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Impreso por: Paola Marcos Fecha Oficial: Oficial desde antes del 2013 Tipo de Documento: Capítulos Generales @2024 USPC
No Distribuir DOI Ref: w1uqz DOI: https://doi.org/10.31003/USPNF_M98802_01_02
1
á62ñ EXAMEN MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NO ESTÉRILES:

PRUEBAS DE MICROORGANISMOS ESPECÍFICOS
INTRODUCCIÓN
Las pruebas que se describen en este capítulo permitirán determinar la ausencia, o presencia limitada, de microorganismos
específicos que puedan ser detectados en las condiciones descritas.
Las pruebas han sido diseñadas principalmente para determinar si una sustancia o preparación cumple con alguna
especificación establecida de calidad microbiológica. Si se emplean con tales propósitos, seguir las instrucciones que se indican a
continuación, incluyendo el número de muestras a tomar, e interpretar los resultados según se indica más abajo.
Pueden utilizarse procedimientos microbiológicos alternativos, incluyendo métodos automatizados, siempre que se haya
demostrado su equivalencia con el método farmacopeico.
PROCEDIMIENTOS GENERALES
La preparación de muestras se realiza según se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento
Microbiano á61ñ.
Si el producto a examinar posee actividad antimicrobiana, ésta debe eliminarse o neutralizarse en la medida de lo posible
según se describe en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ.
l
Si se emplean sustancias tensoactivas en la preparación de la muestra, se debe demostrar su ausencia de toxicidad para los
microorganismos y su compatibilidad con cualquier inactivador usado, según se describe en Examen Microbiológico de Productos
No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ.
ia
PROPIEDADES DE PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO E INHIBITORIAS DE LOS MEDIOS, APTITUD
DE LA PRUEBA Y CONTROLES NEGATIVOS
fic
Se debe establecer la capacidad de la prueba para detectar microorganismos en presencia del producto a examinar. Se debe
confirmar la aptitud de la prueba si se introduce un cambio en la ejecución de la prueba o en el producto que pudiera afectar
los resultados.
Preparación de Cepas de Prueba

O
Usar suspensiones estables estandarizadas de cepas de prueba según se indica más abajo. Las técnicas de mantenimiento de
cultivos de lote de siembra (sistemas de lote de siembra) se usan para que los microorganismos viables empleados para
inoculación correspondan a no más de cinco pasajes desde el lote de siembra maestro original.
MICROORGANISMOS AEROBIOS
Cultivar por separado cada cepa bacteriana de prueba en recipientes que contengan Caldo Digerido de Caseína y Soja o Agar
Digerido de Caseína y Soja a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 24 horas. Cultivar por separado la cepa
de prueba de Candida albicans en Agar Sabouraud Dextrosa o Caldo Sabouraud Dextrosa a una temperatura de 20° a 25° durante
un período de 2 a 3 días.
Staphylococcus aureus Por ejemplo ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83 o NBRC 13276
Pseudomonas aeruginosa Por ejemplo ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118 o NBRC 13275
Escherichia coli Por ejemplo ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 o NBRC 3972
Salmonella enterica subesp. enterica serovar Typhimurium o, como alternativa, Por ejemplo ATCC 14028
Salmonella enterica subesp. enterica serovar Abony Por ejemplo NBRC 100797, NCTC 6017 o CIP 80.39
Candida albicans Por ejemplo ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72 o NBRC 1594
Usar Solución Amortiguada de Cloruro de Sodio–Peptona de pH 7,0 o Solución Amortiguadora de Fosfato de pH 7,2 para preparar
las suspensiones de prueba. Usar las suspensiones dentro de las 2 horas o dentro de las 24 horas si se almacenan a una
temperatura de 2° a 8°.
CLOSTRIDIOS
Usar Clostridium sporogenes, como por ejemplo ATCC 11437 (NBRC 14293, NCIMB 12343, CIP 100651) o ATCC 19404
(NCTC 532 o CIP 79.3). Cultivar la cepa clostridial de prueba en condiciones anaeróbicas en Medio Reforzado para Clostridios a
una temperatura de 30° a 35° durante un período de 24 a 48 horas. Como alternativa para la preparación y posterior dilución
de una suspensión fresca de las células vegetativas de Cl. sporogenes, se emplea una suspensión estable de esporas para la
https://online.uspnf.com/uspnf/document/4_GUID-A68DE4C6-A898-490B-8198-C9FE1ADF1B60_1_es-ES 1/10
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2
inoculación de prueba. La suspensión estable de esporas puede mantenerse a una temperatura de 2° a 8° durante un período
validado.
Control Negativo
Para verificar las condiciones de prueba, realizar un control negativo usando el diluyente seleccionado en lugar de la
preparación de prueba. No debe observarse crecimiento de microorganismos. Asimismo, realizar un control negativo al analizar
los productos según se indica en Pruebas de Productos. Es necesario investigar cualquier falla en el control negativo.
Propiedades de Promoción del Crecimiento e Inhibitorias de los Medios

Analizar cada partida de medio listo para usar y cada partida de medio preparado a partir de medio deshidratado o de los
ingredientes. Verificar las propiedades adecuadas de los medios pertinentes según se indica en la Tabla 1.
Tabla 1. Propiedades Indicadoras de Promoción del Crecimiento e Inhibitorias de los Medios

Prueba/Medio Propiedad Cepas de Prueba
Prueba para bacterias Gram-negativas tolerantes a la bilis
Caldo Mossel para Enriquecimiento de Ente- Promoción del crecimiento E. coli

robacterias
P. aeruginosa
Inhibitoria S. aureus
l
Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa Promoción del crecimiento + Indicadora E. coli
Prueba de Escherichia coli
Caldo MacConkey Promoción del crecimiento ia P. aeruginosa
E. coli
fic
Agar MacConkey Promoción del crecimiento + Indicadora E. coli
Prueba de Salmonella
Caldo Rappaport–Vassiliadis para Enriqueci- Promoción del crecimiento Salmonella enterica subesp. enterica serovar Typhimurium o
miento de Salmonella
Salmonella enterica subesp. enterica serovar Abony

O
Agar Xilosa Lisina Desoxicolato Promoción del crecimiento + Indicadora Salmonella enterica subesp. enterica serovar Typhimurium o
Salmonella enterica subesp. enterica serovar Abony
Prueba de Pseudomonas aeruginosa
Agar Cetrimida Promoción del crecimiento P. aeruginosa
Inhibitoria E. coli
Prueba de Staphylococcus aureus
Agar Manitol Salado Promoción del crecimiento + Indicadora S. aureus
Inhibitoria E. coli
Prueba de Clostridios
Medio Reforzado para Clostridios Promoción del crecimiento Cl. sporogenes
Agar Columbia Promoción del crecimiento Cl. sporogenes
Prueba de Candida albicans
Caldo Sabouraud Dextrosa Promoción del crecimiento C. albicans
Agar Sabouraud Dextrosa Promoción del crecimiento + Indicadora C. albicans
PRUEBA DE LAS PROPIEDADES DE PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO, MEDIOS LÍQUIDOS

Inocular una porción del medio apropiado con un número pequeño (no más de 100 ufc) del microorganismo adecuado.
Incubar a la temperatura especificada durante un tiempo no mayor que el período menor indicado en la prueba. Se produce
un crecimiento claramente visible de microorganismos comparable al obtenido anteriormente con una partida de medio
analizada y aprobada previamente.
3
PRUEBA DE LAS PROPIEDADES DE PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO, MEDIOS SÓLIDOS

Usar el Método de Extensión en Superficie (ver Métodos de Recuento en Placa en Examen Microbiológico de Productos No Estériles:
Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ), inoculando cada una de las placas con un número pequeño (no más de 100 ufc) del
microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un tiempo no mayor que el período menor indicado
en la prueba. Se produce un crecimiento de microorganismos comparable al obtenido anteriormente con una partida de medio
analizada y aprobada previamente.
PRUEBA DE LAS PROPIEDADES INHIBITORIAS, MEDIOS SÓLIDOS O LÍQUIDOS

Inocular el medio apropiado con al menos 100 ufc del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada
durante un tiempo no menor del período mayor indicado en la prueba. No se produce crecimiento del microorganismo de
prueba.
PRUEBA DE LAS PROPIEDADES INDICADORAS

Usar el Método de Extensión en Superficie (ver Métodos de Recuento en Placa en Examen Microbiológico de Productos No Estériles:
Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ), inoculando cada una de las placas con un número pequeño (no más de 100 ufc) del
microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura especificada durante un período que se encuentre en el intervalo indicado
en la prueba. Las colonias son comparables, en apariencia y reacciones indicadoras, a aquellas anteriormente obtenidas con
una partida de medio analizada y aprobada previamente.
Aptitud del Método de Prueba
l
Para cada producto nuevo a analizar, realizar una preparación de la muestra según se indica en el párrafo pertinente en
de prueba inoculada.
ia
Pruebas de Productos. Al momento de la mezcla, agregar cada cepa de prueba en el medio de crecimiento indicado. Inocular
individualmente las cepas de prueba. Usar un número de microorganismos equivalente a no más de 100 ufc en la preparación
Realizar la prueba según se indica en el párrafo pertinente en Pruebas de Productos empleando el período más corto de
incubación indicado.
fic
Se deben detectar los microorganismos específicos con las reacciones indicadoras según se describe en Pruebas de Productos.
Cualquier actividad antimicrobiana del producto requiere de una modificación del procedimiento de la prueba (ver
Neutralización/Eliminación de la Actividad Antimicrobiana en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento
Microbiano á61ñ).
Para un producto determinado, si la actividad antimicrobiana con respecto al microorganismo para el cual se indica la prueba
no puede neutralizarse, se asume que el microorganismo inhibido no estará presente en el producto.
O
PRUEBAS DE PRODUCTOS
Bacterias Gram-Negativas Tolerantes a la Bilis

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA E INCUBACIÓN PREVIA
Preparar una muestra empleando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar según se indica en Examen
Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ, excepto que se debe usar Caldo Digerido de
Caseína y Soja como diluyente de elección, mezclar e incubar a una temperatura de 20° a 25° durante un período suficiente
para resucitar las bacterias pero que no estimule la multiplicación de los organismos (por lo general 2 horas pero no más de 5
horas).
PRUEBA DE AUSENCIA
A menos que se indique algo diferente, usar un volumen correspondiente a 1 g del producto, según se indica en Preparación
de la Muestra e Incubación Previa, para inocular Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias. Incubar a una temperatura
de 30° a 35° durante un período de 24 a 48 horas. Subcultivar en placas de Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa. Incubar a una
temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 24 horas.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias.
PRUEBA CUANTITATIVA
Selección y Subcultivo—Inocular cantidades adecuadas de Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias con la
preparación según se indica en Preparación de la Muestra e Incubación Previa y/o diluciones de la misma que contengan
respectivamente 0,1 g; 0,01 g y 0,001 g (ó 0,1 mL; 0,01 mL y 0,001 mL) del producto a examinar. Incubar a una temperatura
de 30° a 35° durante un período de 24 a 48 horas. Subcultivar cada uno de los cultivos en una placa de Agar Violeta Rojo Bilis
Glucosa. Incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 24 horas.
Interpretación—El crecimiento de colonias constituye un resultado positivo. Indicar la menor cantidad del producto que
produce un resultado positivo y la mayor cantidad que produce un resultado negativo. Determinar la cantidad probable de
bacterias a partir de la Tabla 2.
4
Tabla 2. Interpretación de Resultados

Resultados para Cada Cantidad
del Producto
Cantidad Probable de Bacterias por g o mL
0,1 g o 0,1 mL 0,01 g o 0,01 mL 0,001 g o 0,001 mL del Producto
+ + + más de 103
+ + – menos de 103 y más de 102
+ – – menos de 102 y más de 10
– – – menos de 10
Escherichia coli

Preparar una muestra usando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a analizar según se indica en Examen
Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ y usar 10 mL o la cantidad correspondiente a 1 g o
1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada según se describe en Aptitud del Método de Prueba) de Caldo Digerido
de Caseína y Soja, mezclar e incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 24 horas.
SELECCIÓN Y SUBCULTIVO
l
Agitar el recipiente, transferir 1 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja a 100 mL de Caldo MacConkey e incubar a una
de 30° a 35° durante un período de 18 a 72 horas.
ia
temperatura de 42° a 44° durante un período de 24 a 48 horas. Subcultivar en una placa de Agar MacConkey a una temperatura
INTERPRETACIÓN
El crecimiento de colonias indica la posible presencia de E. coli. Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
fic
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias o si los resultados de las pruebas de identificación son
negativos.
Salmonella

O
Preparar el producto a analizar según se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento
Microbiano á61ñ y usar una cantidad correspondiente a no menos de 10 g ó 10 mL, para inocular una cantidad adecuada
(determinada según se describe en Aptitud del Método de Prueba) de Caldo Digerido de Caseína y Soja, mezclar e incubar a una
temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 24 horas.
Transferir 0,1 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja a 10 mL de Caldo Rappaport–Vassiliadis para Enriquecimiento de
Salmonella e incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 24 horas. Subcultivar en placas de Agar Xilosa
Lisina Desoxicolato. Incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 48 horas.
INTERPRETACIÓN
El crecimiento de colonias bien desarrolladas de color rojo, con o sin centros negros indica la posible presencia de
Salmonella. Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos o si los resultados de las pruebas de
identificación confirmatorias son negativos.
Pseudomonas aeruginosa

Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ y usar 10 mL o la cantidad correspondiente a 1 g
ó 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada según se describe en Aptitud del Método de Prueba) de Caldo Digerido
de Caseína y Soja y mezclar. Al analizar parches transdérmicos, filtrar el volumen de muestra correspondiente a un parche de la
preparación (ver Parches Transdérmicos en Preparación de la Muestra en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas
de Recuento Microbiano á61ñ) a través de un filtro de membrana estéril y colocar en 100 mL de Caldo Digerido de Caseína y Soja.
Incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 24 horas.
5
Subcultivar en una placa de Agar Cetrimida e incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 72 horas.
INTERPRETACIÓN
El crecimiento de colonias indica la posible presencia de P. aeruginosa. Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias o si los resultados de las pruebas de identificación
confirmatorias son negativos.
Staphylococcus aureus

Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ y usar 10 mL o la cantidad correspondiente a 1 g
ó 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada según se describe en Aptitud del Método de Prueba) de Caldo Digerido
de Caseína y Soja y homogenizar. Al analizar parches transdérmicos, filtrar el volumen de muestra correspondiente a un parche
de la preparación (ver Parches Transdérmicos en Preparación de la Muestra en Examen Microbiológico de Productos No Estériles:
Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ) a través de un filtro de membrana estéril y colocar en 100 mL de Caldo Digerido de
Caseína y Soja. Incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 24 horas.
l
Subcultivar en una placa de Agar Manitol Salado e incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 18 a 72
horas.
ia
INTERPRETACIÓN
El crecimiento de colonias amarillas o blancas rodeadas de una zona amarilla indica la posible presencia de S. aureus. Esto se
fic
confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias de los tipos descritos o si los resultados de las pruebas de
identificación confirmatorias son negativos.
Clostridios
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Y TRATAMIENTO TÉRMICO
O
Preparar una muestra usando una dilución 1 en 10 (con un volumen total mínimo de 20 mL) de no menos de 2 g o 2 mL
del producto a analizar según se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento Microbiano á61ñ.
Dividir la muestra en dos porciones de al menos 10 mL. Calentar una porción a 80° durante 10 minutos y enfriar rápidamente.
No calentar la otra porción.
Usar 10 mL o la cantidad correspondiente a 1 g o 1 mL del producto a analizar de ambas porciones para inocular cantidades
adecuadas (determinadas según se indica en Aptitud del Método de Prueba) de Medio Reforzado para Clostridios. Incubar bajo
condiciones anaeróbicas a una temperatura de 30° a 35° durante 48 horas. Después de la incubación, realizar subcultivos a
partir de cada recipiente en Agar Columbia e incubar bajo condiciones anaeróbicas a una temperatura de 30° a 35° durante
48 a 72 horas.
INTERPRETACIÓN
El crecimiento anaeróbico de bacilos (con o sin endosporas) que dan una reacción de catalasa negativa indica la presencia
de Clostridios.
Esto se confirma mediante pruebas de identificación. Si no se detectan colonias de los tipos descritos o si las pruebas de
identificación confirmatorias resultan negativas, el producto cumple con la prueba.
Candida albicans

Preparar el producto a analizar según se indica en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Recuento
Microbiano á61ñ y usar 10 mL o la cantidad correspondiente a no menos de 1 g ó 1 mL, para inocular 100 mL de Caldo Sabouraud
Dextrosa y mezclar. Incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 3 a 5 días.
6
Subcultivar en una placa de Agar Sabouraud Dextrosa e incubar a una temperatura de 30° a 35° durante un período de 24 a
48 horas.
INTERPRETACIÓN
El crecimiento de colonias blancas puede indicar la presencia de C. albicans. Esto se confirma mediante pruebas de
identificación.
El producto cumple con la prueba si no se desarrollan tales colonias o si las pruebas de identificación confirmatorias resultan
negativas.
SOLUCIONES RECOMENDADAS Y MEDIOS DE CULTIVO
[NOTA—Esta sección se proporciona como información.]

Las siguientes soluciones y medios de cultivo han resultado satisfactorios en el cumplimiento de los objetivos para los cuales
se indican en la prueba de contaminación microbiana en la Farmacopea. Se pueden usar otros medios siempre que se pueda
demostrar su aptitud.
Solución Amortiguadora Madre—Transferir 34 g de fosfato monobásico de potasio a un matraz volumétrico de
1000 mL, disolver en 500 mL de Agua Purificada, ajustar con hidróxido de sodio a un pH de 7,2 ± 0,2, agregar Agua Purificada a
volumen y mezclar. Dispensar en recipientes y esterilizar. Almacenar a una temperatura de 2° a 8°.
Solución Amortiguadora de Fosfato de pH 7,2—Preparar una mezcla de Agua Purificada y Solución
l
Amortiguadora Madre (800:1 v/v) y esterilizar.
Fosfato Monobásico de Potasio
Fosfato Dibásico de Sodio Dihidrato

ia
Solución Amortiguada de Cloruro de Sodio–Peptona
de pH 7,0
3,6 g
7,2 g (equivalente a fosfato 0,067 M)

fic
Cloruro de Sodio 4,3 g
Peptona (de carne o caseína) 1,0 g
Agua Purificada 1000 mL
Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

O
Caldo Digerido de Caseína y Soja

Digerido Pancreático de Caseína 17,0 g
Digerido Papaínico de Soja 3,0 g
Fosfato Dibásico de Potasio 2,5 g
Glucosa Monohidrato 2,5 g
Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7,3 ± 0,2 a 25°. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo
validado.
Agar Digerido de Caseína y Soja

Digerido Papaínico de Soja 5,0 g
Agar 15,0 g
validado.
Agar Sabouraud Dextrosa

Dextrosa 40,0 g
7
Agar Sabouraud Dextrosa

Mezcla de Digerido Péptico de Tejido Animal y Digerido Pancreático de Caseína (1:1) 10,0 g
Agar 15,0 g
validado.
Agar Papa Dextrosa

Infusión de papas 200 g
Dextrosa 20,0 g
Agar 15,0 g
validado.
Caldo Sabouraud Dextrosa
l
Dextrosa 20,0 g
Agua Purificada
ia
Mezcla de Digerido Péptico de Tejido Animal y Digerido Pancreático de Caseína (1:1)
validado.
10,0 g
1000 mL
fic
Caldo Mossel para Enriquecimiento de Enterobacterias
Digerido Pancreático de Gelatina 10,0 g
Bilis de Buey Deshidratada 20,0 g

O
Fosfato Monobásico de Potasio 2,0 g
Fosfato Dibásico de Sodio Dihidrato 8,0 g
Verde Brillante 15 mg
Ajustar el pH para que después del calentamiento sea de 7,2 ± 0,2 a 25°. Calentar a 100° durante 30 minutos y enfriar
inmediatamente.
Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa

Extracto de Levadura 3,0 g
Sales Biliares 1,5 g
Agar 15,0 g
Rojo Neutro 30 mg
Cristal Violeta 2 mg
Ajustar el pH para que después del calentamiento sea de 7,4 ± 0,2 a 25°. Calentar hasta el punto de ebullición; no calentar
en autoclave.
8
Caldo MacConkey
Lactosa Monohidrato 10,0 g
Bilis de Buey Deshidratada 5,0 g
Púrpura de Bromocresol 10 mg
validado.
Agar MacConkey
Peptonas (de carne y caseína) 3,0 g
Sales Biliares 1,5 g
Agar 13,5 g
l
Rojo Neutro 30,0 mg
Cristal Violeta
Agua Purificada
ia
Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7,1 ± 0,2 a 25°. Calentar a ebullición durante 1 minuto, agitando
constantemente, y luego esterilizar en un autoclave usando un ciclo validado.
1 mg
1000 mL
fic
Caldo Rappaport–Vassiliadis para Enriquecimiento de
Salmonella
Peptona de Soja 4,5 g
Cloruro de Magnesio Hexahidrato 29,0 g

O
Fosfato Dibásico de Potasio 0,4 g
Fosfato Monobásico de Potasio 0,6 g
Verde de Malaquita 0,036 g
Disolver, calentando ligeramente. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado a una temperatura que no exceda
de 115°. El pH debe ser de 5,2 ± 0,2 a 25° luego del calentamiento y esterilización en autoclave.
Agar Xilosa Lisina Desoxicolato

Xilosa 3,5 g
L-Lisina 5,0 g
Sacarosa 7,5 g
Rojo de Fenol 80 mg
Agar 13,5 g
Desoxicolato de Sodio 2,5 g
Tiosulfato de Sodio 6,8 g
Citrato Férrico Amónico 0,8 g
9
Ajustar el pH para que después del calentamiento sea de 7,4 ± 0,2 a 25°. Calentar a ebullición, enfriar a 50° y verter en placas
de Petri. No calentar en un autoclave.
Agar Cetrimida
Cloruro de Magnesio 1,4 g
Sulfato de Potasio 10,0 g
Cetrimida 0,3 g
Agar 13,6 g
Glicerol 10,0 mL
Calentar a ebullición durante 1 minuto con agitación. Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7,2 ± 0,2 a
25°. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.
Agar Manitol Salado

Digerido Péptico de Tejido Animal 5,0 g
l
Extracto de Carne 1,0 g
D-Manitol
Cloruro de Sodio
Agar
Rojo de Fenol
ia 10,0 g
75,0 g
15,0 g
0,025 g
fic
Calentar a ebullición durante 1 minuto con agitación. Ajustar el pH para que después de la esterilización sea de 7,4 ± 0,2 a
25°. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.
Medio Reforzado para Clostridios

O
Extracto de Carne 10,0 g
Peptona 10,0 g
Almidón Soluble 1,0 g
Clorhidrato de Cisteína 0,5 g
Acetato de Sodio 3,0 g
Agar 0,5 g
Hidratar el agar y disolver calentando hasta ebullición y revolviendo constantemente. Si fuera necesario, ajustar el pH para
que después de la esterilización sea de 6,8 ± 0,2 a 25°. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.
Agar Columbia
Digerido Péptico de Carne 5,0 g
Digerido Pancreático de Corazón 3,0 g
Almidón de Maíz 1,0 g
Agar, de acuerdo con la capacidad de gelificación 10,0–15,0 g
10
Agar Columbia
Hidratar el agar y disolver calentando hasta ebullición y revolviendo constantemente. Si fuera necesario, ajustar el pH para
que después de la esterilización sea de 7,3 ± 0,2 a 25°. Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado. Dejar enfriar a
una temperatura de 45° a 50°, agregar, cuando sea necesario, sulfato de gentamicina correspondiente a 20 mg de gentamicina
base y verter en placas de Petri.
l
ia
fic
O

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á62ñ EXAMEN MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NO ESTÉRILES:

Preparación de Cepas de Prueba

Propiedades de Promoción del Crecimiento e Inhibitorias de los Medios

Tabla 1. Propiedades Indicadoras de Promoción del Crecimiento e Inhibitorias de los Medios

Caldo Mossel para Enriquecimiento de Ente- Promoción del crecimiento E. coli

Prueba de Escherichia coli

Caldo MacConkey Promoción del crecimiento ia P. aeruginosa

Agar MacConkey Promoción del crecimiento + Indicadora E. coli

Salmonella enterica subesp. enterica serovar Abony

Salmonella enterica subesp. enterica serovar Abony

Prueba de Pseudomonas aeruginosa

Agar Cetrimida Promoción del crecimiento P. aeruginosa

Prueba de Staphylococcus aureus

Agar Manitol Salado Promoción del crecimiento + Indicadora S. aureus

Medio Reforzado para Clostridios Promoción del crecimiento Cl. sporogenes

Agar Columbia Promoción del crecimiento Cl. sporogenes

Prueba de Candida albicans

Caldo Sabouraud Dextrosa Promoción del crecimiento C. albicans

Agar Sabouraud Dextrosa Promoción del crecimiento + Indicadora C. albicans

PRUEBA DE LAS PROPIEDADES DE PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO, MEDIOS LÍQUIDOS

PRUEBA DE LAS PROPIEDADES DE PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO, MEDIOS SÓLIDOS

PRUEBA DE LAS PROPIEDADES INHIBITORIAS, MEDIOS SÓLIDOS O LÍQUIDOS

PRUEBA DE LAS PROPIEDADES INDICADORAS

Aptitud del Método de Prueba

Bacterias Gram-Negativas Tolerantes a la Bilis

Tabla 2. Interpretación de Resultados

+ + – menos de 103 y más de 102

+ – – menos de 102 y más de 10

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA E INCUBACIÓN PREVIA

de 30° a 35° durante un período de 18 a 72 horas.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA E INCUBACIÓN PREVIA

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA E INCUBACIÓN PREVIA

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA E INCUBACIÓN PREVIA

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA E INCUBACIÓN PREVIA

SOLUCIONES RECOMENDADAS Y MEDIOS DE CULTIVO

[NOTA—Esta sección se proporciona como información.]

Fosfato Monobásico de Potasio

Fosfato Dibásico de Sodio Dihidrato

7,2 g (equivalente a fosfato 0,067 M)

Peptona (de carne o caseína) 1,0 g

Agua Purificada 1000 mL

Esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.

Caldo Digerido de Caseína y Soja

Digerido Papaínico de Soja 3,0 g

Cloruro de Sodio 5,0 g

Fosfato Dibásico de Potasio 2,5 g

Glucosa Monohidrato 2,5 g

Agua Purificada 1000 mL

Agar Digerido de Caseína y Soja

Digerido Papaínico de Soja 5,0 g

Cloruro de Sodio 5,0 g

Agua Purificada 1000 mL

Agar Sabouraud Dextrosa

Agar Sabouraud Dextrosa

Agua Purificada 1000 mL

Agar Papa Dextrosa

Agua Purificada 1000 mL

Caldo Sabouraud Dextrosa

Glucosa Monohidrato 5,0 g

Bilis de Buey Deshidratada 20,0 g

Fosfato Monobásico de Potasio 2,0 g