CUANTIFICACIN DE COLESTEROL

RESUMEN
La cuantificacin de colesterol en suero es un procedimiento analtico bsico en el diagnstico
y seguimiento de enfermedades metablicas, primarias o secundarias. Altos niveles de
colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares. En esta prctica se
realizar la determinacin en suero de colesterol total.
Abreviaturas: 4-AP: 4-amino fenazona, CHE: colesterol estearasa, CHOD: colesterol oxidasa,
POD: peroxidasa.
1. INTRODUCCIN Y OBJETIVOS
El colesterol es el principal esterol del organismo humano y precursor de todos los dems
esteroides corporales. Se encuentra formando parte de membranas celulares,
lipoprotenas, cidos biliares y hormonas esteroideas. El colesterol es un importante
constituyente de los clculos biliares, pero su principal funcin patolgica, lo constituye la
produccin de aterosclerosis de arterias vitales, causando enfermedad coronaria,
cerebrovascular y vascular perifrica.
El origen del colesterol en el organismo tiene dos fuentes, la externa y el que produce
el propio organismo. Debido a que el organismo puede producir su propio colesterol, existe
la posibilidad que personas que no consuman colesterol, tengan niveles sanguneos
elevados por tener algn desorden gentico-metablico que conlleva a dicha elevacin.
Estos desordenes son ms comn de lo que se cree y son la principal causa de
ateroma y de enfermedades vasculares, entre ellas el infarto agudo al miocardio. Por esto
la importancia de determinar en forma precoz los niveles elevados de colesterol en los
pacientes.
Los alimentos derivados de animales son ricos en colesterol especialmente huevos, lcteos y
las carnes. La mayora de este est en forma esterificada. El organismo absorbe
aproximadamente la mitad del colesterol contenido en la dieta. Los esteroles vegetales
son escasamente absorbidos por el organismo.
El hgado es el principal rgano productor (10 % del total), siendo otros rganos
importantes en la produccin el intestino, corteza suprarrenal, testes y ovario. La sntesis
del colesterol se halla regulada sobre todo por la ingesta de colesterol en la dieta.







1.1 OBJETIVO
El alumno identificar y llevar a cabo los procedimientos correspondientes para llevar a cabo
una determinacin de colesterol de un paciente cualquiera, con lo cual se analizaran los
resultados para llegar a una conclusin definitiva mediante mtodos espectro mtricos.
Determinacin de colesterol total
Para la determinacin de colesterol total se utilizan reactivos comerciales que incluyen las
enzimas y sustratos necesarios para la cuantificacin de todas las formas de colesterol
presentes en el suero (Kit comercial de LinearChemicals). Las reacciones que tienen lugar son:
CHE
Esteres de colesterol + H2O Colesterol + Ac. Grasos
CHOD
Colesterol + O2+ H2O Colestenona + H2O2
POD
H2O2 + Fenol + 4-AP Quinona + H2O


1. Una colesterol estearasa (CHE) hidroliza los steres de colesterol a colesterol mas
cidos
grasos libre.
2. A continuacin una colesterol oxidasa (CHOD) oxida todo el colesterol a colestenona y
perxido de hidrgeno.
3. El perxido de hidrgeno es sustrato de una peroxidasa (POD) que junto con 4-amino
fenazona (4-AP) da lugar a la formacin de una quinona roja.
La quinona formada es proporcional a la concentracin de colesterol en la muestra.
La reaccin de Trinder: es la reaccin entre el perxido de hidrgeno y el fenol y
aminofenazona para formar una quinona, catalizada por la presencia de una peroxidasa. El
perxido de hidrgeno es en s producida por una reaccin inicial en la que el colesterol se
oxida en presencia del catalizador colesterol oxidasa en colestenona y H2O2.
2. LISTADO DE MATERIAL NECESARIO
Tubos de ensayo
Pipetas automticas micropipetas
Espectrofotmetro
Suero
Estndar de colesterol (200 mg/dl)
Reactivo de trabajo para el colesterol
Equipo de centrifugado



3. PROTOCOLOS A REALIZAR
Determinacin de colesterol total
1. Extraer sangre 5mL
2. Centrifugar a 3000 rpm por 10 minutos donde sale el plasma y eso se utilizara para los
procedimientos.
3. Disponer de tubos de ensayo rotulados como blanco, estandar y muestra.
4. La muestra se refiere al suero a valorar y se colocan tantos tubos muestras como
sueros se quieran valorar.
5. Pipetear los componentes indicados en la Tabla I, aadiendo en ltimo lugar el
reactivo de trabajo de colesterol.
Tabla I. Protocolo para la cuantificacin de colesterol total




Mezclar e Incubar los tres tubos 10 min a 38C.
Leer la absorbancia a 505 nm.
Calcula la concentracin de colesterol total de cada una de las muestras de suero del siguiente
modo:



4. RESULTADOS ESPERADOS
Los resultados esperados son aquellos que se indican a continuacin y se corresponden con los
valores de referencia encontrados en la poblacin sana y que varan segn sexo y edad
Colesterol total
Hasta 30 aos: 120-215 mg/dl
30- 39 aos: 135-240 mg/dl
40-49 aos: 140-280 mg/dl
50- 59 aos: 145-295 mg/dl


5. RECOMENDACIONES
Al momento de extraer la sangre la persona debe estar 12 horas en ayunas, el suero
obtenido puede conservarse durante 5 das a temperatura ambiente.
Es imprtate saber que todos los reactivos tienen una determinada temperatura de
conservacin u na fecha de vencimiento que debemos cumplir, de lo contrario
tendramos los valores no seran los reales.
Tener cuidado que la muestra y el reactivo no se contamine ni este turbio ni con
partculas extraas lo cual podra alterar el resultado
El color de ROJOQUINONA es estable por 2 horas por lo que la absorbancia debe ser
leda durante ese tiempo
Los resultados podran ser incorrectos si no respetamos el tipo de muestra, tiempo
establecido, y temperatura correcta.

6. CONCLUSIONES
El colesterol srico total tiene una unidad comprobada en el diagnstico de
hipercolesterolemia, arteriosclerosis, enfermedades hepticas y tiroideas. El colesterol total y
el colesterol HDL, junto con una determinacin de triglicrido proveen una informacin
valiosa para la prediccin de la enfermedad coronaria del corazn, y para el genotipo de
lipoprotena de acuerdo a la clasificacin de Fredckson.
Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares, en
especial aquel unido a las LDL (colesterol malo), en cambio el colesterol HDL (colesterol
bueno) se transporta al hgado para su metabolizacin y excrecin por va biliar y por tanto
no se asocia con riesgo de enfermedades coronarias.

7. BIBLIOGRAFA
1. Ferri, Fred. Consultor Clnico de Medicina Interna: Claves Diagnosticas y Tratamientos.
Editorial Ocano Mosby. Cuarta edicin. Barcelona, Espaa. 2006. Pg.421, 1271
2. Murray, Robert; Mayes, Peter A, et al.Harper, Bioqumica Ilustrada. Editorial Manual
Moderno. 16 Edicin. Mxico, D.F. 2005. Pg.125, 131.







TABLA I. PROTOCOLO PARA LA CUANTIFICACION DE COLESTEROL TOTAL

B
Blanco
S
Estandar
MP
1
Muestra
Estndar ( 150 mg/mL) (L) ---- 20 L
Muestra problema (L) --- --- 20 L
Reactivo de trabajo (mL) 2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL

De acuerdo a los datos:
Calcule la concentracin de Colesterol Total en las muestras problemas de acuerdo a la
ecuacin.

Donde:
S y MP
1
son las absorbancias obtenidas de cada muestra problema y del estndar,
respectivamente.








1. Tubo 1 Blanco = 0
2. Tubo 2 Estndar = 1.149
3. Tubo 3 Muestra = 1,181

Los niveles NORMALES de Colesterol total son de 120 a 240 mg/dl en ayunas, es decir, sin
haber consumido alimento.
[VALOR DE Y]
[VALOR DE Y]
1.145
1.15
1.155
1.16
1.165
1.17
1.175
1.18
1.185
0 0.5 1 1.5 2 2.5
[
]

d
e

t
u
b
o
s

d
e

l
a

m
u
e
s
t
r
a

ABSORBANCIA