UNIDAD DE CIENCIAS BÁSICAS

ASIGNATURA DE BIOQUÍMICA

GUÍA DE PRÁCTICAS

SEGUNDO AÑO

PRACTICA 9. DETERMINACION DE
COLESTEROL DE HDL Y LDL EN PLASMA
 SESIÓN 9. DETERMINACIÓN DE HDL Y LDL COLESTEROL EN
PLASMA

1. INTRODUCCIÓN.

El contenido aproximado de colesterol en cada familia de lipoproteínas es: 1% en

los quilomicrones, 18% en las VLDL, 50% en las LDL y 23% en las HDL. Dado que
cada familia posee distinta actividad biológica, el significado clínico de un aumento
de colesterol depende de la o las lipoproteínas que se encuentran por encima de
los valores normales.

Las lipoproteínas de alta densidad (High Density Lipoprotein - HDL), presentan

mayor densidad (1.063 - 1.21 g/mL) y menor tamaño (4-13 nm) que las otras
lipoproteínas. Su función es transportar el colesterol desde los tejidos periféricos,
incluyendo la pared arterial, hasta el hígado para su posterior excreción en forma
de sales biliares, proceso conocido como transporte reverso de colesterol. Esta
remoción de colesterol hace que la HDL sea considerada un factor antiaterogénico
y protector de enfermedad cardiovascular.

Las lipoproteínas de baja densidad (Low Density Lipoprotein - LDL), se originan

como producto del metabolismo de las VLDL en plasma, que se realiza por la
pérdida de triglicéridos y algunas de sus apolipoproteínas. Son sintetizadas en el
hígado y tienen una alta concentración de colesterol. Su apolipoproteína asociada
de mayor importancia es apo B-100, indispensable para unirse al receptor de apo
B/E. Su función es transportar el colesterol desde el hígado hacia los tejidos
periféricos. Su exceso en plasma es un factor de riesgo para el desarrollo de
enfermedad cardíaca coronaria.

Los valores aislados de colesterol de HDL o de LDL no pueden tomarse como

índices predictivos de riesgo, sino que es necesario confirmar un perfil lipídico con
los valores de colesterol total, colesterol de HDL y colesterol de LDL.
2. OBJETIVO.

Determinar la concentración de colesterol de HDL y LDL en plasma mediante un

método espectrofotométrico y compararlos con los valores de referencia.

3. FUNDAMENTO DEL MÉTODO.

Las fracciones LDL y VLDL de las lipoproteínas séricas (lipoproteínas de baja y

muy baja densidad) se separan del suero por la acción precipitante de un
polisacárido sulfatado en presencia de cationes divalentes. A continuación, se
cuantifica el colesterol de las HDL (lipoproteínas de elevada densidad), presentes
en el sobrenadante, tal como se realizó en la práctica para determinar colesterol
total. Para determinar el valor de LDL colesterol se utiliza una formula.

4. EQUIPOS, MATERIALES, REACTIVOS Y MUESTRA.

4.1. EQUIPOS.

Espectrofotómetro Baño de agua

Centrifuga Cronometro

4.2. MATERIALES.

Tubos de vidrio 13 x 100 Gradilla

Micropipetas Tips de micropipetas

Recipiente de bioseguridad Cubetas del espectrofotómetro

4.3. REACTIVOS.

Reactivo precipitante de HDL: sulfato de dextrano y acetato magnésico.

Kit para determinar colesterol en suero o plasma.

4.4. MUESTRA.

La extracción de sangre se realiza en un paciente con un previo ayuno de 12 a 14

horas. En caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda
únicamente el uso de heparina como anticoagulante para su obtención.

5. PROCEDIMIENTOS.

Separación del HDL colesterol

5.1. En un tubo de ensayo adicionar 300 µL de suero y 1 gota de reactivo

precipitante.

5.2. Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 15 minutos

en reposo a temperatura ambiente.

5.3. Llevar a la centrifuga durante 15 minutos a 4 000 r.p.m.

5.4. Luego de transcurrido el tiempo retirar el tubo, se obtendrá un sobrenadante

límpido.

Determinación de colesterol de HDL

5.5. En tres tubos de ensayo rotulados como B, ST y M, colocar:

 TUBOS BLANCO ESTANDAR MUESTRA
(B) (ST) (M)
Reactivo (ml) 1.0 1.0 1.0

Estándar (ul) 0 10 0

Sobrenadante (ul) 0 0 10

5.6. Mezclar e incubar durante 5 minutos en baño de agua a 37ºC.

5.7. Retirar y colocar en una cubeta y realizar la lectura en el espectrofotómetro a

505 nm, llevando el equipo a cero con el blanco.

5.8. Anotar los resultados de absorbancia de los tubos ST y M.

Determinación de colesterol de LDL:

Se utiliza la fórmula de Friedewald

LDL (mg/dL) = Colesterol total (mg/dL) – HDL (mg/dL) – VLDL (mg/dL)

Donde: VLDL = Triglicéridos / 5

6. CÁLCULO DE LOS RESULTADOS.

Calcule la concentración de colesterol de HDL utilizando la siguiente formula:

Colesterol HDL plasma (mg/dL) = A muestra x Concentración estándar x 1.13

A estándar
Ejemplo:

A muestra = 0.042

Concentración del estándar = 200 mg/dL

A estándar = 0.379

HDL colesterol = 0.042 x 200 x 1.13 / 0.379 = 25.0 mg/dL

Suponiendo: Colesterol total = 250 mg/dL Triglicéridos = 150 mg/dL

Entonces: VLDL colesterol = 150 / 5 = 30 mg/dL

Aplicando la fórmula de Friedewald:

LDL colesterol = 250 – 25 – 30 = 195 mg/Dl

7. VALORES DE REFERENCIA.

El panel de expertos del National Cholesterol Education Program (NCEP) provee

los siguientes valores:

HDL colesterol:

40 – 60 mg/dL

Mayor a 60 mg/dL, se considera un valor protectivo

Menor a 40 mg/dL, un alto riesgo de enfermedad cardiaca coronaria (ECC).

LDL colesterol:

Riesgo bajo o nulo: menor de 129 mg/dL

Riesgo moderado a elevado: 130 – 189 mg/dL.

Riesgo muy elevado: mayor o igual a 190 mg/dL

8. BIBLIOGRAFIA.

Baynes, John W., and Marek H. Dominiczak. Bioquímica médica. Elsevier, 2019.

Página 489-506. En:

https://www.clinicalkey.com/student/content/book/3-s2.0-B9788491134060000332

Marshall, William et al. Bioquímica clínica. Elsevier, 2013. Pagina 239-258. En:

https://www.clinicalkey.com/student/content/book/3-s2.0-B9788490221150000141
 CASOS APLICATIVOS

CASO 1

Paciente varón 32 años, fumador empedernido, desarrolló un dolor torácico

opresivo repentino. Ingresó en el departamento de urgencias. Se confirmó un
infarto de miocardio mediante cambios en el ECG y por una concentración elevada
de troponina cardíaca. En la exploración física del paciente destacaban xantomas
tendinosos en las manos y los tendones de Aquiles. Tenía antecedentes familiares
sólidos de enfermedad coronaria (su padre fue sometido a una operación de
derivación coronaria a los 40 años y su abuelo paterno murió de infarto de
miocardio a los 50 y pocos años). Sus valores de laboratorio eran:

Colesterol 390 mg/dl, Triglicéridos 182 mg/dl. Colesterol HDL: absorbancia

muestra 0.15, absorbancia estándar 0.45, concentración estándar 100 mg/dl.

1. ¿Cuál es la concentración de HDL colesterol del paciente y su interpretación?

a) 38 mg/dL, normal b) 38 mg/dL disminuido
c) 339 mg/dL, normal d) 339 mg/dL, disminuido

2. ¿Cuál es la concentración de LDL colesterol del paciente y su interpretación?

a) 170 mg/dL, normal b) 170 mg/dL aumentado
c) 316 mg/dL, normal d) 316 mg/dL, aumentado

3. De acuerdo con la clínica y pruebas realizadas, ¿cuál es la probable alteración

lipídica que presenta la paciente? ¿Por qué?
a) Abetalipoproteinemia b) Hipercolesterolemia familiar
c) Disbetalipoproteinemia familiar d) Hiperquilomicronemia
CASO 2
Paciente varón de 57 años fue derivado a la clínica de lípidos por su
hipertrigliceridemia. Era obeso, bebía 30 unidades de alcohol a la semana y
llevaba una vida sedentaria. Sus valores de laboratorio eran:
Colesterol 192 mg/dl, Triglicéridos 345 mg/dl. Colesterol HDL: absorbancia
muestra 0.15, absorbancia estándar 0.45, concentración estándar 100 mg/dl.
Tras algunas dificultades iniciales, finalmente consiguió perder 7 kg de peso a lo
largo de los 6 meses siguientes, reducir la ingestión de alcohol a menos de 20
unidades por semana y comenzó a hacer ejercicio de forma regular.
Doce meses después, la concentración de Colesterol total era de 186 mg/dl,
Triglicéridos 207 mg/dl, Colesterol HDL: absorbancia muestra 0.20, absorbancia
estándar 0.45, concentración estándar 100 mg/dl.

1. ¿Cuál es la concentración de HDL y LDL colesterol del paciente antes del

tratamiento?
a) 38 y 85 mg/dL b) 85 y 38 mg/dL
c) 339 y 115 mg/dL d) 115 y 339 mg/dL

2. ¿Cuál es la concentración de HDL y LDL colesterol del paciente después del

tratamiento?
a) 277 y 225 mg/dL b) 225 y 277 mg/dL
c) 95 y 50 mg/dL d) 50 y 95 mg/dL

3. ¿Qué factor de riesgo cardiovascular no modificable presenta el paciente?

a) Obesidad b) Sedentarismo
c) Alcoholismo d) Sexo
CASO 3
Paciente de 67 años con sobrepeso, diabetes tipo 2, glicemia en ayunas 153 mg/dl
e hipertensión leve. Cuando acudió a la clínica ambulatoria sus resultados de
laboratorio eran:
Colesterol 265 mg/dl, Triglicéridos 173 mg/dl. Colesterol HDL: absorbancia
muestra 0.10, absorbancia estándar 0.45, concentración estándar 100 mg/dl.
Al paciente se le receta una estatina aparte de la metformina.

1. ¿Cuál es la concentración de HDL colesterol del paciente y su interpretación?

a) 25 mg/dL, normal b) 25 mg/dL disminuido
c) 509 mg/dL, normal d) 509 mg/dL, disminuido

2. ¿Cuál es la concentración de LDL colesterol del paciente y su interpretación?

a) 325 mg/dL, normal b) 325 mg/dL aumentado
c) 205 mg/dL, normal d) 205 mg/dL, aumentado

3. ¿A qué se debería la triada aterogénica que presenta el paciente?

a) Hipertensión b) Sobrepeso
c) Diabetes mellitus d) Dieta