Laboratorio de Bioquímica Celular y de los Tejidos I Hipótesis.
Profesor: M. En C. Alvaro Bouret Araiza
PRINCIPALES CONSTITUYENTES QUÍMICOS DE LA MATERIA VIVA
Planteamiento del problema.
El principal constituyente de la materia viva es el agua, seguido
de las proteínas, lípidos y minerales. Por otro lado uno de los
principales organismos a estudiar en Bioquímica celular y de los
tejidos es la rata, dado a su parecido con los órganos del ser
humano, sus bajos costos y facilidad de reproducción. Por lo cual
se contemplarán el hígado, cerebro, corazón, riñón y bazo, es
decir, los órganos vitales de la rata para identificar los
constituyentes anteriormente mencionados, haciendo la
comparación de resultados entre órganos e identificación del
procedimiento necesario para su observación y cuantificación.
Justificación.
La presente investigación aporta nueva información al campo de
estudio, se enfocará en la identificación y cuantificación de los
principales constituyentes químicos de la materia viva (lípidos,
proteínas y minerales) contenidos en el hígado, cerebro, corazón,
riñón y bazo de una rata wistar con un peso aproximado de 200 g
mediante el uso de diversas técnicas, esto debido a que se busca
mostrar a los estudiantes del 4to semestre de la carrera de QFB
el manejo de la rata wistar y sus partes como objeto de
experimentación. También se buscará mostrar a los estudiantes
el uso correcto de las técnicas empleadas (Cuantificación de
húmeda y de cenizas, el método de Liebermann-Burchard, el
método de Lowry) durante esta práctica, ya que estas mismas se
emplearán en prácticas posteriores.
De acuerdo con los datos recabados durante la investigación
previa a la realización de esta práctica del laboratorio,
encontraremos que ciertamente el agua es el constituyente más
abundante en la materia viva, aunque es probable que debido a
la composición, tamaño y función de cada órgano empleado para
la identificación y cuantificación del agua, los resultados
arrojados variarán con respecto a los valores teóricos, pero que
estos se mantendrán dentro del margen de 50-90% de contenido
de humedad. Respecto a las biomoléculas (lípidos, proteínas y
minerales), estas son parte de la estructura básica de la mayor
parte de los tejidos, también desempeñan varias funciones tales
como el metabolismo, la formación de células sanguíneas y la
producción de hormonas. Por lo que de igual manera, no será
una sorpresa observar que no existen variaciones significativas
con respecto al valor teórico (17% para las proteínas, 15 % para
los lípidos y 5% para los minerales), a menos que por
circunstancias externas el roedor a estudiar presente algún
cuadro severo de desnutrición. Por último, tomando en cuenta
que los estudiantes previamente investigaron, estudiaron y
emplearán los métodos de Lowry, de Folch de Lieberman-
Burchard; podrán desarrollar de manera satisfactoria las
habilidades pertinentes con las que posteriormente realizarán
futuras prácticas.
Objetivo general
Identificar y cuantificar los principales constituyentes químicos
de la materia viva mediante el uso del método de lowry para la
cuantificación de proteínas, el método de liebermann-Burchard
para los lípidos, etc., contenidas en los órganos vitales de una
rata wistar.
Objetivos particulares
- Analizar la importancia del agua como el constituyente
más abundante de la materia viva.
- Aprender el manejo de la rata como animal de
experimentación.
- Identificar lípidos y proteínas de diferentes tejidos de la
rata.
- Cuantificar el contenido de minerales en una muestra
biológica
- Comparar los contenidos de proteínas, lípidos y
humedad de diferentes tejidos de la rata.
Antecedentes académicos
¿Cuál es el componente más abundante en los seres vivos?
El agua (1)
1. ¿Porcentaje promedio de agua en el peso húmedo
de un organismo?
Constituye del 60% de la masa de los organismos vivos.(1)
2. ¿Por qué el agua es esencial para la vida?
Interviene en casi todas las reacciones químicas de la célula,ya
que proporciona el ambiente en el cual se desarrolla la mayoría
de la vida en la Tierra. Dado que la mayor parte de las reacciones
ocurre en un medio acuoso, se vuelve indispensable.
Considerando que gracias a su estructura geométrica, se dan las
características necesarias que le permiten formar puentes de
hidrógeno o bien para aquellas sustancias no solubles,
dispersiones coloidales. (1)
Actúa como un agente químico reactivo, en la hidratación,
hidrólisis y oxido-reducción. Es un solvente universal y
termorregulador. (1)
3. ¿Cuál es el segundo componente más abundante en
los seres vivos?
Las proteínas con el 17% de abundancia(1)9.
4. ¿Cuál es la función principal de las proteínas en los
organismos?
Son macromoléculas, formadas por C, H, O, N, S y en algunos
casos fósforo, estas son una fuente esencial de energia y se
encarga de formar, mantener y regenerar los tejidos. (2)
Otra función biológica relevante es la constitución de enzimas.
(1)
.
5. ¿En qué procesos metabólicos participan las
proteínas?
Participa en el anabolismo(fabricar y almacenar) y catabolismo
(destrucción). (3)
Algunos ejemplos de las funciones de las proteínas que
intervienen en el metabolismo son:
● Formación de aminoácidos. (4)
● Constituir estructuras (proteína queratina). (4)
● Regulación con hormonas. (4)
○ Regulación de niveles de azúcar en la sangre y en
la célula ( Insulina)
○ Regulación metabólica (tiroxina )
○ Regula todo el sistema inmunológico
● Contracción muscular (nisina). (4)
 ● Transportar de oxígeno a las células y recoger el CO2 de
las células (hemoglobina). (4)
6. ¿Cómo contribuyen las proteínas a la estructura
celular?
Hablando únicamente de su disposición con la membrana,
podemos definir dos tipos:
● Integrales: Estas forman parte de la membrana
permanentemente. Se dividen en tres grupos: las
transmembrana(destacan la adhesión), la integradas en
una hemicapa y las unidas covalentemente a moléculas
que forman parte de la membrana. (5)
● Asociadas: No forman parte de la membrana
permanentemente y se producen por interacciones
eléctricas. Son más lábiles y pueden abandonar la
membrana fácilmente. (5)
En general, podemos decir que ayudan a la transducción de las
señales, el mantenimiento de la integridad celular, el transporte
intra y extracelular y la comunicación intercelular. (6) Y
clasificar como receptoras, de reconocimiento, enzimas,
proteínas de adhesión, canales, transportadoras, bombas, que
participan en la modificación de las membranas, etcétera. (5)
7. ¿Qué caracteriza a los lípidos y cuál es su solubilidad?
Los lípidos no son cadenas poliméricas. Son anfipáticas, es decir,
posee una parte apolar o hidrófoba y una parte hidrofílica que
está en contacto con el medio acuoso. (8)
Se clasifican en tres grupos según su estructura y composición
molecular: los fosfolípidos, los esfingolípidos y los esteroles. (7)
Funcionan como almacenadores de energia, además de formar la
estructura de la membrana celular.
Son insolubles en agua y solubles en disolventes orgánicos,
como éter, cloroformo, benceno, etc. (8)
8. Menciona los tipos de lípidos comunes y sus
funciones en el cuerpo.
Los más comunes son:
Fosfolípidos: están compuestos por cadenas de ácidos grasos,
fosfato y glicerol. Su función más importante es la formación de
las membranas celulares. También llevan a cabo la digestión de
otras grasas en el intestino delgado.
Colesterol: Forma parte de las membranas celulares; además, es
el precursor de diferentes sustancias, como algunas vitaminas o
esteroides.
Glucolípidos: Su función más importante está relacionada con el
sistema inmune. Se encuentran en la parte externa de la
membrana celular y funcionan como señal para el mismo.
Triglicéridos: Son las moléculas en las que se transforma el
exceso de energía o de azúcares del organismo. Es decir,
formarán las reservas energéticas del mismo.
Esteroides: Se forman por colesterol y hormonas. Desempeñan
funciones reguladoras y activadoras.
9. Para cada biomolécula, mencione en forma breve su
composición, así como su función.
Glúcidos o carbohidratos: se clasifican en monosacáridos,
disacáridos y polisacáridos, compuestos de moléculas de azúcar.
Se utilizan como fuente de energía para el funcionamiento
normal del cerebro y la respiración celular.
Lípidos: Se clasifican en triglicéridos y fosfolípidos. Se componen
de ácidos grasos, glicerol y fosfatos. Sirven para almacenar
energía, construir células y proporcionar aislamiento y
protección.
Proteínas: Los enlaces químicos primarios en las proteínas son
enlaces covalentes llamados enlaces peptídicos, que se forman
entre los aminoácidos. Son los bloques de construcción de
muchas estructuras celulares y realizan funciones metabólicas, al
actuar como enzimas, mensajeros y hormonas.
Ácidos nucleicos: El ADN y el RN se forman por nucleótidos, que
a su vez se conforman por un azúcar (pentosa), una base
nitrogenada y un grupo fosfato. Llevan la información genética
en todos los seres vivos y los virus.
10. ¿Cuál es la función de los minerales en los
organismos?
Los minerales son nutrientes indispensables para diferentes
funciones del organismo como la formación de huesos y células
sanguíneas, desarrollo del sistema nervioso, producción de
hormonas y actividad de los órganos.
11. Nombra algunos minerales importantes y sus
funciones específicas.
Sodio:Necesario para un equilibrio adecuado de líquidos, la
transmisión nerviosa y la contracción muscular.
Cloruro:Necesario para un equilibrio adecuado de líquidos, ácido
estomacal.
Potasio: Necesario para un equilibrio adecuado de líquidos, la
transmisión nerviosa y la contracción muscular.
Calcio: Importante para la salud de los dientes y los huesos;
ayuda a relajar y a contraer los músculos; importante en el
funcionamiento nervioso, la coagulación de la sangre, la
regulación de la presión arterial, la salud del sistema inmunitario.
Fósforo: Importante para la salud de los dientes y los huesos; se
encuentra en todas las células; parte del sistema que mantiene el
equilibrio acidobásico.
12. ¿Qué son los ácidos nucleicos y cuáles son los tipos
principales?
Los ácidos nucleicos son biomoléculas que llevan la información
genética en todos los seres vivos y los virus. Así, dirigen la síntesis
de las proteínas.
Sus dos tipos principales son el ADN y el ARN.
13. ¿Cuáles son las funciones biológicas de los ácidos
nucleicos?
Una función importante de los ácidos nucleicos implica el
almacenamiento y la expresión de información genómica. El ADN
codifica la información que las células necesitan para producir
proteínas. Un tipo relacionado de ácidos nucleicos, denominado
ácido ribonucleico (ARN) se presenta en diferentes formas
moleculares que cumplen funciones celulares múltiples, que
incluyen la síntesis proteica.
14. ¿Cuál es el papel de los carbohidratos en la dieta y el
metabolismo?
Los carbohidratos suministran energía a todas las células del
organismo. Muchas células prefieren la glucosa, un carbohidrato
simple, como fuente de energía frente a otros compuestos como
los ácidos grasos.
Cuando nuestro cuerpo tiene suficiente energía para mantener
sus funciones, el exceso de glucosa se almacena en forma de
glucógeno, almacenando la mayor parte de este en los músculos
y en el hígado.
. La cantidad de glucógeno en el cuerpo en un momento dado
equivale a unas 4.000 kilocalorías, almacenandose tres cuartas
partes en el tejido muscular y el resto en el hígado.
. Después de un ejercicio prolongado, el glucógeno se consume y
los músculos deben depender más de los lípidos y las proteínas
como fuente de energía.
. El hígado, al igual que el músculo, puede almacenar energía
como glucógeno, pero a diferencia del tejido muscular,
sacrificará su energía de glucosa almacenada hacia otros tejidos
del cuerpo cuando la glucosa en sangre sea baja.

15. ¿Por qué son esenciales los carbohidratos en la

biosíntesis de otras biomoléculas?
Son muy importantes porque nuestro organismo los metaboliza
para producir glucosa, molécula por la que obtiene energía. Son
importantes, además, porque participan en el funcionamiento de
las células, tejidos y órganos.
16. En un esquema, identificar la anatomía de la rata, sus
partes y sus principales constituyentes en
biomoléculas (lípidos, proteínas, etc) . Expresar
porcentajes de contenido y peso por 100 gramos. Valdivieso R. Anatomía Rata (ignoren lo rojo)

C. Informe ejemplo de Rata

17. Cómo se determina la humedad en una muestra
biológica (método y fundamento) y fórmula del
cálculo del contenido de humedad.
El contenido de humedad afecta a la capacidad de
procesamiento, al período de conservación, a la usabilidad y a la
calidad del producto. Por lo general, el contenido de humedad se
determina mediante un método termogravimétrico, es decir, por
pérdida por secado, mediante el cual se calienta la muestra y se
registra la pérdida de peso debida a la evaporación de la
humedad.
Mettler-Toledo international. Determinación del contenido de - Pesar 0,1 mg en una cápsula previamente calcinada y
humedad tarada (m0) entre 2 a 5 g de muestra homogenizada
(m1). Si la muestra contiene abundante agua pesar una
cantidad que contenga de 3 a 5 g de sólidos, mantenerla
sobre un baño de vapor hasta sequedad aparente.
- Proceder a precalcinar previamente la muestra en placa
calefactora, evitando que se inflame, luego colocar en la
mufla e incinerar a 550 °C hasta cenizas blancas o
grisáceas.
- Preenfriar en la mufla apagada y luego traspasar a
desecador y pesar a temperatura ambiente. Las cenizas
que contienen manganeso o hierro pueden presentar
cierta coloración.
- Enfriar en desecador y pesar (m2).

El fundamento es el método se basa en la destrucción de la

materia orgánica presente en la muestra por calcinación y
determinación gravimétrica del residuo.

Conex. Determinación de la humedad de las arenas

18. Cómo se determina el contenido de cenizas en una
19. Cómo se identifican y cuantifican lípidos mediante el
muestra biológica (método y fundamento) y fórmula
método de Liebermann-Burchard, escribir su
del cálculo del contenido de cenizas.
fundamento (de la reacción) en una muestra
Método
biológica (método y fundamento) y fórmula del
- Efectuar el análisis en duplicado.
cálculo del contenido de lípidos.
- Para granos, fideos moler la muestra y pasar por tamiz
de 20 mesh, muestras de pan trozar en pequeños
fragmentos manualmente. Determinación lipídica. Extracción lipídica
- Si la muestra contiene abundante agua pesar una Fundamento:
cantidad que contenga de 3 a 5 g de sólidos, mantenerla Se aplicó el método de Folch. La mezcla cloroformo:metanol 2:1 extrae el
sobre un baño de vapor hasta sequedad aparente. total de lípidos . La extracción y purificación de lípidos a partir del tejido
animal se desarrolló en dos operaciones: solución obtenida en la extraccción de lípidos según Folch (solución
1) los lípidos fueron extraídos por homogeneización del tejido con la extractiva) y se transfirieron a las pesasustancias de aluminio. Se
mezcla de solventes cloroformo:metanol 2:1 (V/V) y filtrando el colocaron en la estufa a 40 °C por 24 horas y se retiraron
homogenato; cuidadosamente mediante pinzas, introduciéndoseles en el
2) el filtrado, el cual contiene los lípidos de los tejidos acompañado de desecador por 24 horas. Se procedió a pesar (se trabajó con un
sustancias no lipídicas, es liberado de éstas por adición de un quinto blanco). El incremento en el peso corresponde a los lìpidos totales
del volumen del extracto con agua o adición de sales minerales. Un contenidos en los 5 mL del extracto.
sistema bifásico es obtenido. La fase superior fue desechada. La fase Fórmula:
inferior contiene esencialmente el total de lípidos de los tejidos.
Método:
1) Extracción de los lípidos. Se tomó aproximadamente 1 g de tejido (al
0.1 mg) y se colocó en el homogenizador, se adicionó un pequeño
volumen de mezcla solvente, se fue homogenizando, luego se llevó
hasta una dilución de 15 mL (la mezcla solvente estuvo fría y la
homogenización se hizo en hielo). El tiempo de homogenización fue
de 3 - 5 minutos. Luego se pasó a la probeta provista de un embudo
con papel de filtro. Se filtró. Se tomó 2 mL de la mezcla de solventes
para enjuagues del homogenizador y papel de filtro.
2) Lavado del extracto. El volumen del extracto crudo total fue medido
en la probeta y se adicionó un quinto del volumen de FSSPSS. Se
homogenizó con la bagueta, ésta fue lavada con 0.5 mL de FISP. Se
dejó reposar, tapando la probeta con papel de aluminio y se observó
separación clara de dos fases. La fase superior fue retirada por medio
de la pipeta Pasteur, tanto como fue posible. La fase inferior fue
lavada (3 veces), con FSSP (1.5 mL, por vez) sin enturbiar la fase
inferior, se lavó la pared interna de la probeta y la interfase, dejando
fluir suavemente de la pipeta, así que los fluidos del lavado fueron
colectados en la parte alta de la fase inferior sin ninguna mezcla de 20. Norma de RPBI. Estudiar e imprimir.
las dos fases, la probeta fue rotada suavemente para asegurar el
NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-1995, Que establece
mezclado del fluido de lavado con la fase superior remanente y la
mezcla fue retirada. A la fase inferior se adicionó 0.5 mL de metanol, los requisitos para la separación, envasado, almacenamiento,
se homogenizó y se lavó la probeta y bagueta con 1 mL de recolección, transporte, tratamiento y disposición final de los
cloroformo, se homogenizó y se pasó al vial graduado a 12 mL. Para residuos peligrosos biológico-infecciosos que se generan en
las determinaciones se tomaron los siguientes volúmenes: 5 mL de la establecimientos que presten atención médica.
solución extractiva para la determinación de lípidos, 0.3 mL para 21. Identificar los principales instrumentos del estuche
fosfolípidos, 1 mL para colesterol y 1.5 mL para triglicéridos. de disección.
3) D.L. Método gravimétrico. De cada muestra se midió 5 mL de la
 Preguntas 1 a 4. Micocci L. Química biológica. [Internet].Universidad
Nacional del Litoral. 2018. [Citado 2023/09/05]. Disponible en:
https://acortar.link/PO6J3B

Pregunta 4. Proteínas: qué son, qué funciones tienen y cuántas

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https://acortar.link/mpYoqW
Pregunta 5.Hirsch L. Metabolismo. [Internet]. Nemours kidshealth.
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Pregunta 5. Proteínas [Internet]. binasss. [Citado 2023/09/05].

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Pregunta 7. Megías M, Molist P, Pombal MA. Lípidos. [Internet]. Atlas
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Pregunta 7. Lípidos. [Internet]. Junta de Andalucía. [Citado
2023/09/05]. Disponible en:
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22.Leer la práctica del manual y elaborar su Pregunta 8 y 12. Martin E. Lípidos: que son, tipos y funciones.
[Internet]. Mejorconsalud. 2023. [Citado 2023 09 05]. Disponible en:
diagrama de flujo. https://acortar.link/wFeLPb
Pregunta 9. Biomoléculas. [Internet]. Studysmarter. [Citado 2023 09
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Referencias
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2023 09 05]. Disponible en: https://acortar.link/cdUOOJ
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https://acortar.link/uYOx6q.
Pregunta 14. Hidratos de carbono: Cuál es su función en nuestro
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https://acortar.link/GTHUtX
Pregunta 15
Alicorp. La importancia de los carbohidratos [Internet]. Alicorp; 2023:
Disponible en: https://acortar.link/icdAeE
Pregunta 16
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C. Informe ejemplo de Rata [Internet]. Scribd.; 2020: Disponible
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Pregunta 17
Mettler-Toledo international. Determinación del contenido de
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https://www.mt.com/mx/es/home/applications/Laboratory_weighing/
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Pregunta 18
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Disponible
https://www.ispch.cl/sites/default/files/documento_tecnico/2010/03/
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Pregunta 19
Clavo V, Luisa L, Ramirez V, Sandra M . Composición química de
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Disponible en:
https://sisbib.unmsm.edu.pe/bibvirtualdata/tesis/salud/ramirez_v_s/
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Pregunta 21
Beltrán M.Elementos del estuche de disección [Internet]. Scribd.; 2020:
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https://www.studocu.com/es-mx/document/universidad-autonoma-
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Universidad Quetzalcoatl Irapuato. Estuche de disección [Internet].
Slideshare; 2017: Disponible
en:https://es.slideshare.net/LuisMcookies/estuche-de-diseccin
Pregunta 1 (cuestionario)
Pulido GTA. Importancia del agua para el funcionamiento de nuestro
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Disponible en: https://tinyurl.com/29ctsguu
Pregunta 2 (cuestionario)
Minerales [Internet]. Fao.org. [citado el 7 de septiembre de 2023].
Disponible en: https://tinyurl.com/22o5lafd
Pregunta 3 (cuestionario)
Arenas CEM. TEJIDO ADIPOSO [Internet]. Unam.mx. 2010 [citado el 7 de
septiembre de 2023]. Disponible en: https://tinyurl.com/29n8r5lt
Pregunta 4 (cuestionario)
Enrique ML, Leonel LC. ANÁLISIS Y APLICACIÓN DE LAS EXPRESIONES
DEL CONTENIDO DE HUMEDAD EN SÓLIDOS [Internet]. Cenam.mx. 2010
[citado el 7 de septiembre de 2023]. Disponible en:
https://tinyurl.com/2zmfprvo
Pregunta 5 (cuestionario)
Fernández HZ. Análisis químico de los alimentos métodos clásicos
[Internet]. Editorial Universitaria; 2020. Disponible en:
https://tinyurl.com/225ehvc9
Pregunta 6 (cuestionario)
Macronutrientes: carbohidratos, grasas y proteínas
[Internet]. Fao.org. [citado el 7 de septiembre de 2023].
Disponible en: https://tinyurl.com/yxmt29ua
Cuestionario
1. ¿Cuál es la importancia biológica del agua en un ser vivo?
La importancia de esta dentro de la célula es que ayuda al
transporte de nutrientes a la célula, colabora en el proceso
digestivo, expulsa desechos de ella y ayuda a la regulación dentro
de la célula.
2. ¿Cuál es la función de cada uno de los minerales presentes en
una muestra?
El sodio, el potasio y el cloro están presentes como sales en los
líquidos corporales, donde tienen la función fisiológica de
mantener la presión osmótica y el hierro es el encargado del
transporte de oxígeno.
3. ¿En qué tejido esperaría encontrar mayor cantidad de lípidos?
¿Por qué?
En el tejido adiposo, ya que está constituido por los adipocitos (o
células adiposas) que son las que se encargan de almacenar los
lípidos.
4. ¿Cómo calcula el % de humedad de una muestra?
5. ¿Cómo calcula el % de cenizas de una muestra?
6. Para cada biomolécula, mencione en forma breve su
composición, así como su función.
-Carbohidratos: compuestos de carbono, hidrógeno y oxígeno.
Sus funciones principales son las de generación y
almacenamiento de energía y de soporte para la célula.
-Lípidos: Están compuestos de cadenas largas de carbonos con
un ácido carboxílico unido a la cadena. Tiene funciones como
combustible, almacenador de energía, moléculas señalizadoras y
como principal componente de la membrana celular.
-Proteínas: Están compuesto de aminoácidos (carbonos unidos a
un grupo carboxílico). Su función principal es la de ser enzimas,
las cuales catalizan todas las reacciones químicas en los sistemas
biológicos.
-Ácidos grasos: tienen una base nitrogenada (purina o
pirimidina), una pentosa, ribosa o desoxirribosa (depende) y un
grupo fosfato y su función principal es que constituyen el
material genético de los organismos y son necesarios para el
almacenamiento y la expresión de la información genética.

Método del manual
1. Preparación de la muestra.
a. Sacrificar la rata Wistar de 200 g de peso mínimo, mediante anestesia
con cloroformo en un frasco cerrado.
b. Colocar la rata muerta en la tabla de disección y amarrarle cada una
de sus patas a las esquinas correspondientes de la tabla de disección
(Fig.1A).
c. Con la ayuda del estuche de disección; disectar los siguientes
órganos: hígado, cerebro, corazón, riñón y bazo (Fig.1B).
d. De cada órgano tomar cinco porciones:
- Dos de aproximadamente 0.3 g que serán colocadas
respectivamente en dos crisoles marcados, puestos
previamente a peso constante para determinar cenizas.
- . Dos porciones, también de aproximadamente 0.3 g que se
colocan en charolas de papel aluminio marcadas y
previamente a peso constante, para determinar humedad.
- La última porción, de aproximadamente 1 g, será colocada
directamente en un mortero para la extracción e
identificación de lípidos y proteínas
2. Cuantificación de humedad.
a. Pesar las dos porciones de tejido colocadas en las respectivas charolas
de papel aluminio (previamente puestas a peso constante).
b. Determinar el peso exacto de la muestra por diferencia de pesos; es
decir, el peso de la charola de aluminio con muestra menos el peso de
la charola de aluminio sin muestra.
c. Agregar a cada muestra 1 mL de etanol 96°.
d. Colocar en la estufa a 100-110° C durante 90 minutos, enfriar en
desecador y pesar.
e. Calcular el % de humedad.
3. Cuantificación de cenizas.
a. Calcinar las muestras colocadas en los crisoles con la flama de un
mechero Fisher (Figura 2), hasta que se obtengan cenizas blancas o
grises y sin residuos visibles de carbonización (si se observan puntos
negros, se humedecen con unas gotas de peróxido de hidrógeno y se
vuelven a calcinar).
b. Colocar los crisoles en la mufla y calentar hasta alcanzar una
temperatura de 500° C, mantenerlos a esta temperatura un mínimo
de 40 minutos o hasta que las cenizas estén completamente blancas o
grises, de no ser así humedecer nuevamente con peróxido de
hidrógeno y volver a calcinar en la mufla.
c. Enfriar los crisoles y pesar.
d. Calcular el % de cenizas*.
De manera optativa pueden determinarse en las muestras la presencia de
cationes sodio, amonio, potasio y calcio y aniones sulfuros, cloruros, yoduros,
cianuros y fosfatos.
4. Identificación de Lípidos y Proteínas.
a. Triturar severamente con arena tratada o con vidrio molido la
porción de muestra que fue colocada en un mortero.
Agregar sobre la muestra 10 mL de cloroformo-metanol 2:1 v/v.
b. Homogeneizar y vaciar en un vaso de precipitados pequeño. Agregar
otros 5 mL al mortero, de cloroformo-metanol 2:1 v/v con la finalidad
de lavar los restos de tejido, homogenizar y colocar en el mismo vaso.
Pasar la mezcla a tubos y centrifugar a 3000 rpm durante 5 minutos.
c. Separar los sobrenadantes en un vaso de precipitados de 50 mL
limpio.
d. Agregar 10 mL de agua destilada al vaso de los sobrenadantes y dejar
reposar 10 minutos. Con esto se separarán la fase clorofórmica
(lípidos), de la fase acuosa (proteínas).
e. Identificación de proteínas.
Tomar una alícuota (1 mL) de la fase acuosa y determinar proteínas según el
método de Lowry utilizado en la práctica de curva estándar.
f. Identificación de lípidos.- Tomar una alícuota de la fase clorofórmica
(1 mL) e identificar colesterol según el método de Liebermann-
Burchard: añadir 15 gotas de anhídrido acético al tubo; mezclar, dejar
 enfriar y finalmente añadir 5 gotas de ácido sulfúrico concentrado.
Observar la coloración de la reacción.

Nota: Esta reacción es altamente exotérmica por lo que se debe efectuar con
guantes y lentes en una campana de extracción
Propiedad Glucógeno almidón EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE
Exper Experim
Soluble en agua Si es soluble No es soluble
Sacrificar y Realizar nuevamente las
Tipo de enlace enlaces α-1,4 y α-1,6 enlaces α-1,6
Diseccionar y Transcurrido el Experim
Monómero glucosa glucosa Cortar la porción Agregar 3 gotas de
Colocar
Estructura polímero ampliamente presencia de la amilosa y Colóquelos en 80
Para la Hidrólisis
molecular ramificado de alfa-d- la amilopectina.
Pasar el tejido a 0.5 En 2
glucosa.
0.5
Colocar el aña mL aña
aña 0.5
¿posee altamente ramificada altamente ramificada que En 2 tubos En 2 tubos
Acidifique
ramificaciones? se asemeja a un árbol. * Tomar 2 mL
Disolver una
Filtrar en caliente del extracto y
Coloración frente al rojo o marrón-rojizo azul o azul-negro Dejar secar a
Agregar al filtrado agregar 3 gotas
yodo de la Desechar el
estructura intacta Dejar reposar de HCl calentar a
Sin resuspender,
Coloración frente al azul o azul-negro No produce color
yodo de la
estructura
hidrolizada
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