UNIDAD 1.
HISTOLOGIA Y SU METODO originan por división de otras células y que el proceso se origina enel
DE ESTUDIO
Tema 1. Introducción a la histología
Objetivo terminal: Destacar la importancia del estudio de la
histología.
DEFINICIÓN DE HISTOLOGÍA
De acuerdo a la traducción literal histología significa el estudio del
tejido. Deriva del griego histos: tejido de telar y logos: estudio o
conocimiento de.
Las primeras investigaciones histológicas fueron posibles en el año
1600, cuando se incorporó el recién inventado microscopio a los
estudios anatómicos. La anatomía, que es el estudio de la forma y
estructuras de los organismos vivos, comienza a dividirse
gradualmente en dos ramas:
 Anatomía macroscópica: que comprende el estudio de las
estructuras visibles a simple vista.
 Anatomía microscópica: la cual requiere el uso del microscopio.La
anatomía microscópica incluye las siguientes ciencias:
 Citología: Estudia la estructura microscópica de las células.
 Histología: Estudia la estructura microscópica de los tejidos.
 Organología: Estudia la estructura microscópica de los órganos.
HISTORIA DE LA HISTOLOGÍA
El fundador de la histología fue Marcelo Malpighi (1628-1694). En
el año 1665, Robert Hook estudió el tejido vegetal en cortes de
corcho y observó que el tejido vegetal estaba formado por pequeñas
cámaras a las que denominó célula, también fue quien desarrolló el
primer microscopio compuesto y es a partir de este que los avances
tecnológicos lograron diseñar los más modernos microscopios usados
en la actualidad. Bichat a finales de 1700, introduce el término tejido.
Brown en el año 1833, descubre el núcleo celular. Los adelantos
tecnológicos conducen al desarrollo de la generalización más básica
de la ciencia la “Teoría Celular”, que fue desarrollada por Schleiden
(1838), para el reino vegetal y por Schwann (1839), para el reino
animal y no es más que el reconocimiento de que la célula es el
elemento fundamental del organismo, al que, en última instancia se
deben trasladar todos los procesos vitales y que las plantas y los
animales son agrupaciones de estas unidades vivas potencialmente
independientes. Remak en el año 1852, descubrió que las células se
núcleo. Virchow (1852) confirma este hallazgo en la famosa teoría
“ovnis cellula e cellula” (toda célula se origina de otra). Koelliker en
el mismo año, establece la clasificación de los cuatro tejidos
fundamentales, es decir, tejido epitelial, tejido conectivo, tejido
muscular y tejido nervioso. En el año 1932, Knoll y Ruska construyen
el primer microscopio electrónico.
OBJETIVOS DE LA HISTOLOGÍA
 Comprender la estructura de las células, tejidos y órganos a
nivel microscópico incluyendorelaciones tridimensionales
entre sus componentes bioquímicos.
 Comprender la relación entre la subestructura y funciones
normales de las células, tejidos y órganos.
 Establecer una base para el aprendizaje de la histología,
relación entre las estructuras anormales de tejidos y
órganos, y los defectos funcionales.
 Proporcionar una base para el estudio de los tejidos y órganos
enfermos.
En base a lo expuesto, la histología ocupa un lugar central entre la
educación y la investigación médica. Al explicar las interrelaciones
entre células, los tejidos y la estructura y composición molecular de
los órganos, la histología representa el nexo de unión entre la
bioquímica, la fisiología y la genética por un lado, y los procesos
patológicos y la clínica por el otro lado.
COMPONENTES QUÍMICOS ELEMENTALES DE LA
CÉLULA
Las estructuras microscópicas son una ordenación concreta de los
componentes químicos, los mismos se dividen en inorgánicos, los
cuales son agua y sales minerales, y orgánicos que incluyen los
carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
De los elementos de la tabla periódica sólo una veintena conforman
a los seres vivos y de acuerdo al porcentaje de átomos en la materia
viva se clasifican en tres grupos:
 Primer grupo. Incluye carbono (C), hidrógeno (H),
nitrógeno (N) y oxígeno (O2). Son indispensables para la
formación de carbohidratos, proteínas, lípidos y ácidos
nucleicos. Comprenden entre el 2 y 60% de la composición
 celular.
 Segundo grupo. Son sodio, potasio, cloruro, los cuales
forman las soluciones salinas; magnesio, calcio intervienen
como elementos indispensables en ciertas reacciones
enzimáticas; fósforo participa en la transferencia de energía
y azufre interviene en la formación de los enlaces peptídicos
en las proteínas. Este grupo representa entre el 0,02-0,1% de
los componentes de la materia viva.
 Tercer grupo. Corresponde a boro, silicio, vanadio,
manganeso, hierro, cobalto, cobre, zinc y molibdeno. Son
indispensables para el funcionamiento de las enzimas.
Componentes inorgánicos
 Agua
Es el mayor componente de la célula, representa el 70-95% del
peso de la célula. El agua es indispensable dado a que casi todas las
reacciones químicas y, en consecuencia, las actividades celulares,
ocurren en medio acuoso. Esto se debe a una de las propiedades más
importantes y básicas del agua, la capacidad de actuar como solvente
de sustancias con cargas y polares, lo cual, a su vez, se relaciona con
el pequeño tamaño de la molécula de agua y su fuerte polaridad.
Se puede considerar al agua como un dipolo, puesto que su
molécula posee un reparto asimétrico de las cargas. El agua se
encuentra en la célula en dos formas: estado libre y ligada.
 Estado libre. Interviene en el metabolismo y desempeña un papel
de:
Solvente estable:
La solubilidad del agua está dada por su polaridad y aptitud de
ligar el H+, así por los grupos funcionalesde la molécula a disolver.
Los grupos funcionales miscibles en agua son:
Hidroxilo (OH): alcoholes (metílicos, etílicos, propílicos y glicerol).
Carboxilo (COOH): ácidos (propiónico, acético, fórmico, entre
otros).
Cetónicos (CO): cetonas.
Aldehidos (CHO): acetoaldehidos.
Amino (NH2): aminas (metilaminas, etilaminas).
Amido (CONH2): amidas (tormamida, acetamida, entre otros).
Medio ionizante:
Provoca la disociación de las sustancias llamadas electrolitos
débiles (COOH y NH2, son los más abundantes), que liberan o
aceptan un protón H+ en medio acuoso.
 Estado ligado. Representa sólo el 5% del total del agua, está
ligada a las proteínas donde cumplefunciones de constitución.
 Sales minerales
Las sales minerales están presentes en el medio intracelular como en el
medio extracelular; sin embargo, susconcentraciones difieren.
Las sales minerales se consiguen combinadas a carbohidratos,
lípidos o proteínas, o bien, libres. En este caso,la mayor parte se
encuentran en estado ionizado por el agua en aniones y cationes.
Es especialmente característico que la célula posea una elevada
concentración de potasio y magnesio, mientras que el sodio, calcio
y cloro están más elevados en el líquido extracelular. La mayor
concentración deaniones celulares corresponde al fosfato (tabla
1).
Las sales minerales tienen como función:
 Mantenimiento de la presión osmótica: las diferencias de las
concentraciones iónicas tanto dentro como fuera de la célula
permiten mantener una misma presión osmótica intra y
extracelularmente.
 Mantenimiento del pH: los iones H2PO4 - y HPO4= constituyen
un sistema tampón que estabiliza el pH dela sangre y líquido
tisular.
 Mantenimiento del equilibrio ácido-básico.
 Actúan como cofactores imprescindibles de procesos enzimáticos.
Componentes orgánicos
Todas las sustancias orgánicas contienen carbono y éstas comprenden
los hidratos de carbono, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
 Hidratos de carbono
Son moléculas formadas por C, H y O, que tienen la función de fuente
de energía y de componente estructural para la célula. Se clasifican en
monosacáridos, disacáridos y polisacáridos.
De los monosacáridos las pentosas ribosa y desoxirribosa son las más
importantes, dado a que forman parte de los ácidos nucleicos. La
hexosa glucosa, es la principal fuente de energía de la célula. También
son hexosas importantes la galactosa, que forma parte del disacárido
lactosa y la fructosa componente de la sacarosa.
Los disacáridos se forman por la unión de dos monosacáridos con
eliminación de una molécula de agua. Los más importantes son la
sacarosa, es el azúcar común que se acumula en los vegetales, y la
lactosa, es el azúcar de la leche, que se sintetiza y secreta por las
células de las glándulas mamarias.
Los polisacáridos se forman por la unión de muchas moléculas de
monosacáridos. El de mayor importancia es el glucógeno formado por
varias moléculas de glucosa y representa una sustancia de reserva
energética de la célula animal, se puede detectar en numerosos tejidos
y órganos, no obstante, la mayor parte de él se encuentra en las fibras
musculares y hepáticas.
Los polisacáridos pueden formar combinaciones con lípidos,
denominándose, glucolípidos, los cuales intervienen en la
construcción de las membranas celulares, o con proteínas como por
ejemplos glucoproteínas, que forman parte de las membranas
celulares y son componentes de las secreciones de muchas células; y
los glucosaminoglucanos, componentes esenciales del tejido
conectivo. A diferencia del glucógeno, el glucosaminoglucano incluye
más de un tipo de monosacárido en el polisacárido.
 Lípidos
Representan un grupo heterogéneo de sustancias con la característica
común fundamental de ser pocos solubles en agua, pero muy solubles
en solventes orgánicos (alcohol, éter, benceno y xileno).
Los lípidos se encuentran en la célula como reserva energética y
componente estructural, bajo la forma de membrana. Los lípidos se
clasifican en lípidos simples y complejos.
Los lípidos simples están formados por la combinación de un alcohol
y un ácido graso. Los más importantes son los triglicéridos y su
función principal es de depósito de energía concentrada,
acumulándose como gotas en las células, y el esteroide colesterol, que
compone las membranas celulares y también interviene en la
formación de distintas hormonas, entre ellas, las hormonas sexuales.
Los lípidos complejos son ésteres de ácidos grasos y alcohol, que
además contienen una base aminada y ácido fosfórico. Los
fosfoaminolípidos son un grupo importante, dado a que se encuentran
extensamente distribuidos, entre ellos se destacan las lecitinas, es un
componente de las membranas celulares y las esfingomielinas forman
parte de la capa de mielina de las fibras nerviosas.
 Proteínas
Son polipéptidos formados por 50 o más aminoácidos. Un polipéptido
es un polímero formado por aminoácidos que se unen covalentemente
unos a otros en secuencia mediante enlace peptídico.
Las proteínas tienen un importante rol en la estructura y función de las
células y el organismo como unidad. Desde un punto de vista
estructural, forman parte de moléculas estructurales de las células,
estructuras extracelulares como las fibras de colágeno que
contribuyen a la fuerza de tracción de tejidos como tejido conectivo.
Por otra parte, las proteínas forman enzimas, anticuerpos y hormonas.
Juegan un papel importante en el metabolismo celular, ya que la
mayoría de las reacciones químicas son catalizadas por enzimas.
 Ácidos nucleicos
Son macromoléculas con importancia biológica esencial, dado que las
características hereditarias tienen su base química en el ADN. Existen
dos tipos ADN, presente en el núcleo y ARN, se sintetiza en el
nucléolo y pasa al citoplasma. Las macromoléculas están formadas
pornucleótidos, cada una compuesta por una base nitrogenada, una
pentosa y ácido fosfórico.
 PROTOPLASMA
Estos componentes bioquímicos, orgánicos e inorgánicos, forman la
sustancia viva denominada protoplasma, y la integración de las
funciones de estos componentes le otorgan al protoplasma las
propiedades de la vida que señalan las funciones de la célula:
Absorción. Es la capacidad de la célula de captar sustancias del
medio entorno.
Secreción. Ciertas células tienen la capacidad de transformar las
sustancias absorbidas en productos específicos, para luego ser
eliminados bajo la forma de secreción.
Excreción. Es la capacidad de las células de eliminar el producto de
desecho de sumetabolismo.
Irritabilidad. Es la capacidad de las células de reaccionar ante un
estímulo. Esta propiedadestá más exacerbada en las células nerviosas.
Conductividad. Es la capacidad de las células de transmitir un
impulso.
Contractilidad. Es una capacidad especial de las células musculares,
donde se acortan en unadirección determinada, como reacción a un
estímulo.
Respiración. Se refiere a la respiración celular donde la célula
produce energía a través de la utilización del oxígeno absorbido en la
oxidación de nutrientes.
Tabla 1. Concentración en miliequivalentes por litros de agua de los diferentes iones en los medios intra y extracelular
IÓN
POTASIO
SODIO
CALCIO
MAGNESIO
CLORO
BICARBONATO
FOSFATO
SULFATO
Tema 2. Métodos histológicos
Objetivo terminal: Describir los diferentes métodos de
estudios histológicos.
MICROSCOPIO
Existen dos tipos de microscopios los microscopios ópticos de
luz y los microscopios electrónicos.
Propiedades de las lentes
El poder de resolución es el factor más significativo de una
buena imagen, el mismo se definecomo la menor distancia que
debe existir entre dos puntos del objeto para poder visualizarse
por separados. El poder de resolución determina la calidad
(claridad y mayor riqueza en detalles) de la imagen y depende
de la longitud de onda de la luz empleada y la apertura
numérica del objetivo y condensador.
El aumento es el producto de la multiplicación del aumento del
objetivo por el del ocular, estapropiedad de la lente permite
amplificar el tamaño del objeto en estudio.
La apertura numérica (NA): Es una medida de la capacidad
del microscopio de agrupar las refracciones de los rayos de luz
producidos por los pequeños detalles de la muestra y depende
del índice de refracción en que está trabajando la lente y la
Reproducción. La célula tiene la capacidad de renovarse por medio
del crecimiento y división. El crecimiento está limitado a la síntesis de
material celular, mientras que la división celular es el origen de una
célula a partir de otra preexistente.
MEDIO INTRACELULAR MEDIO EXTRACELULAR
120
145
30
105
10 28
98
20
mitad del ángulo superior del haz de luz. El valor de NA
aumenta a medida que el objetivo se acerca a la muestra.
El índice de refracción: Es la relación existente entre la
velocidad de la luz en el vacío y el medio que atraviesa. Es una
medida del índice de dispersión de la luz.
Se manejan los índices de tres medios como aire que es 1,
vidrio que es 1,52 y aceite de cedro, 1,515. Este último es el
que se utiliza con los objetivos de inmersión (son aquellos que
requieren de un líquido interpuesto entre la lente frontal y la
superficie de la muestra), dado quees el líquido cuyo índice de
refracción se acerca al vidrio (lentes, cubre y portaobjetos)
estableciendo un medio homogéneo al paso de la luz a través
de la muestra anulando la brusca refracción de los rayos de luz
al pasar del vidrio (cubre y portaobjetos)-aire, y aire- lente del
objetivo, tal como acontece cuando se utilizan los objetivos
secos.
Tipos de microscopios de luz
Microscopio compuesto de campo brillante. Es el de mayor
uso en la práctica. Se caracteriza porque está compuesto por
una serie de lentes y el campo de la muestra está
completamente iluminado. La bombilla es eléctrica con
alambre de tungsteno. Las muestras histológicas tienen que ser
traslúcidas y colorearse para proporcionar contraste.
Microscopio de campo oscuro. Usa un condensador especial,
donde la luz que llega al objetivo es la dispersada por las
pequeñas partículas de la muestra. La muestra se observa como
una estructura luminosa sobre un fondo oscuro. Se usa para el
estudio de estructuras vivas muy pequeñas con poco contraste
con el microscopio de campo brillante, como es el caso del
Treponema pallidum en bacteriología clínica.
Microscopio de contraste de fase. Se fundamenta en las
diferencias de índice de refracción de los componentes
tisulares, que son transformadas en diferencia de intensidad
que son distinguidas por el ojo humano. Posibilita la
observación de muestras sin colorear, por lo que es útil para
estudiar material vivo como los cultivos de tejidos.
Microscopio de interferencia. Tiene el mismo principio que
el microscopio de contraste de fase; sin embargo, permite
cuantificar la masa de los componentes de las células y tejidos,
al comparar un haz de luz de referencia con las diferencias de
fases.
Microscopio de fluorescencia. Usa como fuente de luz la luz
ultravioleta, la cual se hace incidir sobre la muestra marcada
con compuestos fluorescentes (fluorocromos), estos son
excitados y emiten una luz visible al ojo humano. Se utiliza en
las técnicas de inmunufluorescencia o tinciones fluorescentes.
Microscopio de luz polarizada. Se basa en la propiedad de
ciertas estructuras de dividir la luz polarizada (luz que vibra en
un sólo plano) en dos componentes con velocidades distintas
(estructuras birrefringentes o anisotrópicas). Aquellas
estructuras que no dividen la luz polarizada se denominan
isotrópicas. Se utiliza para obtener información respecto a la
estructura a nivel molecular y el estudio de células vivas.
Microscopio de luz ultravioleta. Utiliza luz ultravioleta que
tiene la mitad de longitud de onda (250 nm) que la luz visible
(500 nm), duplicando el poder de resolución. La formación de
laimagen se registra sobre una película fotográfica. Se utiliza
en la detección de ácidos nucleicos que absorben esta luz.
Tipos de microscopios electrónicos
Los microscopios electrónicos emplean como fuente luminosa
un haz de electrones con longitud de onda aproximada de 0,005
nm, elevando notablemente el poder de resolución. Las lentes
son campos electromagnéticos que modifican el trayecto del
haz de electrones en una atmósfera al vacío, al igual como se
refracta el haz de luz visible en las lentes de cristal. La imagen
formada se registra sobre una pantalla fluorescente o película
fotográfica, dado a que el haz de electrones no es visible por el
ojo.
Existen dos tipos de microscopios electrónicos:
Microscopio electrónico de transmisión. Permite la
observación en detalles a escala macromolecular. Los
electrones atraviesan el objeto.
Microscopio electrónico de barrido. El haz de electrones no
atraviesa la muestra, sino que choca contra ella, permite una
gran magnificación de las imágenes.
CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS HISTOLÓGICOS
Los métodos histológicos se clasifican como:
1)Los basados en la observación directa de células y tejidos
vivos.
2)Los que analizan material muerto o inanimado.
En un punto medio se ubican los métodos de centrifugación
que permiten el aislamiento de componentes de células vivas.
VENTAJAS Y LIMITACIONES DE LOS MÉTODOS
HISTOLÓGICOS
Ventajas. Permiten la observación de estructuras
microscópicas y la interpretación de los procesos fisiológicos.
Limitaciones. La obtención de material para estudio
histológico interfiere con el desarrollo de los procesos que se
estudian. Ciertos procedimientos utilizados implican muchas
posibilidades de modificación del aspecto de las estructuras,
debidas a causas técnicas y dejan sin respuestas numerosas
incógnitas referidos a los procesos celulares vitales.
MÉTODOS BASADOS EN LA OBSERVACIÓN DE
CÉLULAS Y TEJIDOS VIVOS
 Coloración vital y supravital
Existen colorantes pocos inocuos que son captados
selectivamente por las células, de modo, que la localización del
colorante permite detectar grupos celulares o sus organelas. En
la coloración vital se inyecta el colorante en el animal vivo. En
la coloración supravital, el colorantese agrega directamente
sobre la célula o tejido luego de haber sido extraído del
organismo, por ejemplo (p. ej.): azul de tripán, carmín de litio,
rojo neutro, verde jano, alizarina.
 Cultivo de tejidos
Permiten los estudios de crecimiento, diferenciación y división
de células. Comprende la aplicación de ciertas técnicas para el
cultivo in vitro de células, tejidos y órganos. Tipos:
Cultivo celular. Es el crecimiento y expansión de las células in
vitro procedentes de la migración o disgregación espontánea,
mecánica o enzimática de un tejido determinado, por ejemplo:
cultivos de células sanguíneas para el estudio del número y
morfología de los cromosomas (cariotipo). Cultivo de células
HeLa para la formación de híbridos (fusión de dos células) en
la elaboración de anticuerpos monoclonales, cuya utilización
tiene gran importancia en la investigación inmunohistoquímica.
Cultivo de oocitos útil en las técnicas de fertilización.
Cultivo de tejidos y órganos. Comprende la transferencia de
tejidos u órganos (embrionarioso maduros) a un medio de
cultivo. Son útiles en los estudios de la clonación donde se
cultiva tejido ovárico o el órgano para la recuperación de
oocitos que sirven como células receptoras.
 Fraccionamiento celular
Se basa en el uso de la fuerza centrífuga para separar los
componentes celulares, de acuerdo con el coeficiente de
sedimentación de cada uno de ellos. Esta técnica permite
determinar la composición bioquímica y funcional in vitro de
las organelas celulares. Se reconocen dos tipos:
Centrifugación deferencial. Es la más usada, previamente, el
tejido es homogeneizado. El sobrenadante es sometido a
fuerzas centrífugas crecientes. Las organelas más densas
precipitan primero. El sobrenadante de cada centrifugación es
sometido a una fuerza centrífuga mayor, separándose así los
componentes celulares.
Centrifugación por gradientes de densidad. En la
centrifugación por gradiente de densidad el homogeneizado se
coloca en una solución cuya concentración aumenta a medida
que se acerca al fondo. Tras la aplicación de una fuerza
centrífuga las organelas se detienen en la profundidad de la
solución que posea su misma densidad. Permite obtener
fracciones más puras.
MÉTODOS BASADOS EN EL ANÁLISIS DE
MATERIAL MUERTO
El método de uso cotidiano en histología es el que permite
obtener preparaciones histológicas permanentes (cortes) para la
observación al microscopio óptico.
El material o espécimen a emplear se clasifica según la
procedencia del tejido y la finalidad de estudio.
Se distinguen dos tipos:
Material histológico. Es toda muestra de tejido obtenida de
animales o individuos sanos, con la finalidad de estudiar la
composición y estructura normal. Los tejidos normales de
humanos se obtienen habitualmente a partir de cadáveres.
Material anatomopatológico. Son muestras que proceden de
animales o individuos enfermos, que son utilizadas para el
diagnóstico o investigación etiológica de la enfermedad. El
material anatomopatológico procede de necropsias, biopsias,
extensiones citológicas o patología experimental.
El conjunto de manipulaciones y métodos empleados para la
confección de preparados histológicos recibe el nombre de
“Procesamientos Histológico de Tejidos” y comprende los
pasos de fijación, inclusión, corte y coloración.
PROCESAMIENTO HISTOLÓGICO DE TEJIDOS
PARA MICROSCOPIA ÓPTICA
FIJACIÓN: El objeto de la fijación es conservar la
composición química y estructural del tejido con la menor
alteración posible con respecto a la que poseía in vivo, por ello
debe realizarse en el menor tiempo posible para evitar la
autólisis y putrefacción.
Según su mecanismo de acción los agentes fijadores se
clasifican en dos grupos:
1)Fijadores por métodos físicos.
2)Fijadores por métodos químicos.
En el primer caso se emplea el enfriamiento por congelación
que evita la autólisis y putrefacción. Los
fijadores por congelación son útiles para estudios de la
morfología y función de tejidos que requieren mantener intacta
la estructura antigénica y actividad enzimática.
En el segundo caso emplea sustancias líquidas que bloquean la
autólisis al desnaturalizar e insolubilizar las proteínas, algunas
evitan también el crecimiento bacteriano. La fijación con
procedimientos químicos puede ser por:
•Inmersión: se sumerge la muestra en el líquido fijador.
•Perfusión: se administra el fijador por vía vascular a los
tejidos y células antes de estos ser extirpados (p. ej.: el
embalsamamiento).
Los fijadores químicos se clasifican de acuerdo a su
mecanismo de acción sobre los tejidos:
•Fijadores por deshidratación del tejido: es eliminada el
agua libre y ligada de las proteínas, estas últimas precipitan.
Este cambio proteico es conocido con el nombre de
desnaturalización. Son ejemplos la acetona, alcohol etílico,
alcohol metílico. Son útiles parael mantenimiento de la
estructura antigénica en los estudios histoquímicos e
inmunohistoquímicos.
•Fijadores por cambios en el estado coloidal de las
proteínas: precipitan las proteínas sin sustraer el agua de los
tejidos, al cambiar el punto isoeléctrico de ellas. Son ejemplos
el ácido acético, ácido crómico, ácido tricloroacético. Se
utilizan para estudios del núcleo, sistema nervioso,
descalcificación ósea.
•Fijadores que actúan por formación de sales con los
tejidos: el agente fijador es un catión, por lo general mercurio
o cromo, o un derivado orgánico como el ácido pícrico. Son
fijadores de acción rápida y provocan un notable
endurecimiento por lo que es recomendable usarlos en mezclas
fijadoras. Son ejemplos el cloruro de mercurio, dicromato de
potasio, ácido pícrico. Son excelentes en la conservación de los
caracteres morfológicos celulares, no disuelven lípidos, ni
glucógeno. Son excelentes mordientes intensificando las
coloraciones nucleares y citoplasmáticas.
•Fijadores por reticularización de las proteínas: se produce
desnaturalización de las proteínas por rotura de los puentes de
hidrógenos, con la formación ulterior de una malla reticular por
asociación entre los grupos químicos desenmascarados por el
líquido fijador. Por lo común el mismo fijador forma nexos de
unión con los grupos químicos contribuyendo con la formación
de la red. En este grupo se encuentra el fijador más usado para
los estudios histológicos en la microscopia óptica; el metálicos, el tejido se lleva al fondo dándole una orientación
formaldehido o formalina al 40%. Es el más barato, preserva determinada, una vez solidificada la parafina se obtiene el
bien las células y tejidos, no endurece mucho, es un buen tejido incluido en un bloque (fig. 1).
desinfectante, produce escasa retracción tisular, es compatible Figura 1. Dibujo
con la mayor parte de las tinciones. esquemático del
procedimiento de inclusión
MEZCLAS FIJADORAS deltejido con parafina
Proceden de la combinación de fijadores simples, los cuales fundida a 56 ºC empleando
pretenden sumar las ventajas decada uno de ellos amortiguando como moldes unas L.
sus inconvenientes. Se clasifican como: Cortes
 Contienen formol: líquido de Bouin, Zenker formol. En la microscopia óptica los cortes deben ser finos oscilando
 No contienen formol: líquido de Zenker. entre 5-10 m de espesor. Elequipo utilizado es el micrótomo
Cuando se utiliza la fijación química es necesario tres pasos que emplea cuchillas de acero inoxidable que proporcionan
previos a la inclusión, de modo de acondicionar al tejido cortes entre 3-10 m. El micrótomo también puede utilizar
extrayéndole toda el agua y sustituirla por un medio que sea cuchillas de diamante que proporcionan cortes de 1-5 m. El
miscible en el medio de inclusión, continuándose por lo tanto criostato es un micrótomo que proporciona cortes más
con la deshidratación, aclaración e infiltración. gruesosentre 10-30 m, y es empleado en el procedimiento de
Deshidratación fijación por congelación (fig. 2).
El objetivo es extraer el agua completamente y sustituirla por Figura 2. Dibujo
alcohol. El tejido es sometido a concentraciones crecientes de esquemático de varios tipos
alcohol hasta 100%. de micrótomos. a) micrótomo
Aclaramiento e infiltración tipo Minot; b) micrótomo de
El objetivo es aclarar el tejido, lo que se logra sustituyendo congelación, utiliza gas
el alcohol por la sustancia aclarante, en la microscopia carbónico y proporciona
óptica se usa el xileno. La infiltración tiene como objeto cortes de 5, 10, 15, 20 m.;
impregnar el tejido con el medio a utilizar en la inclusión, c) criostato, tiene una cámara frigorífica donde se encuentra el
como la parafina para la microscopia óptica. El fundamento micrótomo, utiliza gas freón.
del proceso es que el medio de inclusión ocupe los espacios Montaje
intra y extracelulares ocupados anteriormente por el agua y En la microscopia de luz los cortes se montan en láminas
se logra eliminando la sustancia aclarante. portaobjetos. En el montaje se hace necesario la utilización de
sustancias que permitan fijar el corte al
Inclusión portaobjeto como albúmina, gelatina
La finalidad es proporcionar un bloque rígido que sirva de (fig. 3). Figura 3. Dibujo esquemático
soporte para el tejido en la elaboración de cortes. El medio de del montaje de los cortes. Los cortes son
inclusión fundido a 56 ºC es colocado en unas “L” o envases colocados en un baño de María a 40 ºC,
luego son colocados en láminas portaobjetos, dejándose secar a
37 ºC.
TINCIÓN
Tiene como finalidad destacar los componentes celulares y
tisulares. Los mecanismos de tinción son físicos,
fisicoquímicos e histoquímicos.
Físicos. Se fundamentan en la propiedad de disolución e
impregnación del colorante sobre el tejido.
En la primera el colorante es más soluble en el tejido que en
el disolvente que actúa como transporte, difundiendo el
colorante hacia el tejido. Es ejemplo el Sudán III, que es
utilizado para la coloración de las grasas (fig. 4).
En el segundo caso el colorante por su gran tamaño o
precipitación formando agregados insolubles, queda atrapado
entre las mallas celulares y fibras que constituyen los tejidos.
Entre estos están las coloraciones argénticas para el sistema
nervioso o tejido conectivo reticulares (fig. 5) o las
coloraciones selectivas para fibras de colágeno como las
tinciones tricrómicas de Mallory y van Gieson.
Figura 4. Fotomicrografía de corte de tejido adiposo con la coloración
Sudan III. Las células adiposas se tiñen de color pardo por acción del
colorante Sudan III que por ser más soluble en el tejido difunde hacia
éste.
Figura 5. Fotomicrografía que muestra fibras reticulares (color negro)
teñidas con coloración argéntica. Método de impregnación, basado en la
precipitación de sales de plata sobre estructuras fibrosas.
Físicoquímicos. Se basa en la atracción de cargas opuestas y
en la organización molecular delcolorante. Un ejemplo de
atracción de cargas es el método de tinción empleado en la
rutina como lo es la coloración de hematoxilina y eosina (H-E).
La hematoxilina es el colorante básico que imparte color
violeta y tiñe estructuras ácidas (carga negativa) de la célula
como el núcleo; las estructuras con afinidad por el colorante
básico son denominadas basófilas. La eosina es el colorante
ácido (carga negativa) y se fija a las estructuras básicas (carga
positiva) de la célula como el citoplasma, el color
proporcionado es rosado; las estructuras afines a los colorantes
ácidos se les denominan acidófilas. En la tabla 2 se presentan
las características tintoriales de diversas células y tejidos
cuando se usa la técnica de H-E (fig. 6).
La organización molecular del colorante, se refiere a la tinción
de metacromasia en donde el colorante con un color previo
interacciona con una estructura fuertemente ácida, se organiza
molecularmente conduciendo a un cambio de color. El azul de
toluidina derivado de la anilina esun colorante que expresa este
efecto de metacromasia, el cual al interaccionar con los grupos
sulfatos de los glucosaminoglucanos cambia de su color
original azul a púrpura (fig. 7).
Histoquímicos. Se basa en la reacción química de grupos
específicos. Un ejemplo es la coloración de PAS (Peryodic
Acido Schiff). Se fundamenta en la oxidación de los grupos
hidroxilos por el ácido peryodico con la formación de grupos
aldehidos, el reactivo de Schiff (leucofucsina) reacciona con
ellos formando un producto estable de color rojo magenta (fig.
8). Útil para la detección de carbohidratos como el glucógeno y
glucoproteínas.
MÉTODOS COMPLEMENTARIOS
Citoquímicos e histoquímicos. Son métodos que tienen como
objeto estudiar la estructura química y composición de los
tejidos. Se basan en reacciones químicas específicas de grupos.
Uno de los criterios para que un método sea histoquímico es
que debe conservar la composición química normal, p. ej.:
PAS, reacción de Feulgen para detección de ADN. Figura 8.
Histoquímica enzimática. Comprenden métodos que tienen Fotomicrografía de
corte de intestino
como objetivo demostrar la actividad enzimática, se
delgado teñido con
fundamenta en la especificidad de sustrato. Se usa en la PAS. Las células
detección de fosfatasas alcalina en los neutrófilos que en la caliciformes secretan
clínica es útil en la diferenciación de las leucemias. También el carbohidrato
estos métodos son usados para determinar la actividad mucina, este
osteoblástica, detectar defectos enzimáticos en la biopsia componente se pone
yeyunal. en evidencia cuando
reacciona con el
Métodos inmunohistoquímicos. Son métodos que se basan en
colorante de PAS,
el uso de anticuerpos marcados con enzimas o fluorocromos, distinguiéndose de
con el fin de localizar moléculas específicas, enzimas, color rojo magenta. Por otra parte, la chapa estriada de las células
hormonas, estructuras tisulares, p. ej.: inmunofluorescencia, epiteliales, presentan un glucocálix que contiene polisacáridos y
ELISA. también son PAS positivo
Hibridación in situ. Es una técnica molecular que se basa en
la capacidad de las cadenas de ácido nucleico de unirse entre
sí. Permite demostrar la presencia y secuencias de ácidos
nucleicossobre cortes histológicos o extensiones citológicas.
Dentro de las aplicaciones están detección devirus, antígenos
virales, oncogenes en tejidos normales y neoplásicos.
Figura 6. Fotomicrografía de
tejido epitelial teñido con H-E.
Los núcleos (flechas) se tiñen
de color violeta y el
citoplasma (puntas de flecha)
de color rosado.

Figura 7. Fotomicrografía de
mastocitos teñidos con azul de
toluidina. Los gránulos
citoplasmáticos sonmetacromáticos,
los cuales se hacen evidentes con el
colorante azul de toluidina que los
colorea de púrpura