INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

CENTRO DE ESTUDIOS CIENTÍFICOS Y TECNOLÓGICOS NO.16

HIDALGO

Unidad de aprendizaje:

Bacteriología clínica

Docente:
Daniel Álvarez Gómez

Práctica integradora 2. Siembra de medios de cultivo

Alumnos:

EUSTAQUIO SÁNCHEZ PAOLA ELIZABETH

GABRIELL GARCÍA CARLOS ABDIEL

MENDOZA LÓPEZ CHRISTIAN ÁNGEL

MENESES OVIEDO ANDREA

MONTIEL MÁRQUEZ NALLELY

VERA SANDOVAL LUZ ANDREA

Grupo:

4LM1

FECHA DE ENTREGA:
24/05/2023
Diagrama de flujo
Obtención y siembra de muestras

OBTENCIÓN DE MUESTRA DE EXUDADO FARÍNGEO

SIEMBRA EN MEDIOS

(HECES)
 SIEMBRA EN MEDIO CLED
SIEMBRA EN MEDIO
SALMONELLA SHIGELLA (ORINA)

(HECES)

MEDIO CLED

(ORINA)
Lectura del crecimiento de colonias (tabla 1)
 Conteo de colonias
¿Qué es el conteo de colonias?
Es un indicador de la cantidad de microorganismos vivos en un líquido. Este valor,
determinado por el número de colonias individuales, describe el número de células de un
organismo en el agua. Estos pueden ser bacterias u hongos que viven y se multiplican en
el agua.

En el desarrollo de esta práctica el conteo de colonias fue de urocultivo donde ocupamos

un contador de colonias digital. Es importante destacar que en dos cajas no hubo conteo
de colonias por saturación de estas. un ejemplo es el medio que sale en la siguiente
imagen, fue con coprocultivo y el medio MacConkey

Caja 1
Medio: Sal y manitol

Características morfológicas de las colonias:

Tamaño: Mediano

Forma: Circular
Borde: Entero

Transparencia: Opaco

Brillo: Brillante

Color: No pigmentado

Textura: Lisa

Colonias contadas:12

Muestra: Exudado faríngeo

Imagen del cultivo:
Caja2:
Medio: Sal y manitol

Características morfológicas de las colonias:

Tamaño: Pequeño
Forma: Circular

Borde: Entero

Transparencia: Transparente

Brillo: Opaco
Color: No Pigmentado

Textura: Lisa

Genero Presuntivo:

Colonias contadas:25
Muestra: Orina
Caja 3
Medio: CLED

Características morfológicas:

Tamaño: Mediano
Forma: Circular

Borde: Ondulado

Transparencia: Transparente

Brillo: Brillante
Color: Pigmentado (Verde)

Textura: Lisa

Colonias contadas:125

Muestra: Orina

Imagen del cultivo:

Caja 4
Medio: Salmonella y shigella

Características morfológicas de las colonias:

Tamaño: Puntiforme
Forma: Circular

Borde: Entero

Transparencia: opaco

Brillo: sin brillo

Color: Pigmentado (rosa fuerte)

Textura: Lisa

Colonias contadas: incontable

Muestra: Heces
Imagen del medio:
Caja 5
Medio: McConkey

Características morfológicas de las colonias:

Tamaño: Grande
Forma: Fusiforme

Borde: ondulado

Transparencia: opaco

Brillo: brillante
Color: Pigmentado (rosa fuerte)

Textura: Lisa

Colonias contadas: incontable

Imagen del medio:

 Inoculación en medios diferenciales
El termino inoculación o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra
(inóculo) en un medio, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación de este.

El procedimiento de inoculación en un medio de cultivo consiste en introducir una

muestra (inóculo) en un medio adecuado para el crecimiento y proliferación de
microorganismos. Para seleccionar la colonia que se sembrará en tubos de ensayo, se
sigue un proceso que incluye los siguientes pasos:

1. Siembra inicial: Se toma una pequeña cantidad de la muestra y se deposita en la

superficie del medio de cultivo, ya sea mediante la técnica de estría o utilizando un hisopo
estéril.

2. Incubación: El medio de cultivo con la muestra se coloca en una incubadora a una

temperatura y condiciones específicas que favorecen el crecimiento de los
microorganismos.

3. Observación de las colonias: Después de un período de incubación adecuado, se

examina el medio de cultivo para identificar las colonias microbianas que han crecido. Se
observan características como color, forma, tamaño, elevación, margen, consistencia, y
cualquier otra propiedad visual que pueda ser relevante.

4. Selección de la colonia: Se elige una colonia que represente las características deseadas
o que se considere representativa de la especie o tipo de microorganismo de interés. Esto
puede hacerse utilizando técnicas como el uso de placas de agar con colonias aisladas o
utilizando herramientas como el asa bacteriológica para transferir la colonia seleccionada
a un tubo de ensayo con un medio de cultivo específico.

El procedimiento más común se inicia mediante la introducción de la muestra a ser

estudiada, también conocida como "inóculo", en el medio de cultivo adecuado para su
crecimiento y proliferación. Para sembrar el inóculo en el medio, generalmente se emplea
la técnica de agotamiento. Esta técnica consiste en dividir la caja de Petri, que ya contiene
el agar correspondiente, en cuadrantes. A continuación, se realiza la toma de la muestra a
estudiar utilizando un asa previamente esterilizada.

En el primer cuadrante de la caja de Petri, se efectúa un barrido o estrías con la muestra

utilizando el asa esterilizada. Luego, el asa bacteriológica debe ser esterilizada
nuevamente, y se realiza un nuevo barrido desde el primer cuadrante hacia el segundo,
con el propósito de disminuir la cantidad de bacterias presentes en la primera muestra
recolectada. Este proceso se repite de manera similar para el tercer cuadrante, pero el
barrido se realiza partiendo desde el segundo cuadrante, sin tocar el primero. Se continúa
con esta secuencia hasta llegar al cuarto cuadrante, donde se finaliza con una estría más
amplia y gradual, con cuidado de que el asa no toque el primer cuadrante en esta última
etapa. De esta forma, se logra aislar las bacterias y se facilita la observación de las mismas.

En resumen, el procedimiento se inicia con la introducción del inóculo en el medio de

cultivo y se utiliza la técnica de agotamiento para sembrar la muestra en la caja de Petri
dividida en cuadrantes. Se realizan sucesivos barridos con el asa bacteriológica
esterilizada, disminuyendo progresivamente la cantidad de bacterias en cada cuadrante,
hasta obtener una estría final más amplia y gradual en el cuarto cuadrante, evitando el
contacto con el primer cuadrante. De esta manera, se logra el aislamiento de las bacterias
y se facilita su observación.

Pero no es el único tipo de siembra que existe, también podemos encontrar:

Placa

 Placa vertida  Siembra en superficie

 Por extensión  Siembra en estría
 Siembra volumétrica  Siembra masiva
 Con hisopo
 Siembra por inmersión
 Siembra en doble capa

Placa vertida
 Se vierte 1 ml de muestra en la base de una caja de
 Petri estéril
 Verter 15 a 20 ml de agar fundido (temp. Aprox. 45o C).
 Tapar la caja y homogenizar la mezcla con
 movimientos de rotación suaves.
 Por extensión
La siembra por extensión es un método de distribución
uniforme de microorganismos sobre la superficie de una placa
de agar. Con la ayuda de un esparcidor estéril, se extiende un
pequeño volumen de cultivo microbiano uniformemente
sobre la superficie del agar.

Siembra volumétrica
Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede
ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las muestras
de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen,
ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin embargo, la orina
empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con
pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado.

Con hisopo
Esta técnica de siembra emplea un hisopo estéril, que se desliza por toda la superficie de
la placa en diferentes direcciones y finalmente por el borde, con el objetivo de asegurar
un crecimiento microbiano uniforme en toda la extensión de la placa.
Siembra por inmersión
Se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de
cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios.

Siembra en doble capa

Se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez solidificado el medio se vierte
una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml.
aprox.). Este método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y
microaerofílicos.

Siembra en superficie
Se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se
coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende
el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se
recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

Siembra en estría
La siembra por estría escocesa es un método cualitativo de aislamiento de
microorganismos por agotamiento en placa a partir de una muestra natural o de un
cultivo de laboratorio. Este método está basado en arrastrar, mediante un asa de siembra,
un número cada vez más pequeño de individuos.

Una vez finalizado el proceso de siembra, de incubación, se deben realizar las anotaciones
correspondientes, tales como el color, forma, tamaño, elevación, margen, consistencia y
densidad de las colonias que hayan aparecido. Si se desea estudiar una bacteria en
particular las colonias deben ser aisladas en tubos de ensayo que contengan el medio de
agar específico para determinar el tipo de bacteria y, en caso necesario, su tipo de
metabolismo. En el caso de utilizar un medio de agar diferencial, es decir, aquel que
permite conocer si se realiza la fermentación o metabolismo de ciertos nutrientes y
compuestos presentes en el medio, esto nos brinda la oportunidad de estudiar una única
bacteria de manera precisa, observando su desarrollo y patrón de crecimiento.

Pero para ello se debe tener en cuenta como elegir la colonia

Selección de la colonia que se sembrará en tubos de ensayo:

1. Se observan las colonias que han crecido en el medio de cultivo.

2.Se selecciona una colonia que tenga las características deseadas, como tamaño, forma,
color, textura, entre otras.

3.Se toma una muestra de la colonia seleccionada y se inocula en un tubo de ensayo con
medio de cultivo fresco.
4.Se incuba el tubo de ensayo a una temperatura y tiempo adecuado para el crecimiento
de la cepa bacteriana.
Por ello es importante conocer los diferentes tipos de siembra en tubo como:

Siembra en agar en tubo inclinado o bisel:

En este caso se colocan 5 ml de medio de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se
deja enfriar. asa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se introduce mediante
punción en el medio contenido en la parte inferior del tubo.

En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se esparce el
mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.

Siembra por dilución

Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a
diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriológico, se
agita, con movimientos moderados.

Siembra por punción

Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de
cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de
las precauciones de asepsia son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad
que tiene este método es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente
el medio de cultivo.
nterpretación de pruebas bioquímicas (tabla 2)