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Sesión 05 - Practica - Determinacion Del Perfil Lipidico
Sesión 05 - Practica - Determinacion Del Perfil Lipidico
ASIGNATURA: Bioquímica
DOCENTE: Dr. William B. Ruiz Chang
AUTORES:
- Cabanillas Gonzales, Jazmín
- Carrión Vega, Arleth
- Espino Casana, Jennsue
TRUJILLO-PERÚ
2024
DETERMINACIÓN DEL PERFIL LIPIDICO
INTRODUCCION:
La determinación del perfil lipídico incluye la medición sérica de colesterol total, triglicéridos, HDL colesterol y LDL
colesterol. Estas pruebas tienen utilidad para el despistaje, diagnóstico y monitoreo de las dislipidemias; las que se definen como
alteraciones del perfil lipídico ya sea en aumento o disminución de alguno de sus componentes. La etiología para estas
alteraciones puede ser primarias (como la hipercolesterolemia familiar, hiperlipidemia familiar combinada, etc) o secundarias a
obesidad, diabetes, etc. La hipercolesterolemia, la hipertrigliceridemia, el aumento de LDL y la disminución de HDL se asocian a
mayor riesgo coronario.
FINALIDAD:
Realizar la medición sérica de colesterol, triglicéridos, colesterol LDL por el método enzimático y la determinación de HDL,
previa precipitación de las otras lipoproteínas.
MATERIAL Y EQUIPOS
Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimétricas.
Equipo de extracción de muestra: guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5 cc.
Equipos: centrífuga, micropipetas x 10 ul, baño maría, espectrofotómetro.
PROCEDIMIENTO 1: Determinación de
Colesterol.
1) Introducción:
El colesterol es una molécula lipídica, base de síntesis de los demás esteroides como las hormonas masculinas, femeninas, gluco
y mineralocorticoides, así como las sales biliares y la vitamina D, con ellas comparte el núcleo ciclopentano perhidrofenantr eno.
Forma parte de las biomembranas regulando su fluidez. Tiene origen endógeno por síntesis a nivel hepático, intestino y
otros tejidos; y exógeno de la dieta (de origen animal como la yema de huevo, carnes etc.). Se considera importante su
participació n en la aterogénesis unida a la Lipoproteína de baja densidad o LDL, por ello su determinación aislada o como
parte del perfil lipídico es muy importante para evaluar el riesgo coronario.
2) Fundamento de la Técnica:
La secuencia de recciones que se emplean en esta determinación es la siguiente:
Colestero Colestero
Esteres de Colesterol l Colesterol + ácidos grasos; Colesterol + O2 l oxidasa Colesten-3-ona + H2O2
esterasa
H2O2 + 4-AF + aceptor POD quinonimina roja
3) Muestra y Reactivos a emplear:
Muestra: suero sanguíneo.
S. Estándar: solución de colesterol = 200 mg/dl (2 g/l).
A. Reactivo A: solución conteniendo colesterol esterasa (CHE), colesterol oxidasa (CHOD), peroxidasa (POD), 4-
aminofenazona (4-AF) y buffer Good (conteniendo fenol y colato de sodio).
4) Procedimiento:
Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la flexura del codo con jeringa
hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20, de dos pacientes en ayunas.
Una vez obtenidas las muestras, colocarlas en tubos de ensayo y dejarlas reposar durante 10 minutos.
Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a 3000 RPM durante 10 minutos.
Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.
Para la determinación de colesterol total: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido), se
debe colocar:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES B S D
Muestra (suero / ul) -- -- 10
Estándar (ul) -- 10 --
Reactivo A (ml) 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura ambiente (18 a
25 °C). Leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con el Blanco.
5) Resultados:
Luego de la incubación de las muestras:
B S D
7) Preguntas de aplicación:
a) ¿Cuál es la importancia del colesterol en nuestro organismo?
b) ¿Cuál es la enzima clave en la regulación de la síntesis del colesterol?
c) ¿Cuál es la base molecular del tratamiento de la hipercolesterolemia?
d) Elabore un esquema y explique la síntesis de colesterol.
4) Procedimiento:
Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la flexura del codo con jeringa
hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20, de dos pacientes en ayunas.
Una vez obtenidas las muestras, colocarlas en tubos de ensayo y dejarlas reposar durante 10 minutos.
Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a 3000 RPM durante 10 minutos.
Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.
Para determinar triglicéridos: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido), colocar:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES B S D
Muestra (suero / ul) -- -- 10
Estándar (ul) -- 10 --
Reactivo A (ml) 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura ambiente (18 a
25 °C). Leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando el aparato a cero con agua
destilada.
5) Resultados:
Luego de la incubación de las muestras:
B S D
ESTÁNDAR: 0.535
DESCONOCIDO: 0.391
6) Actividades a desarrollar por el alumno:
- Cálculos de resultados:
Cálculo del factor:
𝟐 𝐠/𝐥 F: 2/0.535 = 3.73
𝐅=
𝐒
Cálculo de la concentración de Triglicéridos. (de cada una de las muestras).
TG= 0.391 x 3.73 = 1.46
Triglicéridos (g/l) = D x F
Conversión: Triglicéridos (g/l) = 0,01 x Triglicéridos (mg/dl)
[TG]= 0.01 x 146 = 1.46 g/l
- Interpretación de los resultados.
Valores Referenciales: [ATP III, NCEP]
Normal: < 1,5 g/l
Límite alto de normalidad: 1,50 a 1,99 g/l
Elevados: 2,00 a 4,99 g/l (Hipertrigliceridemia moderada)
Muy elevados: ≥ 5,00 g/l (Hipertrigliceridemia severa)
- Explique bioquímicamente lo encontrado.
Refleja un equilibrio adecuado entre la ingesta y el uso de grasas en el cuerpo. Los triglicéridos son
una forma de grasa que se almacenan en las células adiposas y se utilizan como fuente de energía
cuando el cuerpo lo necesita.
7) Preguntas de aplicación:
a) ¿Cuál es la importancia de los triglicéridos en nuestro organismo?
Los triglicéridos son moléculas fundamentales para el metabolismo energético y estructural en nuestro organismo. Están
compuestos por una molécula de glicerol unida a tres ácidos grasos mediante enlaces éster. Esta estructura les confiere
propiedades que los hacen vitales para nuestras células y tejidos. Los triglicéridos actúan como una reserva de energía
eficiente, ya que contienen una gran cantidad de energía almacenada en comparación con otros tipos de biomoléculas.
Cuando se requiere energía, los triglicéridos se descomponen en ácidos grasos y glicerol, que son utilizados como
combustible por las células. Además, los triglicéridos participan en la estructura y función de las membranas celulares.
Los ácidos grasos derivados de los triglicéridos forman parte de los fosfolípidos, que son componentes esenciales de las
membranas biológicas. Estos fosfolípidos contribuyen a la integridad estructural de las células y regulan diversas
funciones celulares. Otra función clave de los triglicéridos es el transporte de lípidos y vitaminas liposolubles a través del
torrente sanguíneo. Los triglicéridos combinan ácidos grasos con vitaminas liposolubles, como las vitaminas A, D, E y K,
facilitando su absorción y distribución en el organismo.
1. Trastornos genéticos hereditarios: Algunos trastornos genéticos pueden predisponer a niveles elevados
de triglicéridos en la sangre. Ejemplos incluyen:
- Hipertrigliceridemia familiar combinada: Una condición hereditaria que resulta en niveles elevados de
triglicéridos y colesterol LDL. Puede estar asociada con mutaciones en genes relacionados con el
metabolismo de los lípidos.
- Hiperquilomicronemia familiar: Un trastorno genético raro que se caracteriza por niveles
extremadamente altos de triglicéridos y quilomicrones en la sangre debido a mutaciones en genes que
regulan el metabolismo de los lípidos.
2. Síndrome metabólico: El síndrome metabólico es una combinación de factores de riesgo que incluyen
obesidad abdominal, resistencia a la insulina, hipertensión arterial y niveles elevados de triglicéridos y
colesterol LDL. Estos factores pueden aumentar significativamente el riesgo de enfermedades
cardiovasculares.
3. Consumo excesivo de carbohidratos simples y alcohol: Una dieta rica en carbohidratos simples y
azúcares refinados puede aumentar la síntesis de triglicéridos en el hígado. El consumo excesivo de
alcohol también puede aumentar la producción de triglicéridos en el hígado y disminuir su eliminación.
4. Diabetes tipo 2: La resistencia a la insulina y la diabetes tipo 2 están asociadas con niveles elevados de
triglicéridos en la sangre. La resistencia a la insulina dificulta la eliminación de triglicéridos del torrente
sanguíneo, lo que contribuye a la hipertrigliceridemia.
5. Enfermedades del hígado: Las enfermedades hepáticas crónicas, como la esteatosis hepática no
alcohólica (hígado graso no alcohólico) y la cirrosis, pueden alterar el metabolismo de los lípidos y
aumentar los niveles de triglicéridos en la sangre.
En la siguiente etapa, tres moléculas de ácidos grasos se unen al glicerol-3-fosfato mediante una serie
de reacciones enzimáticas. La aciltransferasa de glicerol-3-fosfato cataliza la transferencia de grupos
acilo (ácidos grasos) al glicerol-3-fosfato, formando así los triglicéridos.
Una vez que se han unido los tres ácidos grasos al glicerol-3-fosfato, se libera una molécula de fosfato
y se forma el triglicérido. Estos triglicéridos pueden ser almacenados en las células adiposas en forma
de gotas lipídicas o liberados a la circulación sanguínea para su transporte a otros tejidos donde se
necesite energía.
2) Fundamento de la Técnica:
Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan precipitando selectivamente las lipoproteínas de baja y muy baja densidad
(LDL y VLDL) mediante el agregado de sulfato de dextrán de PM 50.000 en presencia de iones Mg ++. En el sobrenadante separado
por centrifugación, quedan las HDL y se realiza la determinación del colesterol ligado a las mismas, empleando el sistema
enzimático Colesterol oxidasa/Peroxidasa con colorimetría según Trinder (Fenol/4- Ami-nofenazona)
4) Procedimiento:
Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la flexura del codo con jeringa
hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20, de dos pacientes en ayunas.
Una vez obtenidas las muestras, colocarlas en tubos de ensayo y dejarlas reposar durante 10 minutos.
Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a 3000 RPM durante 10 minutos.
Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.
Para la determinación se realizará lo siguiente:
5) Resultados:
Luego de la incubación de las muestras:
B S D
2) Fundamento de la Técnica:
Las lipoproteínas de baja densidad (LDL o βlipoproteínas) se separa del suero precipitándolas selectivamente mediante el
agregado de polímeros de alto peso molecular. Luego de centrifugar, en el sobrenadante quedan las demás lipoproteínas (HDL
y VLDL); el colesterol ligado a las mismas se determina empleando el sistema enzimático Colesterol oxidasa/ Peroxidasa con
colorimetría según Trinder (Fenol/4•AF). Por diferencia entre el colesterol total y el determinado en el sobrenadante, se obtiene el
colesterol unido a las LDL.
4) Procedimiento:
Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la flexura del codo con jeringa
hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20, de dos pacientes en ayunas.
Una vez obtenidas las muestras, colocarlas en tubos de ensayo y dejarlas reposar durante 10 minutos.
Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a 3000 RPM durante 10 minutos.
Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.
Para la determinación se realizará lo siguiente:
5) Resultados:
Luego de la incubación de las muestras:
B S D
7) Preguntas de aplicación:
a) ¿Cuál es el fundamento bioquímico para el tratamiento del incremento de los niveles de LDL?
b) ¿Cuáles son las causas primarias y secundarias del aumento del LDL-colesterol?
c) Haga un esquema explicando cuál es el rol del LDL en la aterogénesis.
1. Infiltración en las Paredes Arteriales: La LDL circulante puede infiltrarse en las paredes arteriales a través de
lesiones o áreas dañadas en el revestimiento endotelial de los vasos sanguíneos. Este proceso es facilitado
por la acumulación de LDL oxidada, que es más propensa a inducir respuestas inflamatorias en las células
endoteliales.
2. Oxidación y Respuesta Inflamatoria: Una vez dentro de la pared arterial, la LDL puede ser oxidada por
diversas moléculas proinflamatorias, como radicales libres y especies reactivas de oxígeno. La LDL oxidada es
reconocida por receptores en las células inmunes, como los macrófagos, desencadenando una respuesta
inflamatoria local.
3. Formación de Células Espumosas: La internalización de la LDL oxidada por los macrófagos lleva a la
formación de células espumosas, que son macrófagos cargados de lípidos derivados de la LDL. Estas células
espumosas contribuyen al desarrollo de las placas de ateroma, que son depósitos grasos en las paredes
arteriales.
4. Formación de Placas de Ateroma: Con el tiempo, las células espumosas y otros componentes, como células
musculares lisas, calcio y fibrina, se acumulan en las paredes arteriales formando placas de ateroma. Estas
placas pueden crecer y obstruir parcial o completamente el flujo sanguíneo en la arteria.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) Nelson D, Cox M. Lehninger. Principios de Bioquímica. 6ta Edición, Editorial Omega, España, 2011
3) Ecuación de Friedewald para lipoproteínas de baja densidad (C-LDL)-Calculadora en línea. Disponible:
https://www.msdmanuals.com/es-cr/professional/multimedia/clinical-calculator/clinicalcalculator_es_v13948925_es