ANLISIS DEL COLESTEROL

DIAGNOSTICO
Para conocer tus niveles de colesterol total, LDL, HDL y triglicridos debers hacer un anlisis de colesterol. Se recomienda que te
sometas a un perfil lipoproteco completo cada 5 aos a partir de los 20 aos. Debes ayunar 10 o 12 horas antes de la prueba,
puedes beber solamente agua para que los resultados no salgan falseados.
Cmo interpretar tu anlisis de colesterol
La prueba de niveles de colesterol mide las grasas o lpidos presentes en la sangre y se expresa en miligramos por decilitro
(mg/dl).
En adultos el nivel de colesterol total (suma del colesterol LDL y el HDL) en sangre es:
Deseable: por debajo de 200 mg/dl.
Limtrofe: entre los 200-239 mg/dl. Se considera elevado.
Alto: ms de 240 mg/dl. El riesgo alto de sufrir una enfermedad coronaria aumenta a partir de estos valores. Debe reducirse.
Niveles de colesterol LDL (o colesterol malo):
ptimo: menos de 100 mg/dl.
Casi ptimo: 100-129 mg/dl.
Limtrofe: 130-159 mg/dl.
Alto: 160-189 mg/dl.
Muy alto: 190 mg/dl o ms.
Niveles de colesterol HDL (o colesterol bueno):
Deber ser superior a 40 mg/dl. A niveles ms altos, mayor proteccin de sufrir una enfermedad cardiovascular.
Triglicridos: son otro tipo de grasa en la sangre, que suministra energa a los msculos.
Normal: menos de 150mg/dl.
Limtrofe: 150-199 mg/dl.
Alto: 200-499 mg/dl.
Muy alto: 500 mg/dl. O ms. Unos niveles tan elevados adems de aumentar el riesgo cardiovascular, pueden producir pancreatitis
(una enfermedad potencialmente mortal del pncreas).

Cmo mejorar los niveles de colesterol
Los valores de colesterol en sangre dependen de factores que no se pueden cambiar, como la edad (la cantidad de colesterol
aumenta con los aos), el sexo o la gentica (hipercolesterolemia familiar). Pero, tambin, dependen de algunos factores
ambientales que s que puedes modificar, como la alimentacin o el ejercicio.
Si tus niveles de colesterol son altos, es aconsejable que hagas unos cambios en tu estilo de vida que podran ayudarte a
reducirlos. Aqu tienes algunos:
La obesidad incrementa los niveles de colesterol. Lo que significa que, si tu ndice de masa corporal o IMC es superior a 30. Es
aconsejable que sigas una dieta baja en caloras para bajar peso.
Es importante que comas alimentos bajos en grasas saturadas, grasas trans y colesterol. Debes tomar muchas frutas, verduras, y
granos enteros. Elije carnes con poca grasa como pescados, pollo o pavo sin piel, y para cocinar utiliza aceite de oliva (mej or que
sea virgen extra).
Muchos estudios demuestran que la prctica regular de actividad fsica disminuye el colesterol LDL (malo) y aumenta el colest erol
HDL.
La toma de medicamentos que disminuyen el colesterol LD depender del riesgo cardiovascular global que tengas. Consulta a tu
mdico.

REACTIVOS
Algunos de los primeros mtodos para efectuar pruebas de colesterol incluan la obtencin de productos coloreados, haciendo
reaccionar el colesterol con sustancias fuertemente cidas. Dado que se descubri que los steres de colesterol y el colesterol
libre no producen cantidades equivalentes de color esto dio lugar a la adicin de un paso de saponificacin para transformar los
steres de colesterol en colesterol libre. Actualmente se utilizan mtodos ms rpidos y seguros que utilizan enzimas como
reactivos para las pruebas de colesterol.
Los mtodos enzimticos para el anlisis de colesterol fueron ideados en los aos 70 y desde entonces han reemplazado los
mtodos qumicos casi completamente.
Los mtodos enzimticos se ven menos sujetos a posibles interferencias por sustancias no esterlicas que los mtodos qumicos.
No obstante, no hay absoluta especificidad para el colesterol, dado que su oxidasa puede reaccionar tambin con otros estelores,
que se sabe que estn tambin presentes en el plasma, y con esteroles vegetales, presentes en concentraciones apreciables en
la circulacin en pacientes con *-sitosterolemia. El mtodo atribuido a Flegg lleva a cabo el anlisis en tres pasos; el grupo 3-OH
del colesterol es oxidado y el agua oxigenada, que es uno de los productos de la reaccin, se determina enzimticamente:
Hidrlisis de los steres de colesterol mediante la colesterol esterasa (CE).
Colesterol esterificado CE Colesterol libre + cido graso
Oxidacin del colesterol mediante la colesterol oxidasa (CO) para producir perxido de hidrgeno.
Colesterol libre + O2 CO 4-Colestenona + H2O2
Oxidacin de un cromgeno con el perxido de hidrgeno en una reaccin catalizada por la peroxidasa para producir un producto
coloreado.
H2O2 + fenol +4- aminoantipirina peroxidasa quinoneimina + H2O
Con respecto a las enzimas que actan en estas reacciones, se puede decir que:
La colesterol esterasa (CE) se encuentra presente en el jugo pancreatico y en el intestino, transforma los esteres del colesterol en
colesterol y acido graso libre, y es precisamente en esta forma libre como es absorbido el colesterol por el intestino.
La colesterol oxidasa (CO) se encuentra en la vesicula biliar y el intestino y produce la oxidacin del colesterol libre debido a que el
organismo es incapaz de oxidar colesterol hasta dioxido de carbono por lo que solo puede excretarlo en la bilis donde parte del
colesterol libre se convierte en acidos biliares.
Se va a determinar la cantidad de colesterol y triglicrido a partir del mtodo sealado en el apartado anterior llamado mtodo de
Flegg. Para realizar esta determinacin se utiliz los siguientes reactivos:

DETERMINACIN DEL COLESTEROL:
Reactivo:
Tampn fosfato 150mM (pH 7.2)
Fenolato sdico 7.8mM
4-aminoantipirina 0.4 mM
Colesterol Esterasa (CE) > 1.7 *kat/L
Colesterol Oxidasa (CO) > 1 *kat/L
Peroxidasa > 20 *kat/L
DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS:
Reactivo:
Tampn Pipes 42mM (pH 7.5)
Adenosina trifosfato (ATP) 1mM
4-aminoantipirina 0.5 mM
Lipoprotena Lipasa (LPL) > 50 *kat/L
Glicerol quinasa (GK) > 13 *kat/L
Glicerol fosfato oxidasa >25 *kat/L
Peroxidasa > 5 *kat/L
4-Clorofenol 6mM
Las tcnicas que utilizamos en estas determinaciones son la espectrofotometria y la electroforesis. La espectrofotometria se refiere
al uso de la luz para medir las concentraciones de sustancias qumicas mientras que la electroforesis consiste en la aplicaci n de
un campo elctrico sobre una muestra y observar sus variaciones con respecto al campo.
Vamos a emplear como tcnica el ensayo enzimtico colorimetrico a punto final (todo el sustrato se convierte a producto), donde la
longitud de onda se va a medir dentro de la banda del visible.
Las muestras se colocan en tubos o en placas:
Placa: - El aparato utilizado es un lector de placas.
Las cubetas de la placa se rellenan con multipipeta (250 microlitros) aunque antes se ha utilizado micropipeta para poner 10
microlitros. La multipipeta cada vez que se rellena puede echar 250 microlitros 10 veces por lo que es muy til cuando se quiere
poner el mismo volumen de un mismo compuesto.
Las muestras se realizan por triplicado.
Para incubar las muestras se utiliza un hinchador de placas.
Tubo: - El aparato utilizado es un espectrofotometro.
Los tubos se rellenan por completo con micropipeta.
Las muestras se realizan por duplicado.
Para incubar las muestras se utiliza un bao de agua.

Prueba
Forma en que se realiza el examen de colesterol
Clsicamente, en un examen de colesterol la sangre se extrae de una vena, por lo general de la parte interior del codo o
del dorso de la mano. El sitio de puncin se limpia con un desinfectante (antisptico). El mdico coloca una banda elstica
alrededor de la parte superior del brazo con el fin de aplicar presin en el rea y hacer que la vena se llene de sangre.
Luego, el mdico introduce suavemente una aguja en la vena y recoge la sangre en un frasco hermtico o en un tubo adherido a
la aguja. La banda elstica se retira del brazo.
Una vez que se ha recogido la muestra de sangre, se retira la aguja y se cubre el sitio de puncin para detener cualquier
sangrado.
En bebs o en nios pequeos,en los sangrados para examen de colesterol se puede utilizar un instrumento puntiagudo llamado
lanceta para punzar la piel y hacerla sangrar. La sangre se recoge en un tubo pequeo de vidrio llamado pipeta, en un
portaobjetos o en una tira reactiva. Finalmente, se puede colocar un vendaje sobre el rea si hay algn sangrado.
La sangre se enva al laboratorio donde se mide lo siguiente:
Lipoprotena de baja densidad (LDL o colesterol "malo")
Lipoprotena de alta densidad (HDL o colesterol "bueno")
Colesterol total
Triglicridos
Lipoprotena de muy baja densidad (colesterol VLDL)

DETERMINACIN DE HDL Y LDL.
INTERES DE LA PRCTICA
Desde el punto de vista clnico, se ha atribuido a determinadas lipoproteinas el papel de factores esenciales directos en el
desarrollo o en la prevencin de las enfermedades cardiovasculares. De hecho, un incremento en los niveles plasmaticos del
colesterol asociado a una de estas lipoproteinas, las LDL o de baja densidad, significa un mayor riesgo de padecer coronopatia,
como principal manifestacin de enfermedad cardiovascular, mientras que un incremento del colesterol plasmatico asociado a las
lipoproteinas de alta densidad (HDL) supone una disminucin de dicho riesgo.
Las lipoproteinas son esfericas, con una parte interior de naturaleza hidrofobica y oleosa, y constituida por lipidos apolares
(esteres del colesterol y triacilgliceridos), recubiertos por una monocapa de lpidos anfipaticos (fosfolipidos y colesterol libre), que
como tales tienen caracteristicas detergentes, y por las apoproteinas especificas.
La unin de los lipidos del ncleo a la superficie exterior de fosfolipidos y apoproteinas no es covalente, sino mediante puentes de
hidrogeno y fuerzas de Van der Waals, lo que hace que sea relativamente lbil y permita el intercambio de lipidos y apoproteinas
entre las distintas lipoproteinas sricas y entre stas y los tejidos.
Los distintos tipos de lipoproteinas son:
Quilomicrones: transportan trigliceridos.
VLDL o lipoproteinas de muy baja densidad: transportan trigliceridos.
LDL o lipoproteinas de densida intermedia: Transportan colesterol.
HDL o lipoproteinas de alta densidad: Transportan colesterol.
La diferencia existente entre Las VLDL y Los quilomicrones se debe a que las VLDL transportan trigliceridos endogenos y los
quilomicrones transportan trigliceridos de la dieta. Adems los quilomicrones son ms pequeos que las VLDL, y los quilomicrones
presentan menor cantidad de proteinas. Debido a que los trigliceridos de la dieta son transportados por los quilomicrones y cuando
se le realiza a un indiduo un analisis de sangre este esta en ayunas, esto quiere decir que los trigliceridos medidos proceden de
las VLDL.
TECNICA UTILIZADA.
Para observar la existencia de HDL en las muestras; se utiliza el metodo de precipitacin.
Este metodo consiste en la precipitacin de las lipoproteinas VLDL y LDL quedando en el sobrenadante las HDL. Para ello, se
utiliza una solucin de acido fosfotugstico que precipita a las VLDL y a las LDL debido a la presencia de la apoproteina B-100 en
ellas mientras que en las HDL no se encuentran estas apoproteinas pero s la A-I y A-II.
La apoproteina A-I es la ms abundante dentro de las HDL mientras que La A-II es la segunda ms abundante. La primera se
sintetiza en el intestino y en el higado. La intestinal sale a la circulacin asociada a los quilomicrones pero una en la sangre es
transferida alas HDL, mientras que la hepatica sale directamente a la circulacin unida a las particulas nacientes de HDL,
constituyendo una parte estructural fundamental de estas lipoproteinas.
La apo B es una apoproteina cuya estructura no es bien conocida debido a su gran tamao, a su alta insolubilidad en medio
acuoso y a que forma agragados y se oxida con facilidad. Existen en dos formas, La B-100 y la B-48 como la que nos incumbe es
la B-100 se ahondara en su estudio.
La apo B-100 es una proteina de 4536 aminoacidos que se sintetiza en el higado, y se encuentra en las VLDL, IDL y LDL. Esta
apoproteina constituye el factor de reconocimiento de las LDL por receptores especificos que se encuentran tanto en el higado
como en tejido extrahepaticos, y de esta forma desempea un papel fundamental en la captacin del colesterol transportado en
dichas lipoproteinas en los tejidos.
Existen varios tipos ms de apoproteinas que son la apo-C, apo-E, apo-D y apo-F.
Para realizar la precipitacin se utiliz como reactivo acido fosfotugstico 0,44 mM; MgCl2 20 mM.

Para realizar la medicin de la precipitacin se utiliza la tecnica de espectrofotometria donde las muestras en este caso se van a
poner en tubos.
Para realizar la precipitacin se hicieron los siguientes pasos:
Se coge de la nevera un eppendorf que contiene control patologico de HDL adems tambin se coge los tubos con las tres
muestras utlizadas en las determinaciones anteriores (vease colesterol y trigliceridos). El control de HDL se utiliza al igual que el
control patologico de las determinaciones anteriores donde si cae dentro del intervalo de confianza propio para HDL, la medicin
puede continuar.
Se pipetean con micropipeta en cuatro eppendorf 100 l de las 3 muestras y del control de HDL
(uno por cada sustrato), despues se le aade la solucin precipitante (250 l), al aadir estos
volumenes se ha realizado una dilucin que a la hora de medir se debe tener en cuenta es decir se tiene un factor de dilucin que
sera de 3,5 ya que se parte de 100 l y se llega a 350 l. Se
agita los cuatro eppendorf en vortex durante 10 segundos y se deja incubar durante 10 minutos.
Despus de los 10 minutos, se dejan otros 10 minutos dentro una centrifugadora donde al sacar los eppendorf se observara un
sobrenadante donde se encuentran las HDL y una parte solida en el fondo del eppendorf donde estaran las LDL y VLDL.
El sobrenadante donde se encuentran las HDL se extrae de los eppendorf 250 l por cada uno
deellos y se pasan a otros eppendorf.
Ahora, primero se coge de la nevera el blanco, el calibrador y el control patologico que va a tener la misma utilidad que en las
determinaciones de colesterol y trigliceridos. La medicin se realizara por duplicado al utilizar tubos. Se debe poner por cada tubo
un sustrato es decir 15 l de blanco, calibrador, control patologico, control de HDL y las tres
muestras adems de 1 ml de solucin de colesterol que presenta la misma utilidad que en las determinaciones anteriores.
Los tubos son llevados al espectrofotometro que da los valores de absorbancia y concentracin que ayudan a hallar la cantidad de
colesterol que hay en las muestras, cuyos datos seran explicados en apartados siguientes.
4. RESULTADOS
Determinacin de colesterol total
Para determinar colesterol trabajamos con placa. Obtenindose los siguientes resultados de concentracin de colesterol:

Colesterol total
mg/dL
Colesterol total
mg/dL
Control patolgico 97,545 101,520
Muestra 1 (21941) 227.680 223,899
Muestra 2 (21963) 187,466 180,511
Muestra 3 (21965) 127,581 124,911
Intervalo de confianza (Colesterol) 101-123 Intervalo admisible (Colesterol) 92-132
En los dos casos podemos validar el ensayo porque el control patolgico de colesterol entra dentro del intervalo admisible. En la
primera colorimetra despreciamos los valores de las muestras 1 y 3 porque difieren mucho entre si, impidiendo obtener una media
aceptable. En una segunda colorimetra todos los valores obtenidos no son validos. En la tercera colorimetra obtuvimos los
valores de las muestras 1 y 3. El motivo por el cual tenemos que descartar algunos valores es debido posiblemente a errores en l
pipeteo, que son significativos porque trabajamos con volmenes pequeos. Con estos datos hacemos la media de cada muestra
obteniendo la concentracin total de colesterol de cada muestra.
Muestra 1 = 225.7895mg/dL
Muestra 2 = 183.99mg/dL
Muestra 3 = 126.246mg/dL
Determinacin de triglicridos
Para determinar triglicridos trabajamos por duplicado, en tubos donde la concentracin en triglicridos, la medimos en un
espectrofotmetro. Obteniendo los siguientes resultados:

Triglicrido total
mg/dL
Triglicrido total
mg/dL
Control patolgico 120.8 144.2
Muestra 1 (21941) 162.7 171.0
Muestra 2 (21963) 71.42 72.8
Muestra 3 (21965) 83.10 84.47
Intervalo de confianza(Triglicrido)134-164 Intervalo admisible(Triglicrido)118-180
En ambos casos el control patolgico entra dentro del intervalo admisible, luego podemos dar la validacin por vlida.
Calculamos la media de estos valores para obtener la concentracin total de triglicridos de cada muestra.
Muestra 1 = 166.85 mg/dL
Muestra 2 = 72.11 mg/dL
Muestra 3 = 83.985 mg/dL
Determinacin de colesterol asociado a HDL por precipitacin con cido fosfotngstico e iones magnesio de VLDL y LDL
En esta ocasin trabajamos con tubos. Los resultados obtenidos fueron los siguientes:

Colesterol HDL
mg/dL
Colesterol HDL
mg/dL
Control patolgico 105.0 102.6
Control HDL 38.99 39.2
Muestra 1 (21941) 14.35 16.11
Muestra 2 (21963) 5.704 6.482
Muestra 3 (21965) 11.62 13.09
Intervalo de confianza (HDL) 35-42,8 Intervalo admisible (HDL) 31,9-45,9
Intervalo de confianza (Colesterol) 101-123 Intervalo admisible (Colesterol) 92-132
Con los dos valores de concentracin de cada muestra, se hace la media y multiplicando por el factor de dilucin que es 3,5
(100L/350L) obtenemos la concentracin total de colesterol asociado a HDL para las muestras 1, 2 y 3.
Muestra 1 = 53.32 mg/dL
Muestra 2 = 21.32 mg/dL
Muestra 3 = 86,485 mg/dL
Determinacin de colesterol asociado a LDL
El clculo se realiza aplicando a la frmula de Friedwald, para cada una de las muestras, los valores de triglicridos totales,
colesterol total y colesterol asociado a HDL, obtenidos en los apartados anteriores.
LDL-C= CT- HDL-C- VLDL-C; Siendo VLDL-C= 0.2 x TG
Muestra 1 = 139.097 mg/dL
Muestra 2 = 148.24 mg/dL
Muestra 3 = 23.004 mg/dL
Los resultados obtenidos se muestran en la siguiente tabla:
MUESTRA
TRIGLICRIDO
TOTAL
(mg/dL)
COLESTEROL
TOTAL
(mg/dL)
COLESTEROL
HDL
(mg/dL)
COLESTEROL
LDL
(mg/dL)
1 166.85 225.7895 53.32 139.097
2 72.11 183.49 21.32 148.24
3 83.785 126.246 86.485 23.004
5. DISCUSIN DE LOS RESULTADOS
Para el diagnstico de hipercolesterolemia se recomiendan los siguientes lmites:

Colesterol total Colesterol-HDL Colesterol-LDL
Sospechoso: >200 mg/dL <55 mg/dL > 130 mg/dL
Elevado: >240 mg/dL <35 mg/dL > 150 mg/dL
Para el diagnstico de hipertrigliceridemia se recomiendan los siguientes lmites:
Sospechoso: >200 mg/dL
Elevado: >240 mg/dL
Muestra 1
Observando los resultados obtenidos del paciente de la muestra 1, vemos que presenta valores relativamente elevados de
triglicridos (mayores de 150) y de colesterol total y LDL (mayores de 200 y 130 respectivamente) y valores bajos de colesterol
HDL (menor de 55). Con lo que solo podemos tener la sospecha de una posible hipertrigliceridemia y una hipercolesterolemia.
Muestra 2
El paciente de la muestra 2 presenta valores muy bajos de colesterol HDL y relativamente altos de colesterol LDL, datos que
identifican una posible hipercolesterolemia del tipo Iia.
Muestra 3
El paciente de la muestra 3 se ajusta a unos valores aceptables que nos permiten afirmar que est sano.