan en Plomo
Pb 1000 ng, Antimonio Sb 20 ng y Bario Ba en 150 ng. (Ferrari y
Giannuzzi, 2006, p. 252).
Seguidamente, te invito a profundizar la aplicación del instrumental EAA en el
estudio de concentración de los tres elementos característicos y específicos
de los residuos de disparo (bario, plomo y antimonio) en el artículo
“Determinación de residuos de disparo por arma de fuego mediante
espectrofotometría de absorción atómica” de los autores Bautista
Hernández, Antonio y Larico Laura, Iván.
Determinación de residuos de disparo por arma de fuego mediante
espectrofotometría de absorción atómica.pdf
357.9 KB
Fuente: Bautista Hernández, A. y Larico Laura, I. (2018). Determinación de Residuos de Disparo por Arma de
Fuego mediante espectrofotometría de Absorción Atómica. Rev Mex Med Forense, 3(1):40-48. Recuperado de
https://www.medigraphic.com/pdfs/forense/mmf-2018/mmf181e.pdf
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Lección 3 de 5
Espectrofotometría ultravioleta visible (UV-VIS)
Esta longitud de onda se asocia a la técnica de análisis del mismo nombre,
que permite tanto cualificar como cuantificar sustancias. Su uso es muy
difundido en los laboratorios químicos por su practicidad y simplicidad. En la
investigación empleamos no solo el instrumental UV-Vis, sino también las
luces forenses de esta longitud de onda y los fenómenos físicos que provoca.
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Lección 4 de 5
Lámpara de Wood, radiación ultravioleta
Lámpara de Wood, radiación ultravioleta. Fluorescencia.
Longitudes cortas y largas empleadas en muestras para
análisis criminalísticos
Vimos los fenómenos de fluorescencia en el capítulo anterior y cómo se
comporta la absorción de radiación ultravioleta o visible por parte de una
especie atómica o molecular. El producto de la absorción del fotón por la
especie es una excitación electrónica, cuya forma de relajación más común
supone la conversión de la energía de excitación en calor, pero también están
los procesos de relajación ocasionales de reemisión de fluorescencia o
fosforescencia. Es importante destacar que el tiempo de vida del fenómeno
es, en general, tan pequeño, que su concentración en cualquier momento es
insignificante.
La radiación UV-VIS es absorbida por aquellos electrones posicionados en los
orbitales de enlace. Esto permite tanto el estudio de los grupos de enlace de
la molécula a estudiar como la cuantificación en concentración de los grupos
absorbentes de esta energía.
La absorción de la radiación ultravioleta y visible que manifiestan las
moléculas ocurre en general en una o más bandas de absorción electrónicas,
cada una de las ellas está conformada por muchas líneas discretas muy
juntas. La luz simplemente ultravioleta es propagada por una lámpara que
emite en esta longitud de onda; este tipo de sistemas de medición poseen
filtros que orientan a la emisión y protegen, por medio del filtrado de los rayos
UV, de aquellas incidencias externas puedan interferir en la medición. Con
estas fuentes de luz negra pueden estar diseñadas lámparas fluorescentes,
lámparas de vapor de mercurio, diodos emisores de luz, láseres o lámparas
incandescentes.
En las ciencias forenses, se conoce a esta fuente de luz como lámpara de
Wood. A pesar de la baja potencia UV-a emitida por las luces negras, no es un
peligro para la piel o los ojos y puede verse sin protección. Potentes fuentes
ultravioletas presentan peligros y requieren un equipo de protección
personal; pero, como también vimos, este tipo de lámparas son usadas como
germicidas, por lo que su uso debe ser prudente cuando se emplea para la
búsqueda de rastros biológicos.
El empleo puede ser directo, tal como se muestra en la figura 11 y como
estudiamos en el módulo 2 de esta materia; pero también puede ser de
forma indirecta, como es en el caso de mediciones UV-VIS o del
espectrofotómetro UV-VIS, también conocidas como mediciones
calorimétricas. Estas se basan en los espectros de absorción y, por lo tanto,
de cuantificación, por lo que pueden determinar la concentración de un
compuesto en solución.
Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida
depende de forma lineal de la concentración, en el
espectrómetro UV-VIS se puede seleccionar la longitud de onda
de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma. (Castellanos Márquez, 2013,
http://goo.gl/g3n2zj).
Las mediciones para cuantificar por espectroscopia UV-VIS, al igual que la
calibración de GC, EAA y todo método instrumental, requiere una recta de
calibrado, con la que se cuantificarán las concentraciones con patrones
internos y se conocerá el punto medio que se desea estudiar para generar, al
menos, dos puntos por encima y dos puntos por debajo de este valor. Así, se
podrá determinar una recta con una cierta linealidad y con su
correspondiente error
Figura 11: Papel moneda bajo la luz UV: arriba billete de curso legal, abajo
billete falsificado
Fuente: elaboración propia
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Lección 5 de 5
Referencias
Bautista Hernández, A. y Larico Laura, I. (2018). Determinación de Residuos
de Disparo por Arma de Fuego mediante espectrofotometría de Absorción
Atómica. Rev Mex Med Forense, 3(1):40-48. Recuperado de
https://www.medigraphic.com/pdfs/forense/mmf-2018/mmf181e.pdf
Castellanos Márquez, N. (2013). Lección 2: Teoría de la absorción molecular
UV-VIS [Publicación en línea]. Recuperado de
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/401539/exe-
2%20de%20agosto/leccin_2_teora_de_la_absorcin_molecular_uvvis.html
Ferrari, L., y Giannuzzi, L. (2006). Manual de Técnicas de Laboratorio en
Toxicología y Química Forense. Argentina: Praia.
Holler, F., Nieman, T., y Skoog, D. (2008). Principios de Análisis Instrumental
(6.a ed.). España: McGraw-Hill.
Ministerio de Seguridad. Buenos Aires Provincia. [Imagen intitulada sobre
accesorio DRS]. (s. f.). Recuperado de
http://www.mseg.gba.gov.ar/mjysseg/Policia%20Cientifica%202/fotos/labqu
imico/grandes/lq_esppl.jpg
Ministerio de Seguridad. Buenos Aires Provincia. [Imagen intitulada sobre
paso óptico]. (s. f.). Recuperado de
http://www.mseg.gba.gov.ar/mjysseg/Policia%20Cientifica%202/fotos/labqu
imico/grandes/lq_inliq.jpg
Shimadzu. [Imagen intitulada sobre accesorio DRS]. (s.f.). Recuperado de
http://www.shimadzu.com/an/ftir/support/ftirtalk/qn5042000000kcoa-
img/qn5042000000lnxt.gif
Termo Scientific. [Imagen intitulada sobre accesorio DRS]. (s. f.).
Recuperado de https://www.thermoscientific.com/en/about-us/general-
landing-page/ftir-sampling-techniques-atr/jcr%3acontent/content-par-
main/columncontrol_de49/colPar2/image_cf8a.img.jpg/1431109426582.jpg
