ESPECTROSCOPIA VIBRACIONAL (IR)

¿Para qué se usa la Espectroscopia IR en la industria farmacéutica?

● Identificación de sustancias puras ya que es una técnica altamente específica. Se considera que si los espectros de 2 sustancias son superponibles, es decir que son
equivalentes, se trata de la misma entidad química. Por lo tanto tiene un criterio legal de identificación
● Estudio de Polimorfismo (ID/Pureza): tanto para el análisis cualitativa cómo para el ensayo de cuantificación, es decir para poder hacer pureza polimórfica
● Análisis Estructural de sustancias, principalmente en la identificación de grupos funcionales.
En la industria farmacéutica es muy importante para la caracterización de estándares de referencia.
En la industria farmacoquímica adquiere aún más relevancia

En esta diapositiva vemos el espectro electromagnético.

Si consideramos la escala del espectro en longitudes de onda, podemos mencionar en orden creciente a: los rayos
gamma, rayos x, UV, IR y más allá las microondas y ondas de radio
El IR está en una zona media del espectro

El IR está citado en una zona de menor energía que el UV

A ↑mayor número de onda, ↓longitud de onda, ↑ frecuencia, y ↑energía

El espectro IR va desde aproximada 20 cm(-1) a 12500 cm(-1) y está dividido en 3 partes:

IR LEJANO IR MEDIO (MIR) IR CERCANO (NIR)

20 - 400 cm(-1) 400 - 4000 cm(-1) 4000-12500 cm(-1)

Sin utilidad analitica para la industria farmaceutica Zona que tuvo un desarrollo de aplicaciones más recientes
 Respecto a las transiciones en las moléculas, a diferencia en lo que vimos el UV, donde la energía es mayor que en
la zona del IR y se producía la promoción de un electrón a un orbital de mayor energía, en el IR solo se producen
transiciones vibracionales y rotacionales

UV→ mayor energía, y transiciones electrónicas

IR → menor energía y transiciones vibracionales y rotacionales

PRINCIPIO DE LA ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA:

Las moléculas están formadas por átomos unidos por uniones químicas
Los enlaces naturalmente vibran, es decir que tienen movimientos de estiramiento y doblado. Estas vibraciones dependen del tipo de enlace y del entorno.
Las vibraciones aumentan la amplitud si una radiación electromagnética de energía adecuada incide sobre la molécula.
Entonces un determinado enlace solamente absorberá energía de radiación IR, cuya frecuencia corresponde exactamente a la requerida para elevar el nivel de energía del enlace.
Si ↑ gradualmente la frecuencia de radiación IR a una determinada frecuencia, cada enlace absorberá energía provocando que esté entre en vibración, o sea se estire o se doble
La frecuencia de absorción es lo suficientemente fija para ser usado en identificación pero también lo suficientemente sensible a las variaciones del medio cómo para brindar
información sobre él. Esto quiere decir que grupos funcionales cercanos influyen y provocan corrimientos en la frecuencia de absorción.
A ↑ fuerza de enlace y ↓masa de los átomos, ↑ es la frecuencia de absorción

Si vemos un espectro IR, las bandas de absorción que se encuentran más a la izquierda, o sea a mayor longitud de
onda, donde mayor es la frecuencia y la energía, corresponden a enlaces que requieren más energías para vibrar

Por otra parte, el mismo enlace puede experimentar distintos tipos de vibraciones a distintas longitudes de onda.
Las vibraciones corresponden a estiramientos que requieren más energía que las de doblado, por lo tanto para ese
enlace la banda de estiramiento va a estar ubicada más a la izquierda que las de doblado
Ejemplo: enlaces O-H que tienen una banda de absorción a 3700 cm(-1) de estiramiento y 1250 cm(-1), de flexión
(doblado) que requiere menor energía que la de estiramiento
 TIPOS DE VIBRACIONES MOLECULARES

VIBRACIONES DE TENSIÓN O ESTIRAMIENTO VIBRACIONES DE FLEXIÓN O DOBLADO

Pueden ser: Pueden ser:

- Simétricas - Torsiones en el plano del tipo balanceo
- Asintimétricas - Tijereteo en el plano o scissoring
- Aleteo fuera del plano
- Torsión fuera del plano

Sustancias que Absorben Radiación IR: Sustancias que NO Absorben Radiación IR

● Cualquier vibración molecular que desplaza una carga eléctrica absorbe radiación IR. ● Especies atómicas: He, Ne, Ar, Kr
● Moléculas diatómicas con átomos diferentes: HCl, CO. ● Especies moleculares: H2 , N2 , O2 , F2 , Cl2 , Br2, porque son moléculas diatómicas,
● Vibraciones asimétricas en moléculas poliatómicas. simétricas y por lo tanto NO tienen momento dipolar
● Grupos funcionales unidos a polímeros, etc. ● Sales iónicas: NaCl, KCl
Básicamente las moléculas asimétricas que tienen cambios en el momento dipolar ● Todas las especies diatómicas homonucleares sin un dipolo permanente.
NO PUEDEN SER DETERMINADAS POR ESPECTROSCOPÍA IR

EQUIPO DISPERSIVO
Tenemos la fuente de radiación IR, luego tenemos un dispositivo llamado splite que tiene cómo función dividir a los
IR en 2, uno atraviesa la muestra y el otro el de referencia.
Luego ambos haces pasar por el atenuador que atenúa la de referencia, es decir reduce la intensidad para igualarlo
con el haz de la muestra, es decir que se produce una atenuación cada vez que el detector percibe una diferencia en
la intensidad de los haces.
Esto está sincronizado con el registrador, de modo tal que su posición es una medida de la intensidad relativa de los 2
haces y por lo tanto de la transmitancia de la muestra.
Luego los haces son dirigidos con una serie de espejo hacia el alternador quien deja pasar alternadamente el haz de
la muestra y de la referencia hacia el monocromador, que descompone el haz IR en sus componentes, es decir que
dispersa la luz en sus diferentes longitudes de onda que luego son dirigidos hacia el detector

Cuando un enlace absorbe se produce una diferencia respecto a la señal del haz de referencia, que es percibido por
el detector y finalmente registrado en el espectro.

La red de difracción y prismas están hechas con sales de haluro, KBr y NaCl que son sustancias muy sensibles a la humedad. Por ende los equipos tienen en diferentes partes
compartimentos para colocar bolsas con material desecante cómo por ejemplo silica gel o tamices moleculares para mantener el equipo seco y evitar el deterioro de las partes. Esto
tambien aplica a los equipos de FT-IR.
 En los equipos dispersivos, la luz policromática que sale de la muestra es separada en haces
monocromáticos, cuya longitud de onda varía en función del tiempo hasta barrer todo el
espectro IR. La radiación pasa por el detector en forma secuencial.

En los ESPECTRÓMETROS DE TRANSFORMADA DE FOURIER (FT-IR), NO hay monocromadores

ni elementos dispersivos de la radiación.

El espectrómetro de Fourier a través de un dispositivo llamado interferómetro de Michelson

transforma la señal policromática en su totalidad. Las IR pasan por la muestra y se obtiene el
interferograma que es una función de amplitud vs tiempo y se transforma mediante un
procedimiento matemático denominado Transformada de Fourier en un espectro
convencional de intensidad en absorbancia o transmitancia vs frecuencia en número de onda.

Vemos la fuente de radiación IR, luego el haz es direccionado con un espejo hacia el
interferómetro de Michelson que está compuesto por un espejo fijo, un espejo móvil y el
divisor de haz. Luego el haz es dirigido hacia la muestra, y finalmente hacia el detector.

El Láser de He/Ne, emite un haz monocromático que le sirve al equipo cómo una referencia fija de longitudes de onda, confiriendo al equipo una gran exactitud.
Esto es una característica de los EQUIPOS DE FT - IR que NO TIENEN los EQUIPOS DISPERSIVOS

ESQUEMA ÓPTICO DE UN INTERFERÓN DE MICHELSON

Interferómetro de Michelson que está compuesto por dos espejos, espejo fijo, un espejo móvil y el divisor de haz
(Beam splitter) que tiene la característica que la mitad del haz se refleja y la otra lo atraviesa y asi es como logra
dividir el haz incidente en dos haciendo que una mitad vaya al espejo fijo y la otra mitad al espejo móvil. Si los dos
espejos estuvieran equidistantes el detector detecta lo mismo que si no estuviese el interferómetro.
ESPEJO MÓVIL: se mueve a una velocidad constante y al moverse produce un retraso de fases o interferencias que
dependen de la λ de la radicación y de la distancia de desplazamiento del espejo. El detector lo capta como una
serie de máximos y mínimos sucesivos de intensidad.
El INTERFEROGRAMA es la suma de todas las ONDAS COSENO.
En esta diapo se representa un interferograma simplificado de solo 3 frecuencias discretas de luz, cada una produce una amplitud de
onda coseno señal en función del tiempo.
Las 3 frecuencias entran juntas al interferómetro y se obtiene como resultante el INTERFEROGRAMA como la suma de las 3 ONDAS
COSENO.
Cualquier combinación de frecuencia con sus amplitudes correspondientes producirá un INTERFEROGRAMA que es único y
contendrá toda la información espectral.

CONVERSIÓN DE UN INTERFEROGRAMA EN UN ESPECTRO MEDIANTE TRANSFORMADA DE FOURIER

Interferograma de amplitud vs tiempo.Y su conversión a un espectro convencional aplicando la transformada

de fourier obteniendo a la derecha el espectro de intensidad vs frecuencia.
La medición corresponde a un bracun que corresponde a un blanco, es decir el espectro que se obtiene sin la
muestra. Las señales que se ven son los gases que se detectan en la cámara del equipo IR, básicamente vapor
de agua e hidróxido de carbono del ambiente.

Cuando uno hace una determinación al IR lo primero que se corre es un background que es lo que vemos a la
izquierda de a diapo, el equipo lo grabe y lo descuenta luego al correr las sucesivas muestras. Es una buena práctica
correr un blanco cada tanto ya que el background puede ir cambiando con el transcurso del día.
El INTERFEROGRAMA es ÚNICO y contiene toda la información ESPECTRAL de la MOLÉCULA aunque no es posible
interpretarlo hasta convertirlo en un espectro.
 COMPARACIÓN DE UN EQUIPO DISPERSIVO VS UN EQUIPO DE TRANSFORMADA DE FOURIER (FT-IR)

EQUIPO DISPERSIVO TRANSFORMADA DE FOURIER

DESVENTAJAS → VENTAJAS →
Tienen mayor desgaste por tener más cantidad de partes móviles. También por contar con este laser que sirve de referencia interna y por tener menos
Son afectados por luz espuria probando errores en las mediciones partes móviles y otro diseño hace que las frecuencias de calibraciones sean menores en
El rango lineal es menor, ya que tienen mayores limitaciones debido a la baja intensidad los equipos de (FT-IR)
de sus fuentes y la baja sensibilidad de sus detectores.
La velocidad de análisis es mayor.
Usa una porción de haz total y como consecuencia tienen menor sensibilidad y baja
Recopilan todas las frecuencias simultáneamente y no sucesivamente como en uno de
relación señal/ruido.
barrido, esto se llama Ventaja de Fellgett otorgando a los equipos de (FT-IR) una
sensibilidad aumentada, mayor velocidad y mejor relación señal/ruido.
VENTAJAS →
Exactitud, Precisión y Reproducibilidad son muy superiores a los (FT-IR) por contar con
láser que funciona como referencia interna. Por ejemplo a 4000 cm-1 la exactitud de un Con respecto a la relación señal/ruido sabemos que el ruido es aleatorio y la sumatoria
equipo (FT-IR) es arox 0,01 cm-1 mientras que es un EQUIPO DISPERSIVO es 1,50 cm-1 tiende a anularse debido a que las desviaciones positivas y negativas al promediarse se
anulan.
También sabemos que el ruido aumenta con las √del número de repeticiones de la
medición.
Cuando hay señal, la sumatorio siempre da un incremento de la misma.
Debido a que en un equipo (FT-IR) uno puede realizar varios barridos sobre la misma
muestra, por ejemplo, 20 barridos se logra aumentar considerablemente la relación
señal/ruido.
La calidad espectral es claramente mayor en un equipo (FT-IR) ya que me permite hacer
menores intervalos en la frecuencia de medida logrando de esta forma una mayor
resolución. Y también suma a la calidad espectral lo que ya vimos de una mayor relación
señal/ruido en los equipos (FT-IR)

CONVERSIÓN DE UN ESPECTRO
Un espectro IR se puede presentar en % de transmitancia o absorbancia en función del número de onda.
Desde el punto de vista CUALITATIVO es indistinto aunque es más común encontrar los espectros en % de transmitancia.
Desde el punto de vista CUANTITATIVO es más cómodo trabajar directamente en absorbancias ya que se pueden tomar
estos valores directamente para hacer los cálculos cuantitativos.
 TÉCNICAS DE LECTURA DE MUESTRAS EN FT-IR

TRANSMISIÓN DIRECTA REFLECTANCIA TOTAL ATENUADA REFLECTANCIA DIFUSA

(ATR)

ESQUEMA DEL FUNCIONAMIENTO DEL DISPOSITIVO ATR DRIFTS → Diffuse

(reflectancia total atenuada) PARA SÓLIDOS Reflectance Infrared
Es la técnica más clásica y se ve tanto para fases sólidas Fourier Transform
como líquidas. Spectroscopy

FASE SÓLIDA FASE LÍQUIDA

PASTILLAS DE KBr Generalmente se analizan los líquidos

puros. También se pueden analizar Al igual que el ATR es una
sustancias en solución pero es mucho técnica diferente a la
menos común. transmitancia directa
donde el dispositivo se
PASTILLAS PARA monta también dentro del
SUSPENSIONES/LÍQUIDAS equipo IR y permite hacer
SUSPENSIONES EN NUJOL, TAMBIÉN mediciones por
CONOCIDA COMO PARAFINA Es una técnica de lectura IR diferente a la transmitancia
directa. El dispositivo IR se monta directamente en el equipo refractancia, pero el
LÍQUIDA DE ALTO PM. principio es diferente al ATR
IR y permite hacer mediciones de la sustancia por
refractancia. En este caso la muestra
La muestra pura sin tratamiento se coloca sobre el cristal. sólida en polvo se debe
Este cristal ATR tiene como característica un alto índice de moler y se diluye en una
refracción generalmente 2,2 o más. concentración que va del
En FASE SÓLIDA lo más habitual es preparar las 5-10%. Esta mezcla se
muestras en KBr o NaCl. Los materiales utilizados para fabricarlos pueden ser:
- Sales de estaño introduce en un
El motivo por el cual se usan las sales de haluro pocillo/tacita, luego con
como el KBr o NaCl es que a ALTAS PRESIONES - Seleniuro de zinc
- Diamante una espátula se alisa la
son TRANSPARENTES al IR. superficie y se coloca en el
Esto es análogo al UV donde se usa el CUARZO El haz IR penetra el cristal en cierto ángulo que permite
realizar múltiples reflectancias internas, en cada una de estas dispositivo de lectura que
para la fabricación de las cubetas por ser consiste en una serie de
transparentes al UV. se crea una onda o haz evanescente (representado por los
puntos rojos). Está onda se extiende más allá de la superficie espejos que direcciona el
Es transparente en amplias zonas del externa unos pocos micrones. haz IR hacia la muestra
La PASTILLA se prepara mezclando KBr con la IR aunque no en todo el espectro. donde el haz IR se refleja y
muestra en una concentración que va del La interacción se produce en cada reflexión interna cuando el
Tiene 2 zonas donde absorbe una haz IR como onda evanescente entra en contacto con la luego con otra serie de
0,5-1% y se usan aprox 100 mg de KBr. Se alrededor de 2900 y la otra a 1400 espejos todos los
muestra que está sobre el cristal.
mezcla y se muele en un mortero de ágata, la cm-1. RESUMEN: componentes de reflexión
molienda es necesaria para impedir la Las preparaciones son muy sencillas, ↑ N° de refracciones , tenemos ↑ información de la muestra y son dirigidos nuevamente
dispersión de la luz y la distorsión de las se hacen tomando 5-10 mg de se obtienen espectros ↑ ricos. al equipo IR.
bandas. muestra sólida y se agregan unas Una propiedad de la muestra a considerar es que a ↑ índice
TAMAÑO DE PARTÍCULA tiene que ser MENOR gotas de nujol. Esto se hace sobre un de refracción de la muestra, ↓ es la interacción con el haz IR. TIPOS DE REFLEXIONES
que la longitud de onda más corta, es decir, a mortero de ágata para poder Una característica del ATR es que a ↓ N° de onda, ↑ es la
4000 cm-1 estamos hablando de 2,5 micrones. homogeneizar bien. penetración. Por lo tanto las bandas cercanas a 4000 son
Una vez formada la suspensión se menos intensas comparándolas con las mismas bandas que se
colocan unas gotas entre 2 placas de obtienen por transmisión directa, por este motivo los equipos
KBr (son pre-armadas, se venden, son usan una corrección para que los espectros luzcan sin
bastantes más gruesas que las que diferencias.
uno arma en el laboratorio en el TIPOS DE MUESTRAS QUE SE PUEDEN ANALIZAR:
pastillero y ademas son re-utilizables, ● Muestras muy absorbentes o gruesas, que producen
Analicemos cómo
solo hay que tener la precaución de bandas intensas cuando se miden por transmisión
interacciona el haz IR con la
lavarlas bien con un solvente orgánico directa.
muestra en reflectancia
para no dañarlas). Luego las dos El ATR funciona muy bien para estas muestras porque la
difusa.
placas con la muestra suspendida en intensidad de las ondas evanescentes decae
Cuando un haz IR se enfoca
nujol se colocan en un soporte y se lee exponencialmente con la distancia desde la superficie del
en una material particulado
al IR directo por TRANSMISIÓN. cristal. Lo que hace que la técnica sea generalmente
fino, el haz incidente puede
Los POLIMORFOS INESTABLES que son insensible a l espesor de la muestra.
interactuar con las
sensibles a la transformación Un ejemplo extremo puede ser una bolsa de polietileno
partículas de varias formas:
polimórfica al APLICAR PRESIÓN negra que es imposible analizar por transmisión directa.
1) La radiación puede
cuando hacemos las pastillas se ● Gomas, geles, pastas y sustancias que no fueran pastillas
reflejarse en la superficie
pueden analizar muy bien en nujol. se pueden medir con ATR
sin penetrar la partícula.
Hay otros dispersantes como es el
Este fenómeno se llama
fluorolube que es un aceite de un ATR HORIZONTAL (HATR)
reflexión especular
polímero fluorado, que tampoco es Lo que está de color naranja
verdadera, es superficial y
Luego la muestra se coloca en el PASTILLERO. transparente en todo el IR, absorbe en es el prisma, tiene una
no tiene información de la
la zona del 1300-900 cm-1. superficie importante y como
muestra.
Las caras del pistón y la base donde se va a Los líquidos puros analizados por ya vimos la muestra se coloca
2) La luz puede sufrir
formar la PASTILLA tienen que tener un pulido transmisión directa se puede medir de sobre la misma.
múltiples reflexiones en la
espejo para evitar la imperfección de la 2 formas: La foto de la izquierda corresponde a la tapa o parte superior
superficie de la partículas
superficie de las pastillas que puedan provocar 1) Celda para líquidos (como la de la que tiene un mecanismo para ejercer presión sobre la
sin penetrarlas, este
pérdidas en la calidad del espectro. imagen de arriba) que muestra y asegurar un buen contacto de la misma sobre la
fenómeno se llama
El PASTILLERO tiene un pico para conectarlo al normalmente se usa para líquidos superficie del cristal. Esto es muy importante ya que la onda
reflectancia especular
VACÍO. Esto hay que hacerlo cuando se coloca no viscosos. La celda está evanescente penetra solo unos pocos micrones sobre la
difusa, también es
el PASTILLERO en la PRENSA y se da PRESIÓN construida con KBr para líquidos muestra , si no hubiera buen contacto no se produciría la
superficial y tampoco lleva
(700-1000 kg/cm2)para formar la PASTILLA y es NO POLARES o HgCl para líquidos medición.
información de la muestra.
para evitar la formación de burbujas que lo POLARES. En el dibujo se muestra el camino óptico del haz IR donde se
Este componente es
opacarian. Está conformado por varias placas, pueden apreciar las múltiples reflexiones del haz en el
función del índice de
Si las PASTILLAS quedan opacas por las la del medio es hueca para poder prisma. Con cada rebote o reflexión el haz IR llevará
refracción de la muestra.
burbujas sería un efecto indeseado ya que la contener el líquido que se coloca información de la muestra. Cuando más rebotes se producen,
lectura se hace por transmisión directa y la con una jeringa a través de unos más intensidad de señal se tendrá. 3) Reflectancia difusa
opalescencia interferiría. orificios. Luego se monta en un En algunos modelos el haz de incidencia se puede modificar a verdadera resulta de la
soporte de acero inoxidable que es conveniencia para penetración de la radiación
Las condiciones que se utilizan permiten que el mismo que se utiliza para las ↑ o ↓ las señales, pero en la mayoría de los modelos está fijo incidente en una o más
las sales de haluro se vuelvan transparentes. pastillas prearmadas. en un ángulo tal que permita obtener la mayor cantidad de partículas de la muestra. Es
2) Líquidos viscosos, se pueden usar reflexiones posibles. el único componente de los
El KBr que las mismas placas de KBr 3 que trae información
utilizamos pre-armadas que se usan para las ATR DE DIAMANTE DE REFLEXIÓN SIMPLE espectral por haber
para preparar suspensiones en nujol colocando penetrado las partículas.
las PASTILLAS directamente una gota de muestra Otro mod
tiene que pura entre las dos placas. elo Los primeros 2 fenómenos
estar seco, Normalmente no se necesita un de especulares son
por eso el camino óptico mayor. ATR indeseables ya que no
frasco se aportan información, pero
suele Muestra sólida en solución no suele MICRO ATR son fenómenos que van a
conservar dentro de un desecador. ser la forma más común ni la muestra ocurrir siempre en esta
El agua presenta 2 bandas de absorción a 3800 elegida para leerlas. Por varios técnica.
y 1600 cm-1 y podría tapar señales que motivos: Para disminuir la influencia
aparecen a esa frecuencia. - Se pierde información de la de estos componentes se
muestra al estado sólido debe moler la muestra ya
El KCl es algo menos higroscópico que el KBr. (POLIMORFISMO) que a ↑ tamaño de
Hay que tener precaución cuando analizamos - El solvente puede interferir partícula, ↑ es la
sustancias que son sales clorhidrato ya que por absorber al IR contribución especular.
cuando se usa KBr para hacer las PASTILLAS se Y también se debe diluir en
pueden convertir en BROMHIDRATOS. Si Como se puede apreciar en la foto, la superficie del prisma es un matriz no absorbente
siempre se usara KBr no sería problema ya que muy chica y solo se coloca una punta de espátula de la como es el KBr.
compramos la muestra y el std en las mismas muestra. La parte superior es una pequeña prensa para Los espectros son más
condiciones, pero sería preferible el uso de KCl. asegurar el contacto íntimo de la muestra con la superficie del pobres ya que se pierden
Las sustancias que son OXIDANTES pueden cristal. aprox el 90% de la luz
interaccionar con el KBr pasando el Br- a Br2+ En este caso las reflexiones internas están optimizadas al incidente.
generando de esta forma pastillas marrones máximo para lograr efectos adecuados con una superficie
más opacas afectando la medición de la mínima de cristal. Cuando se usa esta técnica
muestra VENTAJAS DEL ATR → con fines cuantitativos se
Se dice que un buen espectro en zonas de NO - La preparación de la muestra es muy fácil y rápida. Solo se usa una corrección llamada
absorción tendría que dar una línea de base coloca la muestra en el cristal, se ajusta la prensa y se lee. cubeta munk que hace que
mayor a 70-75% de transmitancia. - La limpieza es rápida y sencilla, simplemente se retira la la intensidad de las bandas
En ciertos casos para POLIMORFOS INESTABLES muestra y se limpia la superficie del cristal. vs concentración sea lineal.
se podría producir una transformación - Las muestras se analizan en sus estados naturales, no es
polimórfica cuando se entrega energía o necesario calentarlas o presionarlas como por ejemplo una VENTAJAS DEL DRIFTS →
presión en la preparación de la PASTILLA. Esto bolsa de polietileno cristal cuando se analiza por - Poca preparación de la
no es una regla general y dependerá de la transmitancia directa. Tampoco es necesario ejercer presión muestra.
sustancia y sus polimorfos. - Fácil limpieza.
 osmolar por lo que es IDEAL PARA POLIMORFOS QUE SON DRIFTS AUTOMÁTICO
SENSIBLES A MANIPULACIONES.
- Es excelente para muestras gruesas o muy absorentes como
por ejemplo un caucho negro o una bolsa negra.

ESQUEMA DEL FUNCIONAMIENTO DEL DISPOSITIVO DE ATR

PARA LÍQUIDOS
El principio es el El un carrusel con varias
mismo y hay posiciones para colocar la
varios modelos. En muestra.
la diapo se ve un
modelo cilíndrico
donde el cristal
está en la parte
interna y está
rodeada por un
cilindro que
contiene la muestra líquida en contacto de la superficie del
cristal del ATR.

TRANSFORMADA DE FOURIER (FT-IR) DE MESADA

Como todo instrumento de laboratorio debe estar en un programa de mantenimiento preventivo y calibraciones.
La verificación de la performance se realiza con un film de poliestireno que la farmacopea vende como un std de referencia y la misma
farmacopea indica que pruebas hacer.
Se verifican 2 parámetros:
1) Exactitud del número de onda, donde se verifican una serie de bandas típicas de poliestireno que tienen que salir a determinado
número de onda..
2) Resolución donde se mide el pico y el valle de unas bandas especificadas que tienen que tener un mínimo de porcentaje de
transmitancia.

TRANSFORMADA DE FOURIER (FT-IR) PORTÁTIL

 INTERPRETACIÓN DE ESPECTROS IR

● ID (Cualitativo). → Con respecto a la identificación de sustancias, lo más habitual es armar una biblioteca o librería con los espectros de los estándares de referencia ya corridos.
No es necesario correr un estándar de referencia en el momento, las mediciones son tan reproducible y exactas que se puede usar un espectro ya corrido y almacenado en la
biblioteca. Solo se debe tener la precaución de haber hecho la determinación con los mismos parámetros de medición.
Cuando se hace la comparación del espectro de la muestra con la sustancia de referencia se debe comparar las posiciones de las bandas y sus intensidades relativas. Los
software pueden hacer esta comparación y reportan un valor de munch en porcentaje.
● Estudio de Polimorfismo → El IR es una de las técnicas analíticas que se pueden utilizar junto con otras como rayos x y análisis térmicos como DSC y TGA. Cuando el IR
diferencia los polimorfos generalmente es la técnica de elección para el análisis cualitativo ya que es un equipo común en la industria farmacéutica y es muy sencillo y rápido el
análisis.
En cierto casos y con limitaciones la espectroscopia IR se puede utilizar para cuantificación de polimorfos. La principal limitación de la técnica como test cuantitativo es que el
método cumpla con los requerimientos de linealidad.
En IR debido a que las bandas de absorción son relativamente estrechas, las desviaciones instrumentales de la ley de lambert y beer son más comunes que con la radiación UV
visible. Una opción puede ser como tes límite es decir como método semicuantitativo, de está forma los requerimientos son menos estrictos.
Otra limitación es encontrar un banda de absorción que sea típica del polimorfo que estamos buscando como no deseado o impureza yq ue no aparezca en el polimorfo de
interés.

Este es el espectro típico de background que se obtiene sin la muestra y las bandas de absorciones que
se detectan corresponden principalmente al VAPOR DE AGUA y CO2 del ambiente.
1) VAPOR DE AGUA → absorbe a 3800 y 1600 cm-1
2) CO2 → 2400 cm-1
En las lecturas de las muestras el equipo automáticamente descuenta las bandas de absorciones del
último background corrido. IMPORTANTE!!! cada tanto hacer un background ya que la composición
ambiental puede sufrir cambios durante la jornada y por lo tanto puede afectarse espectros obtenidos de
las muestras.
Las bandas del VAPOR DE AGUA y CO2 del ambiente son fuertes y pueden solapar señales.
2 espectros de una impureza de la ranitidina llamada bis-ranitidina. Ambos espectros se obtuvieron por
transmitancia directa en pastillas de KBr.
ESPECTRO ROJO → Se preparó en una pastilla con una concentración mayor a la recomendada, en vez
de 0,5-1% se preparó al 5% y vemos que hay algo de saturación del detector.
ESPECTRO AZUL → Vemos la interferencia del agua y del CO2, se debería correr nuevamente el
background para mejorarlo.

REPASANDO:
ZONA DE HUELLAS DIGITALES → va de 1400 a 400 cm-1 y es una región de enlaces simples con fuerzas
similares y esto resulta en una interacción mutua muy fuerte. En esta región las bandas son MUY
SENSIBLES a cambio estructurales.
Cada compuesto tiene su propio y específico perfil.
ZONA DEL IR MEDIO → va de 4000 a 1400 cm-1 es útil para identificar grupos funcionales.

Espectro de la impureza A de la doxazosin, correspode al compuesto diclorhidrato y trihidrato.

Ambos espectros se obtuvieron por transmitancia directa en pastillas de KBr.
El espectro de arriba se preparó en una pastilla muy ancha porque se usó demasiado material y como
consecuencia se ve saturación del detector y pérdida de señales.
Se corrieron 2 polimorfos.
ESPECTRO AZUL → es la impureza A del doxazosin diclorhidrato y trihidrato.
ESPECTRO ROJO → Es la misma impureza diclorhidrato pero anhidra, es decir, sin agua de cristalización.
Como podemos apreciar ambos espectros son muy diferentes y pueden apreciarse claramente por IR.

Se corrieron 2 muestras de CIPROFLOXACINA.

ESPECTRO AZUL → es CIPROFLOXACINA BASE .
ESPECTRO ROJO → es CIPROFLOXACINA CLORHIDRATO
Ambos espectros son diferenciables por IR.
 POLIMORFISMOS EN IFAs
Se sabe que una sustancia puede tener varias formas cristalinas y presentar polimorfismos con distintas propiedades físicas como ser el punto de fusión o la solubilidad.
Por otra parte, no siempre tienen la misma actividad farmacológica, a veces tienen diferente biodisponibilidad.
El ejemplo típico son los distintos polimorfos del palmitato de cloranfenicol.
En otras ocaciones tienen comportamientos farmacotécnicos diferentes, por ejemplo los polvos pueden tener distinta fluidez o distinta densidad aparente.
Los polimorfos se analizan en FASE SÓLIDA ya que en solución la estructura cristalina desaparece.

El polimorfismo afecta a diversas industrias:

- Aditivos alimentarios, Colorantes, Agroquímicos, Fabricantes de explosivos y FARMACÉUTICA / FARMOQUÍMICA

Se estima que más de ⅓ de los APIs presentan polimorfismos por lo que no es un problema menor y requiere de un estudio minucioso.

DEFINICIONES

POLIMORFISMO SOLIDOS CRISTALINOS SÓLIDOS SOLVATOS O HABITOS CRISTALINOS

AMORFOS PSEUDOPOLIMORFISMO

¿Qué entendemos por polimorfismo? Los sólidos cristalinos están formados por una Igual composición Entidad sólida donde el Distintas morfologías en las
Habilidad de una sustancia de existir repetición tridimensional de una unidad estructural química que la de solvente, está incorporado cuales puede presentarse un
como dos o más fases cristalinas, con llamada “celda elemental” o “celda unitaria” los compuestos en cantidades sólido, teniendo la misma
diferente ordenamiento y/o Hay 7 sistemas cristalinos y se definen en base a la cristalinos, pero sin estequiométricas dentro del estructura interna.
conformaciones de las moléculas longitud de los vectores primitivos y al ángulo que estructura retículo cristalino son
dentro de la red. forman entre sí. cristalina propia. llamados SOLVATOS. Describe el aspecto externo
El polimorfismo indica la existencia de Agua → hidratos del cristal.
2 o más entidades sólidas formadas por Diferentes modificaciones
moléculas químicamente idénticas Un mismo solvato puede cristalinas pueden también
pero con una estructura interna Las drogas cristalizar en modificaciones tener diferentes morfologías
diferente. tienen 3 polimórficas distintas.
Sólidos pueden estar conformados por: sistemas Los solvatos se denominan Tipos de Hábitos Cristalinos:
• Sistemas Cristalinos. eventuales pseudopolimorfos. Tabular.
• Sistema NO Cristalino: AMORFO de asimetría Por desolvatación podemos Plato.
triclínico, obtener: Laminar.
monoclínico Una forma cristalina distinta. Dendrítico.
y Permanecer inalterado su Forma de agujas o acicular.
ortorrómbic retículo inicial.

• Poseen iguales unidades de Para la química farmacéutica

construcción pero Difieren en el los solvatos son
empaque considerados polimorfos
CONSECUENCIAS PRÁCTICAS DE TENER DIFERENTES MORFOLOGÍAS:
- Velocidad en la separación líquido sólido.
- Eficiencia de los lavados. Si tengo una torta que tengo que lavar con un volumen definido de solvente, puede ser que ese volumen no fuera suficiente afectando la eficiencia de
los lavados.
- Velocidad de secado.
- Propiedades de flujo. Por ejemplo la fluidez de un polvo en una comprimidora.
- Bulk density (densidad del sólido o densidad aparente). Que es volumen que ocupa el sólido por peso puede variar.

Si un compuesto puede cristalizar en más de una forma cristalina, esto se manifestará GENERALMENTE como
diferentes morfologías.

ALGUNAS PROPIEDADES EN LAS CUALES DOS POLIMORFOS PUEDEN DIFERIR:

Solubilidad, velocidad de disolución, biodisponibilidad.

Reactividad química al estado sólido.

Estabilidad: tratamiento mecánico, humedad, radiación, calor, etc.

Propiedades de superficie del sólido: carga eléctrica superficial, capacidad de adsorción, etc.

Comportamiento a la dilatación.

Color.

Características del polvo: densidad, agregación, reología, suspendibilidad, propiedades de deformación y de compactación, plasticidad.

Característica de las formas farmacéuticas: dureza, porosidad, elasticidad, plasticidad y “cracking” de los comprimidos.
 MÉTODOS PARA EL ESTUDIO DEL POLIMORFISMO:

DIFRACTOMETRÍA DE RAYOS X. MÉTODOS DE ANÁLISIS TÉRMICO (DSC, TG). MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS

• DSC: Differential Scanning Calorimetry. IR (se suele trabajar a la muestra en suspensión) en Nujol
• TG: Thermogravimetry. Reflectancia difusa (DRIFTS)
ATR
13C-RMN de sólidos.
Respecto a la transmitancia directa midiendo el polimorfo
en una pastilla de KBr va a depender de la estabilidad del
polimorfo, a veces la energía que se entrega para producir
la pastilla es suficiente para producir la transformación
polimórfica. En otros casos se puede usar sin problema,
dependerá siempre de la sustancia.

TECNICAS ANALITICAS EMPLEADAS (Difracción Rayos X - Térmicas - Espectroscópicas)

- Para un correcto estudio del polimorfismo deben ser empleadas en forma simultánea varias técnicas analíticas.
- Cada técnica analítica tiene sus limitaciones y ventajas.
- La técnica analítica a elegir para el seguimiento de los cambios de las fases cristalinas depende de cada droga en particular

El punto de fusión no suele utilizarse ya que muchas veces al fundir los cristales de menor punto de fusión induce la fusión de los otros de mayor punto de fusión.

Las TRANSFORMACIONES POLIMÓRFICAS se pueden dar durante los procesos productivos, durante la formulación e inclusive durante el almacenamiento (el ejemplo típico son los
hidratos que pueden transformarse durante el almacenamiento en otro polimorfo con un grado de hidratación diferente).
Con respecto a las transformaciones un POLIMORFO puede ser:

ENANTIOTROPICO MONOTRÓPICO

Cuando pueden interconvertirse reversiblemente cambiando PRESIÓN o TEMPERATURA. Donde la transición exotérmica sólido-sólido de la forma metaestable a la estable solo
Ej: azufre ocurre en una dirección y no es reversible.

IMPACTO DEL POLIMORFISMO EN LA INDUSTRIA FARMOQUÍMICA:

1 – REGULATORIO: Asegurar la reproducibilidad Lote a Lote de la misma fase cristalina y el mismo hábito cristalino.
2 - ECONÓMICO: Evitar cambios imprevistos de las fases cristalinas durante las distintas etapas del proceso. Ya que esto obligaría a reprocesar el producto para obtener el polimorfo
buscado
3- LEGAL: Generación de nuevas patentes o patentes subsidiarias a la de origen.
 TÉCNICAS ESPECTROSCÓPICAS

MIR (IR MEDIO) NIR (IR CERCANO) RAMAN

Espectros con mucha información, Es más reciente que el MIR. El fenómeno Raman es conocido desde principios del siglo XX, pero las
característicos de cada sustancia. Bandas Mide sobretonos y combinaciones de frecuencias de aplicaciones prácticas comienzan con la invención y uso del láser.
angostas de vibraciones fundamentales. vibraciones fundamentales que involucran por lo menos La espectroscopia Raman es una técnica que usa la interacción de la luz
↑ Excelente Selectividad. 1 átomo de Hidrógeno entre 4000 y 12.800 cm-1 . Está monocromática con el material.
↑ Fácil Desarrollo de Métodos de restringido a uniones del tipo C-H, N-H, O-H y S-H. La información que proporciona el Raman es el resultado de un proceso
Identificación. Espectros poco sensibles a ↓ Los espectros son menos distintivos, con bandas más de dispersión de la luz monocromática.
parámetros físicos tales como el tamaño de anchas que en MIR, con importante superposición y Mientras que el IR se basa en la absorción de luz en el espectro IR.
partícula y la temperatura.. efectos de matriz. (más simples) Tanto el IR como el RAMAN proporcionan un espectro característico de
Bandas de absorción muy intensas. ↓ Menor selectividad que MIR. las vibraciones específicas de una molécula y son valiosas desde el punto
↓ Se debe trabajar con cantidades muy chicas Se puede usar vidrio o cuarzo en la óptica, ya que no de vista cualitativo.
de muestras. absorben en el NIR.
↓ Preparación de muestras complejas. Si se ↑ Se puede utilizar fibra ópticas.
elige trabajar por transmitancia directa y hay Como el polietileno y el vidrio son transparentes al NIR,
que preparar pastilla agrega un grado de se pueden hacer mediciones de estos materiales sin abrir
complejidad que otras técnicas no tienen. los envases y se gana en tiempo de análisis.
↑ Permite trabajar con ATR. (lo anterior no Muy baja absortividad, necesita caminos de absorción
aplica) mayores que MIR.
No se puede usar vidrio o cuarzo en la óptica, ↑ Importante ventaja para el control de procesos.
absorben en el MIR. ↓ No detecta trazas.
↓ No se puede utilizar fibra óptica. Se dispone de fuentes mas intensas y Detectores mas
Muy alta absorción del agua. sensibles que en el MIR.
↓ No se pueden medir soluciones o muestras Menor absorción por parte del agua aunque igual
muy húmedas. interfiere. Cuando la luz monocromatica interactúa con las moléculas del material
Requiere caminos ópticos largos. que pueden ser un gas, un sólido o un líquido, la gran mayoría de los
↑ Permite trabajar con mayor cantidad de muestra fotones se dispersan con la misma energía que el fotón incidente. Esto se
(muestras más representativa del lote). describe como dispersión elástica o dispersión RAYLEIGH. Un pequeño
La calibración es difícil de realizar y mantener número de estos fotones aprox 1 fotón en 100000000 se dispersaran a
una frecuencia diferente al fotón incidente. La diferencia entre la energía
Se ven las del foto incidente y la energía del fotón disperso es llamada dispersión
bandas de inelástica o efecto RAMAN.
absorciones Cuando el cambio de energía del fotón disperso es menor que el fotón
tipicas en el incidente la dispersión se conoce como dispersión stokes.
NIR y se Algunas moléculas pueden comenzar en un estado de excitación
puede vibratoria y cuando avanzan a estado virtual de mayor energía pueden
apreciar que relajarse hasta un estado de energía final que es más bajo que el estado
es mucho más de excitación inicial y está dispersión se conoce como dispersión
siemple que antistokes.
en el MIR. La espectroscopia Raman proporciona información sobre vibraciones
 intramoleculares e intermoleculares que se traduce en un espectro
característico de vibraciones específicas en una molécula.

Espectro típico RAMAN

El desplazamiento de la frecuencia Raman respecto al de la frecuencia

incidente es independiente de está última y por este motivo se suele
tomar como abscisa para representar los espectros Raman a este
desplazamiento, situando al centro de la banda Rayleigh como origen del
eje o cero.

- Determinación del PA en el producto terminado

- Identificar bandas típicas y que este presente solo el
activo de interés
- Determinar uniformidad de mezclas donde se siguen las
bandas típicas de alguno o algunos de los compuestos
hasta alcanzar la mezcla total cuando ya no hay
variaciones de esas bandas. VENTAJAS DEL RAMAN:
- Estimar el tamaño de partículas. Es una técnica no destructiva al igual que el IR.
- Determinar humedad, como el agua absorbe a 1940 nm Es una técnica muy sencilla:
si esa zona está libre de otras bandas se puede utilizar ↑ Las muestras requieren poca o ninguna preparación.
para cuantificar el agua. ↑ No se requiere contacto con la muestra.
- Determinar solventes. ↑ El vidrio es un excelente contenedor, para medidas in-situ ya que no
Como todo es relativo, estas ventajas si evaluamos la interfiere..
técnica desde el punto de vista cualitativo se convierte en Permite la identificación de pequeños contaminantes aunque no trazas.
desventajas ya que influye sobre el NIR modificando los
espectros. FLUORESCENCIA
Entonces los solventes y el agua pueden actuar como La Fluorescencia “ensucia o interfiere” la señal Raman.
interferentes alterando el espectro. • Aumenta el fondo, dificultando la medición. A veces puede
El tamaño de partícula interfiere negativamente en un impedir ver la señal Raman.
análisis de identificación ya que si dos sustancias • Puede “cegar” al detector si es muy intensa.
idénticas dan espectros diferentes por tener tamaño de • Aumenta los tiempos de medición.
partículas distintos se convierte en un problema. • En general se observa en materiales fuertemente coloreados
La temperatura en los líquidos también afecta la (azul, verde), algunos productos naturales (proteínas, almidón)
determinación del NIR, pero el mayor de los problemas y vidrios de baja calidad.
es que no siempre se pueden controlar estos factores y La fluorescencia ha sido durante años una de las principales barreras
una comparación directa con un espectro de referencia para la difusión de la espectrometría Raman.
no siempre puede hacerse. Muchas veces requieren de Actualmente con los nuevos equipos el problema es mucho menor
un tto matemático de los datos. debido a:
Como ya vimos es difícil la calibración y la • Uso de nuevas fuentes láser de mayor longitud de onda.
reproducibilidad por lo tanto es difícil hacer un rechazo • Uso de software “inteligente”
directo en NIR.
Dado que las moléculas orgánicas pueden tener una mayor tendencia a
ser fluorescentes cuando se utiliza radiación de longitud de onda más
corta se suelen utilizar fuentes de excitación monocromática de longitud
de onda más larga, como ser los iodo laser en estado sólido que
producen luz a 785 nm. Este uso de nuevas fuentes láser de mayor
longitud de onda ayudó a minimizar los problemas de la florescencia en
muchos productos.
También se utiliza un filtro de hendidura o de borde para eliminar la
dispersión rayleigh y antistokes. En la luz dispersa restante de stokes se
fabrica un elemento de dispersión normalmente una rejilla holográfica.
Luego un detector captura la luz lo que da lugar al espectro Raman.
Dado que la dispersión Raman produce una señal débil, es muy
importante que en el espectrómetro Raman se usen componentes de
alta calidad ópticamente bien adaptados.
 ¿Qué materiales son activos al Raman?
La mayoría de los materiales presentan actividad Raman, algunos con
más intensidad que otros.

Fuerte señal Señal Raman más Materiales difíciles o

Raman débil imposibles en Raman

• Moléculas • Moléculas -Muestras negras o muy

orgánicas. pequeñas de alta oscuras.
• Inorgánicos polaridad (ej. -Muestras de colores
poliatómicos. Metanol). intensos (azul o verde
MgSO4 , TiO2 , Ca3 • Agua (la señal es brillante).
(PO4 )2 , NaHCO3 , muy débil, en -Muestras fluorescentes.
etc.. algunos equipos no -La mayoría de los
se ve). metales y sustancias
• Moléculas con elementales.
sólo uniones -Productos naturales y
simples C-C, C-O (ej. sustancias biológicas, ya
Alifáticos, azúcares, que muchas veces
almidones, fluorescen o bien porque
celulosa) el espectro puede estar
dominado por patrones
no específicos de
proteínas, lípidos,
carbohidratos.
El Raman al igual
que el MIR tienen
ALTA
ESPECIFICIDAD:
En esta diapo se
pueden comparar
espectros de
diferentes isómeros
y compuestos
analogos del
nitrofenol.
Claramente vemos
que son
perfectamente diferenciables en el RAMAN.
El RAMAN te permite distinguir: Estereoisomeros, pseudopolimorfos
como hidratos, polimorfos.
Comparamos un mismo PA farmaceutico al MIR y al RAMAN.
Una regla general es que Grupos funcionales que tienen:
- Grandes cambios en los dipolos, es decir un alto grado de asimetría tienen bandas fuertes en el IR
- Cambios débiles en los dipolos o un alto grado de simetría verán mejor en los espectros de RAMAN

COMPARACIÓN RAMAN Y NIR

SIMILARES EN DIFIEREN EN

- Mediciones sin contacto con la muestra, aún a través de bolsas y - Selectividad e interpretación espectral: Raman es muy selectivo, espectros mas ricos en
recipientes transparentes. información, interpretable directamente.
- Permiten usar fibras ópticas. - Desarrollo de métodos e implementación: Raman es mucho más rápido y sencillo.
- Menor impacto del agua que MIR. El impacto en Raman es - Volumen de muestreo: En general mayor volumen en NIR que en Raman.
mucho menor que en NIR. - Capacidad de inferir atributos físicos de la muestra (humedad, tamaño y forma de las
- Ninguno es apropiado para la detección de trazas. partículas): Mucho mayor en NIR que en Raman (dicho de otra forma: la insensibilidad del
- No permiten analizar sales iónicas puras (ej. NaCl). Raman a estos factores, desde el punto de vista del análisis cualitativo, es una ventaja).
- Interferencias: NIR: Humedad, materiales de algunos recipientes y propiedades físicas de las
muestras. Raman: Fluorescencia (aprox. 10% de los materiales son muy afectados).
- Historia: Hasta hace muy poco, Raman no estaba disponible para la mayoría de las aplicaciones
industriales debido a su alto costo, tamaño y dificultades prácticas (mucha fluorescencia al usar
láseres en el visible).
 COMPARACIÓN DE LAS TRES TÉCNICAS ESPECTROSCÓPICAS

MIR NIR RAMAN

SELECTIVIDAD Excelente Baja Excelente

ABSORTIVIDAD Muy mala Baja N/A (dispersión)

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Compleja No requiere No requiere

EFECTOS DEL AGUA Muy alta Baja No

MEDICIÓN A TRAVÉS DEL PACKAGING Imposible Posible Posible

SENSIBLE A PARÁMETROS FÍSICOS Poco Mucho No

DESARROLLO DE MÉTODOS DE ID Simple Complejo Simple

VELOCIDAD DE MEDICIÓN 20-60 seg 5 seg 20-60 seg

APLICABILIDAD MUY BIEN: Principios Activos MUY BIEN: Principios Activos

Farmacéuticos, Solventes Orgánicos, Farmacéuticos, Solventes Orgánicos,
Azúcares, Almidones, Polímeros, Celulosas, Azúcares, Almidones, Polímeros, Sales
Compuestos orgánicos en general. Inorgánicas Poliatómicas (ej. Sulfatos,
DEPENDE: Algunos Hidratos, Algunos Carbonatos, Fosfatos), Diversos Oxidos,
materiales inorgánicos. Ácidos y Bases (excepto HCl, NaOH, KOH).
MAL: Sales Inorgánicas, Soluciones DEPENDE: Celulosas (medición lenta,
Diluidas. pueden fluorescer), Silicatos (pueden
INADECUADO: Metales y Aleaciones, fluorescer), Colorantes Brillantes (pueden
Soluciones Muy Diluidas, NaCl, KCl, KI, HCl, fluorescer).
HF, HBr, etc. MAL: Materiales Negros/Oscuros
(calentamiento/fluorescencia), Agua,
Soluciones Diluidas.
INADECUADO: Metales y Aleaciones,
Soluciones Muy Diluidas, NaCl, KCl, KI, HCl,
HF, HBr, etc
 COMPARACIÓN DE PARÁMETROS

FT-IR NIR RAMAN

ESPECIFICIDAD Alta Baja Alta

Los espectros pueden ser interpretados Se requieren extensivas calibraciones y quimiometría Los espectros pueden ser interpretados
directamente. para distinguir materiales. Los espectros son difíciles de directamente.
ser interpretados directamente.

INTERFERENCIAS Mediciones fuertemente influenciadas Mediciones influenciadas por la presencia de agua. Es Muestras con fluorescencia interfieren. Nuevos
por la presencia de agua. afectada por atributos físicos de la muestra tales como láseres han reducido este problema.
tamaño y forma de las partículas.

MUESTREO Muestras en pastillas/ suspensiones. Se suelen usar fibras ópticas. Se puede medir a través de Es posible la medición sin contacto con la muestra,
DRIFTS, ATR. No se pueden usar fibras vidrios y plásticos. Es común el uso de fibras ópticas aún a través de vidrios y plásticos.
ópticas.

PORTABILIDAD En general son instrumentos de Hay instrumentos de laboratorio para operar en lugares Hay instrumentos de laboratorio para operar en
laboratorio, diseñados para operar en fijos. Es muy común el uso de instrumentos portátiles. lugares fijos. Es muy común el uso de instrumentos
lugares fijos portátiles.

DESARROLLO DE Comparación con la biblioteca de Análisis basados en métodos quimiométricos. El Comparación con la biblioteca de espectros
MÉTODOS espectros almacenados. desarrollo de métodos es trabajoso debido a la baja almacenados.
selectividad inherente y a efectos de la muestra.
El propósito de las pruebas de ID en las monografías de la USP es la identificación única de un
material.
Debido a la capacidad limitada de muchos ensayos, con frecuencia se indican 2 o más pruebas para
la ID de una muestra.
Ej. Una técnica cromatográfica para ID del componente orgánico y química húmeda para el
contraión.
Se prefieren las técnicas espectroscópicas de ID sobre las de química húmeda o colorimétricas,
debido a que las primeras proveen una ID concluyente.
Un procedimiento absoluto es en general la aproximación preferida para ID compendiada.
Las 3 técnicas son aceptados para la verificación de ID según la USP.