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am ie e
A i s l ó n d
u l ac i s
n i p e n e
ma g enética
G
-1
2015
 1. Aisla
de fr miento
de u agment y ampli
2. G n gen . os espe ficación

S
ener cífico

CTO
DNA ando s
3. E recombmolécul
ncon inan as de
espe trando te.
4. D cíficos d clones
ASPE
eterm e int
de b inan erés
.
DNA ases de do la se
5. C un se cuenc
gme i
onstr nto da
y ge uyend e
n
espe éticos o mapa
6. I cífico de un s físi
. gen cos
ngen
iería
gené
tica
Inye
cción
d e DN
extra
ño e A
n un
célu
la an a
imal
Obtención de organismos genéticamente idénticos

En el campo de la Ingeniería genética consiste

en aislar y multiplicar un gen, o en general,
un trozo de ADN

En Animales superiores consiste en obtener un

individuo a partir de una célula o de un núcleo
de otro individuo
Conjunto de técnicas nacidas de la Biología molecular
que permiten manipular el genoma de un ser vivo

Mediante la ingeniería genética se pueden introducir genes

en el genoma de un individuo que carece de ellos

Escherichia coli
Aislamiento y manipulación de fragmentos
de ADN de un organismo para introducirlo
en otro (ADN recombinante)

Nathans D., Arber W., y Smith H. (premio Nobel de Fisiología

y Medicina en 1978 por el descubrimiento de las enzimas de
restricción y su aplicación en Genética Molecular)
Molécula A Molécula B

Digestión de ambas moléculas con la

misma enzima de restricción, BamHI

Extremos
cohesivos

Mezclar

Tratar con ADN-ligasa

ADN recombinante
 Cóm
un g o amp
en d lifica
e in r
terés
Form
ación
molé d e un
cula
d a
e AD
reco
mbin N
ante
En 1983 Kary Mullis da a conocer esta técnica y en 1993 recibió el Premio Nobel de Química por este descubrimiento

Es un proceso cíclico
(cada ciclo consta de 3 pasos)

94ºC desnaturalización (separación

de las dos hebras de ADN)

50ºC Anillamiento de "cebadores"

72ºC copia de cada una de las

hebras de ADN por la ADN
polimerasa

35 ciclos 236= 68 billones de copias

Reacción en cadena
de la polimerasa
Reacción en cadena
de la polimerasa
Ciclo lisogénico

Ciclo lítico
(f) (g) (h)
 Un cDNA de doble
cadena se sintetiza a
partir de mRNA
Un cDNA de doble cadena se
sintetiza a partir de mRNA
Inserción de un gen
en un plásmido de
ADN recombinante
 La producción
de
productos de
PCR
con extremos
pegajosos
Producción de moléculas de cDNA con extremos
pegajosos
CÓM
O TR
A MP A BA
LIFIC JA LA
ACIÓ
N
 USO
DE U
P LÁ S N
vecto MIDO
r, pU
C18
 USO
DE U
P LÁ S N
vecto MIDO
r, pU
C18
USO DE UN PLÁSMIDO
vector, pUC18
CLO
NAC
EL FA IÓN C
GO l ON
amb
da
Fósmidos y BACs son vectores de
clonación que portan grandes
insertos
Modos de transfección de ADN
recombinante en células
bacterianas
Enco
ntrar
inter el clo
és m
e n d e
uso d d iante
e son el
das d
ADN e
o AR
N
Enco
ntrar
inter el clo
és m
e n d e
uso d diante
e son el
das d
ADN e
o AR
N
Enco
ntrar
inter el clo
és m
edia n de
uso d nte e
e ant
icue l
rpos
Encontrar el clon de
interés mediante el
uso de anticuerpos
e le c G el de
trofo
resis
Encontrar ácidos nucléicos
específicos mediante el uso
de electroforesis en gel y
blotting
 Encontrar ácidos nucléicos
específicos mediante el uso de
electroforesis en gel y blotting
Encontrar ácidos nucléico
s
específicos mediante el u
so
de electroforesis en gel y
blotting
Encontrar ácidos nucleicos específicos mediante el uso de electroforesis en gel
yblotting
La estructura de 2’,3’-
dideoxinucleotidos
 El método de
secuenciaminto
dideoxi
 El método de
secuenciaminto
dideoxi
 El m
secu étodo d
enci
amin e
dide to
oxi
Lectura de la secuencia de ADN a
partir de un secuenciador
automático
Uso de la Técnica de Caminado
sobre coromosomas para
identificar Clones
Uso de Mapeo Fino para identificar un Gen
 Cruces producen
Recombinantes que
portan la Enfermedad
Métodos para inserción
de Transgenes
Métodos para inserción
de Transgenes
Dos resultados de Transformación
por Vectores simples de Levadura
EL Vector Plásmido Ti
La generación de una Planta
Transgénica
La generación de una
Planta Transgénica
La generación de una Planta
Transgénica
Patrón de Transmisión de
T-DNA
Creación de Transgenes de
Caenorhabditis elegans
Creación de Transgenes de
Caenorhabditis elegans
Creación de Transgenes de Mus musculus
Producción de Células que contienen un gen Knockout
 Producción de Células que
contienen un Gen Knockout
 Producción de Células que
contienen un Gen Knockout
Producción de Ratones transgénicos que contienen
un Gen Knockout
Producción de Ratones transgénicos que
contienen un Gen Knockout