USP-NF 62 Microbiological Examination of Nonsterile Products - Tests For Specified Microorganisms

15/9/21 11:23 USP-NF 〈62〉 Microbiological Examination of Nonsterile Products: Tests for Specified Microorganisms
Printed on: Wed Sep 15 2021, 11:23:23 am

Impreso por: Mariana Velasco
Estado oficial: Actualmente oficial el 15 de septiembre de 2021
Fecha oficial: Oficial antes de 2013
Tipo de documento: CAPÍTULO GENERAL
DocId: 1_GUID-A68DE4C6-A898-490B-8198-C9FE1ADF1B60_1_en-US
© 2021 USPC
〈 62 〉 EXAMEN MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NO

ESTERILES: PRUEBAS DE MICROORGANISMOS ESPECIFICADOS
INTRODUCCIÓN
Las pruebas que se describen a continuación permitirán la determinación de la ausencia o la presencia limitada de microorganismos
específicos que pueden detectarse en las condiciones descritas.
Las pruebas están diseñadas principalmente para determinar si una sustancia o preparación cumple con una especificación
establecida para la calidad microbiológica. Cuando se utilice para tales fines, siga las instrucciones que se proporcionan a
continuación, incluida la cantidad de muestras que se tomarán, e interprete los resultados como se indica a continuación.
Pueden utilizarse procedimientos microbiológicos alternativos, incluidos métodos automatizados, siempre que se haya demostrado
su equivalencia con el método de la farmacopea.
PROCEDIMIENTOS GENERALES
La preparación de las muestras se lleva a cabo como se describe en Examen microbiológico de productos no estériles: Pruebas de
enumeración microbiana 〈 61 〉 .
Si el producto que se va a examinar tiene actividad antimicrobiana, en la medida de lo posible, se elimina o neutraliza como se
describe en Examen microbiológico de productos no estériles: pruebas de enumeración microbiana 〈 61 〉 .
AL
Si se utilizan sustancias tensioactivas para la preparación de muestras, se debe demostrar su ausencia de toxicidad para los
microorganismos y su compatibilidad con cualquier inactivador utilizado como se describe en Examen microbiológico de productos no
estériles: pruebas de enumeración microbiana 〈 61 〉 .
PROPIEDADES INHIBIDORAS Y PROMOTORAS DEL CRECIMIENTO DE LOS MEDIOS, IDONEIDAD DE LA PRUEBA Y

CONTROLES NEGATIVOS
CI
Debe establecerse la capacidad de la prueba para detectar microorganismos en presencia del producto a analizar. Se debe
confirmar la idoneidad si se introduce un cambio en el rendimiento de la prueba o un cambio en el producto que pueda afectar el
resultado de la prueba.
Preparación de cepas de prueba

FI
Utilice suspensiones estables estandarizadas de cepas de prueba como se indica a continuación. Se utilizan técnicas de
mantenimiento de cultivos de lotes de semillas (sistemas de lotes de semillas) de modo que los microorganismos viables utilizados
para la inoculación no se eliminen más de cinco pases del lote de semillas maestro original.
O
microorganismos aerobios
Cultive cada una de las cepas bacterianas de prueba por separado en recipientes que contengan caldo digerido de soja y caseína o
en agar de soja para digerir caseína a 30 ° a 35 ° durante 18 a 24 horas. Cultive la cepa de prueba para Candida albicans por
separado en Sabouraud Dextrose Agar o en Sabouraud Dextrose Broth a 20 ° a 25 ° durante 2 a 3 días.
Staphylococcus aureus como ATCC 6538, NCIMB 9518, CIP 4.83 o NBRC 13276
Pseudomonas aeruginosa como ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118 o NBRC 13275
Escherichia coli como ATCC 8739, NCIMB 8545, CIP 53.126 o NBRC 3972
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium o, como ATCC 14028

como alternativa,
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Abony como NBRC 100797, NCTC 6017 o CIP 80.39
Candida albicans como ATCC 10231, NCPF 3179, IP 48.72 o NBRC 1594
https://online.uspnf.com/uspnf/document/1_GUID-A68DE4C6-A898-490B-8198-C9FE1ADF1B60_1_en-US?source=Search Results&highlight=62 1/12

Utilice una solución tamponada de cloruro de sodio y peptona pH 7,0 o una solución tampón de fosfato pH 7,2 para preparar
suspensiones de prueba. Use las suspensiones dentro de las 2 horas o dentro de las 24 horas si se almacenan entre 2 ° y 8 °.
clostridios
Utilice Clostridium sporogenes como ATCC 11437 (NBRC 14293, NCIMB 12343, CIP 100651) o ATCC 19404 (NCTC 532 o CIP 79.3).
Cultive la cepa de prueba de clostridios en condiciones anaeróbicas en medio reforzado para clostridios a 30 ° a 35 ° durante 24 a 48
horas. Como alternativa a preparar y luego diluir una nueva suspensión de células vegetativas de Cl. sporogenes, se utiliza una
suspensión de esporas estable para la inoculación de prueba. La suspensión de esporas estable puede mantenerse entre 2 ° y 8 °
durante un período validado.
Control negativo
Para verificar las condiciones de la prueba, se realiza un control negativo utilizando el diluyente elegido en lugar de la preparación
de la prueba. No debe haber crecimiento de microorganismos. También se realiza un control negativo cuando se prueban los
productos como se describe en Prueba de productos . Un control negativo fallido requiere una investigación.
Promoción del crecimiento y propiedades inhibidoras de los medios
Pruebe cada lote de medio ya preparado y cada lote de medio preparado a partir de medio deshidratado o de ingredientes.
Verifique las propiedades adecuadas de los medios relevantes como se describe en la Tabla 1 .
Tabla 1. Propiedades indicativas, inhibidoras y promotoras del crecimiento de los medios
Prueba / Medio Propiedad Prueba de cepas
Prueba de bacterias gramnegativas tolerantes a la bilis
Caldo de enriquecimiento de enterobac‐

terias Mossel
AL Fomento del crecimiento E. coli
P. aeruginosa
Inhibitorio S. aureus
CI
Violet Red Bile Glucose Agar Promotor de crecimiento + Indicativo E. coli
P. aeruginosa
FI
Prueba de Escherichia coli
Caldo MacConkey Fomento del crecimiento E. coli

O
Agar MacConkey Promotor de crecimiento + Indicativo E. coli
Prueba de Salmonella
Caldo de enriquecimiento Rappaport Fomento del crecimiento Salmonella enterica subsp. enterica
Vassiliadis Salmonella serovar Typhimurium o
Salmonella enterica subsp. enterica

serovar Abony
Agar xilosa lisina desoxicolato Promotor de crecimiento + Indicativo Salmonella enterica subsp. enterica
serovar Typhimurium o

Prueba / Medio Propiedad Prueba de cepas
Salmonella enterica subsp. enterica

serovar Abony
Prueba de Pseudomonas aeruginosa
Agar cetrimida Fomento del crecimiento P. aeruginosa
Inhibitorio E. coli
Prueba de Staphylococcus aureus
Agar sal manitol Promotor de crecimiento + Indicativo S. aureus
Inhibitorio E. coli
Prueba de Clostridia
Medio reforzado para clostridios Fomento del crecimiento Cl. esporogenes
Agar Columbia Fomento del crecimiento Cl. esporogenes
Prueba de Candida albicans
Caldo Sabouraud Dextrosa
Agar dextrosa Sabouraud

AL Fomento del crecimiento
Promotor de crecimiento + Indicativo

C. albicans
C. albicans
Prueba de propiedades promotoras del crecimiento, medios líquidos

Inocular una porción del medio apropiado con una pequeña cantidad (no más de 100 ufc) del microorganismo apropiado. Incubar
CI
a la temperatura especificada por no más del período de tiempo más corto especificado en la prueba. Se produce un crecimiento
claramente visible del microorganismo comparable al obtenido previamente con un lote de medio previamente probado y
aprobado.
Prueba de propiedades que promueven el crecimiento, medios sólidos

FI
Realice el método de extensión en superficie (consulte Métodos de recuento en placa en Examen microbiológico de productos no
estériles: Pruebas de enumeración microbiana
〈 61 〉 ), inoculando cada placa con una pequeña cantidad (no más de 100 ufc) del
microorganismo apropiado. Incubar a la temperatura especificada por no más del período de tiempo más corto especificado en la
prueba. Se produce un crecimiento del microorganismo comparable al obtenido previamente con un lote de medio previamente
O
probado y aprobado.
Prueba de propiedades inhibidoras, medios líquidos o sólidos

Inocular el medio apropiado con al menos 100 ufc del microorganismo apropiado. Incubar a la temperatura especificada durante
no menos del período de tiempo más largo especificado en la prueba. No se produce crecimiento del microorganismo de prueba.
Prueba de propiedades indicativas

Realice el método de extensión en superficie (consulte Métodos de recuento en placa en Examen microbiológico de productos no
estériles: Pruebas de enumeración microbiana
〈 61 〉 ), inoculando cada placa con una pequeña cantidad (no más de 100 ufc) del
microorganismo apropiado. Incubar a la temperatura especificada durante un período de tiempo dentro del rango especificado en la
prueba. Las colonias son comparables en apariencia y reacciones de indicación a las obtenidas previamente con un lote de medio
previamente probado y aprobado.
Idoneidad del método de prueba

Para cada producto nuevo que se probará, realice la preparación de la muestra como se describe en el párrafo correspondiente
bajo Prueba de productos . En el momento de mezclar, agregue cada cepa de prueba en el medio de cultivo prescrito. Inocular las
cepas de prueba individualmente. Utilice una cantidad de microorganismos equivalente a no más de 100 ufc en la preparación de
prueba inoculada.

Realice la prueba como se describe en el párrafo correspondiente bajo Prueba de productos utilizando el período de incubación
más corto prescrito.
Los microorganismos especificados deben detectarse con las reacciones de indicación descritas en Prueba de productos .
Cualquier actividad antimicrobiana del producto requiere una modificación del procedimiento de prueba (consulte Neutralización /
eliminación de la actividad antimicrobiana en el examen microbiológico de productos no estériles: pruebas de enumeración microbiana
〈 61 〉 ).
Para un producto dado, si la actividad antimicrobiana con respecto a un microorganismo para el que se prescriben las pruebas no
se puede neutralizar, entonces se supone que el microorganismo inhibido no estará presente en el producto.
PRUEBAS DE PRODUCTOS
Bacterias gramnegativas tolerantes a la bilis
Preparación de muestras y preincubación

Prepare una muestra usando una dilución 1 en 10 de no menos de 1 g del producto a ser examinado como se describe en Examen
microbiológico de productos no estériles: pruebas de enumeración microbiana 〈 61 〉 , pero usando caldo de digestión de
soja-
caseína como el diluyente elegido, mezcle e incube a 20 ° a 25 ° durante un tiempo suficiente para resucitar las bacterias pero no
suficiente para estimular la multiplicación de los organismos (generalmente 2 horas pero no más de 5 horas).
Prueba de ausencia
A menos que se indique lo contrario, utilice el volumen correspondiente a 1 g del producto, tal como se preparó en Preparación
de muestras y preincubación, para inocular el caldo de enriquecimiento de enterobacterias Mossel . Incube a 30 ° a 35 ° durante 24 a
48 horas. Subcultivo en placas de agar glucosa y bilis rojo violeta . Incubar a 30 ° a 35 ° durante 18 a 24 horas.
El producto cumple con la prueba si no hay crecimiento de colonias.
Prueba cuantitativa
AL
Selección y subcultura -Inocular cantidades adecuadas de caldo de enriquecimiento de enterobacterias Mossel con la preparación
como se indica en
Preparación de muestras y preincubación y / o diluciones de la misma que contengan respectivamente 0,1 g, 0,01
gy 0,001 g (o 0,1 ml, 0,01 ml y 0,001 ml) de el producto a examinar. Incube a 30 ° a 35 ° durante 24 a 48 horas. Subcultivar cada uno
de los cultivos en una placa de agar glucosa y bilis rojo violeta . Incubar a 30 ° a 35 ° durante 18 a 24 horas.
Interpretación -El crecimiento de colonias constituye un resultado positivo. Tenga en cuenta la cantidad más pequeña del producto
CI
que da un resultado positivo y la cantidad más grande que da un resultado negativo. Determine a partir de la Tabla 2 el número
probable de bacterias.
Tabla 2. Interpretación de los resultados

FI
Resultados para cada cantidad de producto
Número probable
0,1 go
0,01 go
0,001 go
de bacterias por go
0,1 ml 0,01 ml 0,001 ml mL de producto
+ + + más de 10 3
+ + – menos de 10 3 y más de 10 2
+ – – menos de 10 2 y más de 10
– – – menos de 10
Escherichia coli

microbiológico de productos no estériles: Pruebas de enumeración microbiana
〈 61 〉 , y use 10 mL o la cantidad correspondiente a
1 go 1 mL, para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del método de prueba ) de caldo de
digestión de soja-caseína, mezclar e incubar a 30 ° a 35 ° durante 18 a 24 horas.

Selección y subcultura
Agite el recipiente, transfiera 1 ml de caldo de digestión de soja y caseína a 100 ml de caldo MacConkey e incube a 42 ° a 44 °
durante 24 a 48 horas. Subcultivar en una placa de agar MacConkey a 30 ° a 35 ° durante 18 a 72 horas.
Interpretación
El crecimiento de colonias indica la posible presencia de E. coli . Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no hay colonias presentes o si las pruebas de identificación son negativas.
Salmonela

Prepare el producto a examinar como se describe en Examen microbiológico de productos no estériles: Pruebas de enumeración
microbiana
〈 61 〉 , y use la cantidad correspondiente a no menos de 10 go 10 mL para inocular una cantidad adecuada
(determinada como se describe en Idoneidad de la prueba Método ) de caldo de digestión de soja-caseína, mezclar e incubar a 30 ° a
35 ° durante 18 a 24 horas.
Transfiera 0.1 mL de caldo de digestión de soja-caseína a 10 mL de caldo de enriquecimiento Rappaport Vassiliadis Salmonella e
incube a 30 ° a 35 ° durante 18 a 24 horas. Subcultivo en placas de agar xilosa lisina desoxicolato . Incube a 30 ° a 35 ° durante 18 a
48 horas.
Interpretación
La posible presencia de Salmonella está indicada por el crecimiento de colonias rojas bien desarrolladas, con o sin centros negros.
Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no existen colonias de los tipos descritos o si las pruebas de identificación confirmatorias son
negativas.
AL Pseudomonas aeruginosa

CI
1 go 1 mL para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del método de prueba ) de caldo de
digestión de soja-caseína y mezclar. Cuando pruebe los parches transdérmicos, filtre el volumen de muestra correspondiente a un
parche de la preparación (consulte
Parches transdérmicos enPreparación de la Muestra en Examen Microbiológico de Productos No
Estériles: Ensayos de Enumeración Microbiana 〈 61 〉 ) a través de una membrana filtrante estéril, y colocar en 100 mL de Caldo
FI
Digerido de Soja-Caseína . Incubar a 30 ° a 35 ° durante 18 a 24 horas.
Subcultivar en una placa de agar cetrimida e incubar a 30 ° a 35 ° durante 18 a 72 horas.
O
Interpretación
El crecimiento de colonias indica la posible presencia de P. aeruginosa . Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no hay colonias presentes o si las pruebas de identificación confirmatorias son negativas.
Staphylococcus aureus

1 go 1 mL para inocular una cantidad adecuada (determinada como se describe en Idoneidad del método de prueba ) de caldo de
digestión de soja-caseína y homogeneizar. Cuando pruebe los parches transdérmicos, filtre el volumen de muestra correspondiente
a un parche de la preparación (consulte
Parches transdérmicosen Preparación de la Muestra en Examen Microbiológico de Productos
No Estériles: Ensayos de Enumeración Microbiana 〈 61 〉 ) a través de una membrana filtrante estéril, y colocar en 100 mL de Caldo
Digerido de Soja-Caseína . Incubar a 30 ° a 35 ° durante 18 a 24 horas.
Subcultivar en una placa de agar sal de manitol e incubar a 30 ° a 35 ° durante 18 a 72 horas.

Interpretación
La posible presencia de S. aureus está indicada por el crecimiento de colonias amarillas o blancas rodeadas por una zona amarilla.
Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si no existen colonias de los tipos descritos o si las pruebas de identificación confirmatorias son
negativas.
Clostridios
Preparación de muestras y tratamiento térmico

Prepare una muestra usando una dilución 1 en 10 (con un volumen total mínimo de 20 mL) de no menos de 2 go 2 mL del
producto a ser examinado como se describe en Examen microbiológico de productos no estériles: Pruebas de enumeración
microbiana 〈 61 〉 . Divida la muestra en dos porciones de al menos 10 mL. Calentar una porción a 80 ° durante 10 minutos y
enfriar rápidamente. No caliente la otra porción.
Utilice 10 ml o la cantidad correspondiente a 1 go 1 ml del producto a examinar de ambas porciones para inocular cantidades
adecuadas (determinadas como se describe en Idoneidad del método de prueba ) de medio reforzado para clostridios . Incubar en
condiciones anaeróbicas de 30 ° a 35 ° durante 48 horas. Después de la incubación, realice subcultivos de cada recipiente en
Columbia Agar e incube en condiciones anaeróbicas de 30 ° a 35 ° durante 48 a 72 horas.
Interpretación
La aparición de un crecimiento anaeróbico de bacilos (con o sin endosporas) que dan una reacción de catalasa negativa indica la
presencia de clostridios.
Esto se confirma mediante pruebas de identificación. El producto cumple con la prueba si no existen colonias de los tipos
descritos o si las pruebas de identificación confirmatorias son negativas.
AL Candida albicans

Preparar el producto a examinar como se describe en Examen Microbiológico de Productos No Estériles: Pruebas de Enumeración
Microbiana
〈 61 〉 , y utilizar 10 mL o la cantidad correspondiente a no menos de 1 go 1 mL, para inocular 100 mL de Caldo
CI
Sabouraud Dextrosa , y mezcla. Incube a 30 ° a 35 ° durante 3 a 5 días.
Subcultivar en una placa de agar dextrosa Sabouraud e incubar a 30 ° a 35 ° durante 24 a 48 horas.
Interpretación
FI
El crecimiento de colonias blancas puede indicar la presencia de C. albicans . Esto se confirma mediante pruebas de identificación.
El producto cumple con la prueba si tales colonias no están presentes o si las pruebas de identificación de confirmación son
negativas.
O
SOLUCIONES Y MEDIOS DE CULTURA RECOMENDADOS

[ Nota : esta sección se proporciona a título informativo. ]
Las siguientes soluciones y medios de cultivo han resultado satisfactorios para los fines para los que se prescriben en la prueba de
contaminación microbiana en la Farmacopea. Pueden utilizarse otros medios siempre que se pueda demostrar su idoneidad.
Solución tampón stock -Transferir 34 g de dihidrogenofosfato de potasio a un matraz aforado de 1000 ml, disolver en 500 ml de
agua purificada, ajustar con hidróxido de sodio a un pH de 7.2 ± 0.2, agregar agua purificada a volumen y mezclar. Dispensar en
recipientes y esterilizar. Almacenar a una temperatura de 2 ° a 8 °.
Solución tampón fosfato pH 7,2 -Prepare una mezcla de agua purificada y solución tampón madre (800: 1 v / v) y esterilice.
Solución tamponada de cloruro de sodio y peptona pH 7,0
Dihidrógeno fosfato de potasio 3,6 g
Fosfato de hidrógeno disódico dihidrato 7,2 g (equivalente a 0,067 M de fosfato)
Cloruro de sodio 4,3 g

Solución tamponada de cloruro de sodio y peptona pH 7,0
Peptona (carne o caseína) 1,0 g
Agua purificada 1000 ml
Esterilizar en autoclave mediante un ciclo validado.
Caldo digerido de soja y caseína
Digerido pancreático de caseína 17,0 g
Digerido Papaico de Soja 3,0 g
Fosfato de hidrógeno dibásico 2,5 g
Monohidrato de glucosa 2,5 g
Ajuste el pH para que después de la esterilización sea de 7,3 ± 0,2 a 25 °. Esterilizar en autoclave mediante un ciclo validado.
Agar digerido de soja y caseína
Digerido pancreático de caseína
Digerido Papaico de Soja

AL 15,0 g
5,0 g

CI
Así que eso 15,0 g
FI
Agar dextrosa Sabouraud
Dextrosa 40,0 g
O
Mezcla de digestión péptica de tejido animal y digestión 10,0 g

pancreática de caseína (1: 1)
Así que eso 15,0 g
Agar dextrosa de patata
Infusión de patatas 200 g
Dextrosa 20,0 g
Así que eso 15,0 g

Caldo Sabouraud Dextrosa
Dextrosa 20,0 g
Mezcla de digestión péptica de tejido animal y digestión 10,0 g

pancreática de caseína (1: 1)
Caldo de enriquecimiento de enterobacterias Mossel
Digerido pancreático de gelatina 10,0 g
Bilis de buey deshidratada 20,0 g
Fosfato de hidrógeno disódico dihidrato 8,0 g
Verde brillante 15 mg
Agua purificada AL 1000 ml
Ajuste el pH para que, después de calentarlo, sea de 7,2 ± 0,2 a 25 °. Calentar a 100 ° durante 30 minutos y enfriar inmediatamente.
Violet Red Bile Glucose Agar

CI
Extracto de levadura 3,0 g
Sales biliares 1,5 g

FI

O
Así que eso 15,0 g
Rojo neutro 30 mg
Cristal violeta 2 mg
Ajuste el pH para que después de calentar sea de 7,4 ± 0,2 a 25 °. Calentar hasta que hierva; no calentar en autoclave.
Caldo MacConkey
Lactosa monohidrato 10,0 g
Bilis de buey deshidratada 5,0 g

Caldo MacConkey
Bromocresol púrpura 10 mg
Agar MacConkey
Peptonas (carne y caseína) 3,0 g
Sales biliares 1,5 g
Así que eso 13,5 g
Rojo neutro 30,0 mg
Cristal violeta 1 mg
Agua purificada
AL 1000 ml
Ajuste el pH para que después de la esterilización sea de 7,1 ± 0,2 a 25 °. Hervir durante 1 minuto con agitación constante, luego
esterilizar en un autoclave utilizando un ciclo validado.
Caldo de enriquecimiento Rappaport Vassiliadis Salmonella

CI
Soya Peptone 4,5 g
Cloruro de magnesio hexahidratado 29,0 g

FI
Fosfato dipotásico 0,4 g

O
Verde malaquita 0,036 g
Disuelva, calentando ligeramente. Esterilizar en autoclave mediante un ciclo validado, a una temperatura no superior a 115 °. El pH
debe ser de 5,2 ± 0,2 a 25 ° después de calentar y esterilizar en autoclave.
Agar xilosa lisina desoxicolato
Xilosa 3,5 g
l- lisina 5,0 g
Sacarosa 7,5 g

Agar xilosa lisina desoxicolato
Fenol rojo 80 magnesio
Así que eso 13,5 g
Desoxicolato de sodio 2,5 g
Tiosulfato de sodio 6,8 g
Citrato de amonio férrico 0,8 g
Ajuste el pH para que después de calentar sea de 7,4 ± 0,2 a 25 °. Calentar a ebullición, enfriar a 50 ° y verter en placas de Petri. No
calentar en autoclave.
Agar cetrimida
Cloruro de magnesio 1,4 g
Sulfato dipotásico
Cetrimida
AL 10,0 g
0,3 g
Así que eso 13,6 g

CI
Glicerol 10,0 ml
FI
Calentar a ebullición durante 1 minuto con agitación. Ajuste el pH para que después de la esterilización sea de 7,2 ± 0,2 a 25 °.
Agar sal manitol

O
Digerido pancreático de caseína 5,0 g
Digerido péptico de tejido animal 5,0 g
Extracto de carne 1,0 g
d- manitol 10,0 g
Así que eso 15,0 g
Fenol rojo 0,025 g
Calentar a ebullición durante 1 minuto con agitación. Ajuste el pH para que después de la esterilización sea de 7,4 ± 0,2 a 25 °.

Medio reforzado para clostridios
Extracto de carne 10,0 g
Peptona 10,0 g
Almidón soluble 1,0 g
Clorhidrato de cisteína 0,5 g
Acetato sódico 3,0 g
Así que eso 0,5 g
Hidratar el agar y disolver calentando a ebullición con agitación continua. Si es necesario, ajuste el pH para que después de la
esterilización sea de aproximadamente 6,8 ± 0,2 a 25 °. Esterilizar en autoclave mediante un ciclo validado.
Agar Columbia
Digerido pancreático de caseína
Digerido péptico de carne

AL 10,0 g
5,0 g
Digestión pancreática del corazón 3,0 g

CI
Almidón de maíz 1,0 g

FI
Agar, según poder gelificante 10,0-15,0 g

O
Hidratar el agar y disolver calentando a ebullición con agitación continua. Si es necesario, ajuste el pH para que después de la
esterilización sea de 7,3 ± 0,2 a 25 °. Esterilizar en autoclave mediante un ciclo validado. Deje enfriar de 45 ° a 50 °; añadir, en caso
necesario, sulfato de gentamicina correspondiente a 20 mg de gentamicina base y verter en placas de Petri.
Información auxiliar -
Por favor, compruebe si su pregunta en las FAQ antes de contactar con la USP.
Tema / Pregunta Contacto Comité de Expertos
< 62 > EXAMEN MICROBIOLOGICO DE

Capítulos generales del GCM2020 -
PRODUCTOS NO ESTERILES; PRUEBAS Enlace científico principal de Microbiología 2020
PARA MICROORGANISMOS Radhakrishna S Tirumalai
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AL
CI
FI
O

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15/9/21 11:23 USP-NF 〈62〉 Microbiological Examination of Nonsterile Products: Tests for Specified Microorganisms

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〈 62 〉 EXAMEN MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS NO

PROPIEDADES INHIBIDORAS Y PROMOTORAS DEL CRECIMIENTO DE LOS MEDIOS, IDONEIDAD DE LA PRUEBA Y

Preparación de cepas de prueba

Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium o, como ATCC 14028

https://online.uspnf.com/uspnf/document/1_GUID-A68DE4C6-A898-490B-8198-C9FE1ADF1B60_1_en-US?source=Search Results&highlight=62 1/12

Promoción del crecimiento y propiedades inhibidoras de los medios

Tabla 1. Propiedades indicativas, inhibidoras y promotoras del crecimiento de los medios

Prueba / Medio Propiedad Prueba de cepas

Prueba de bacterias gramnegativas tolerantes a la bilis

Caldo de enriquecimiento de enterobac‐

Prueba de Escherichia coli

Caldo MacConkey Fomento del crecimiento E. coli

Agar MacConkey Promotor de crecimiento + Indicativo E. coli

Salmonella enterica subsp. enterica

https://online.uspnf.com/uspnf/document/1_GUID-A68DE4C6-A898-490B-8198-C9FE1ADF1B60_1_en-US?source=Search Results&highlight=62 2/12

Prueba / Medio Propiedad Prueba de cepas

Salmonella enterica subsp. enterica

Prueba de Pseudomonas aeruginosa

Agar cetrimida Fomento del crecimiento P. aeruginosa

Prueba de Staphylococcus aureus

Agar sal manitol Promotor de crecimiento + Indicativo S. aureus

Medio reforzado para clostridios Fomento del crecimiento Cl. esporogenes

Agar Columbia Fomento del crecimiento Cl. esporogenes

Prueba de Candida albicans

Caldo Sabouraud Dextrosa

Agar dextrosa Sabouraud

Promotor de crecimiento + Indicativo

Prueba de propiedades promotoras del crecimiento, medios líquidos

Prueba de propiedades que promueven el crecimiento, medios sólidos

Prueba de propiedades inhibidoras, medios líquidos o sólidos

Prueba de propiedades indicativas

Idoneidad del método de prueba

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Preparación de muestras y preincubación

Tabla 2. Interpretación de los resultados

Resultados para cada cantidad de producto

0,1 ml 0,01 ml 0,001 ml mL de producto

Preparación de muestras y preincubación

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Preparación de muestras y preincubación

Preparación de muestras y preincubación

Digerido de Soja-Caseína . Incubar a 30 ° a 35 ° durante 18 a 24 horas.

Preparación de muestras y preincubación

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Preparación de muestras y tratamiento térmico

Preparación de muestras y preincubación

SOLUCIONES Y MEDIOS DE CULTURA RECOMENDADOS

Solución tamponada de cloruro de sodio y peptona pH 7,0

Dihidrógeno fosfato de potasio 3,6 g

Fosfato de hidrógeno disódico dihidrato 7,2 g (equivalente a 0,067 M de fosfato)

Cloruro de sodio 4,3 g

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Solución tamponada de cloruro de sodio y peptona pH 7,0

Peptona (carne o caseína) 1,0 g

Agua purificada 1000 ml

Esterilizar en autoclave mediante un ciclo validado.

Caldo digerido de soja y caseína

Digerido pancreático de caseína 17,0 g

Digerido Papaico de Soja 3,0 g

Cloruro de sodio 5,0 g

Fosfato de hidrógeno dibásico 2,5 g