UNIVERSIDAD CATOLICA BOLIVIANA LABORATORIO DE

CARRERA DE INGENIERIA QUIMICA ANALITICA

QUIMICA Fecha de entrega: 22/04/19
Universitario: Alba Meneses Jhilmer Grupo: Lunes 15:45 – 17:15
Alemán Quispe Iris
Fuentes Zarate Sofia Isabel
Sánchez Fukushima Camila
Vidaurre Ariel Viviana

Informe # 5

ESPECTROFOTOMETRIA UV/VISIBLE

1. INTRODUCCIÓN
El Lugol o solución de Lugol es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico
KI en agua destilada. Fue preparada por primera vez en 1829 y nombrada en honor al
médico francés J.G.A. Lugol.

Este producto se emplea frecuentemente como desinfectante y antiséptico, para la

desinfección de agua en emergencias y como un reactivo para la prueba del yodo en
análisis médicos y de laboratorio (Asalde, 2011).

Esta práctica tiene como objetivo el determinar la concentración del Lugol KI/I2 de
una solución de concentración desconocida, para esto utilizaremos uno de los métodos
más sencillos, accesibles y útiles, la espectrofotometría.

La espectrofotometría es una práctica analítica utilizada para medir cuánta luz absorbe
una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz luminoso pasa
a través de la solución muestra. Este método se ha utilizado para medir velocidades de
reacción catalizadas por enzimas, para medir concentraciones de compuestos,
determinar conformaciones estructurales e interacciones moleculares (Martínez et al.,
2010).

Para que una substancia sea activa en el visible debe ser colorida: el que una substancia
tenga color, es debido a que absorbe ciertas frecuencias o longitudes de onda del
espectro visible y transmite otras más, como ya se había mencionado anteriormente

1
utilizaremos una solución de Lugol, la cual se caracteriza por tener un color
amarillento.
El método de la espectrofotometría se basa en la Ley de Beer-Lambert, esta establece
que cuando pasa luz monocromática por un medio homogéneo, la disminución de la
intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio, lo que
equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida disminuye exponencialmente
al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente (Harris, 2006).
El instrumento que realiza tales medidas es un espectrómetro o espectrógrafo, es un
instrumento utilizado para determinar a qué longitud de onda la muestra absorbe la luz
y la intensidad de la absorción. Aunque varían en el diseño, todos los
espectrofotómetros consisten de una fuente de luz, un selector de longitud de onda, un
contenedor transparente en el cual se deposita la muestra, un detector de luz y el
medidor (Luis et al., 2004).
Las aplicaciones de la espectrofotometría son amplias y variadas y en este informe se
pretende revisar los conceptos ya enumerados con más detalle.
2. OBJETIVO
 Determinar la concentración de KI/I2 de una solución de concentración
desconocida.
3. TEORIA/PRINCIPIO
La espectrofotometría UV-visible nos permite establecer la concentración de un
compuesto en una solución. Esta técnica se fundamenta en que las moléculas absorben
las radiaciones electromagnéticas, la cantidad de luz absorbida depende de una
relación lineal de la concentración. En estos casos se utiliza un espectrofotómetro,
dado que el equipo permite seleccionar una longitud de onda de la luz que pasa por
una solución y por la misma medir la cantidad de luz absorbida (Díaz et al., n.d.).

Espectrofotometría

La espectrofotometría se basa en la medida de la absorción o emisión de la energía

radiante, después que ésta interactúa con una especie química. La gran difusión de
estos términos es consecuencia de los siguientes factores:

2
 El amplio intervalo de longitud de onda o de frecuencia de energía radiante y
sus diferentes modos de interacción con la materia.
 La existencia de instrumentos de medidas cada vez más precisos.
 Las ventajas inherentes al método, generalmente el análisis es muy rápido una
vez que se ha establecido el método, a no ser que se requiera un tratamiento
previo para eliminar interferencias.
 El método es, por tanto, muy cómodo para medidas repetidas de un mismo
constituyente.
 El método es en general aplicable a la determinación exacta de cantidades de
constituyentes mucho menores que con los métodos gravimétricos o
volumétricos; es, por tanto, muy adecuado para el análisis de trazas.
 Los métodos espectrofotométricos tienen tan importancia que son los más
utilizados en todos los laboratorios industriales, clínicos, de investigación o de
enseñanza (Ram, 2008).

Fundamento de la espectrofotometría UV-Visible

El fundamento de la espectroscopía se da a la capacidad de las moléculas para

absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV visible.
Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por
lo que dicha técnica es un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas.

Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de

energía interna. Cuando la luz es absorbida por una molécula se origina un salto
desde un estado energético basal o fundamental, E1, a un estado de mayor energía,
E2. Donde sólo se absorberá la energía que permita el salto al estado excitado, cada
molécula tiene una serie de estados excitados que la distingue del resto de
moléculas. Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda

3
presenta una molécula esto es su “espectro de absorción”, constituye una seña de
identidad de la misma. Por último, la molécula en forma excitada libera la energía
absorbida hasta el estado energético fundamental.

𝐸2 − 𝐸1 = ℎ𝑣

En espectroscopía el término luz no sólo se aplica a la forma visible de radiación

electromagnética, sino también a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectrofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV
cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm) (Díaz et al., n.d.).

Figura 1. Espectro electromagnético

Transmitancia

Representa el porcentaje de luz que pasa a través de la muestra. Es la relación entre

la luz monocromática transmitida (I) por una muestra y la energía o luz incidente
(𝐼𝑜 ) sobre ella. La energía radiante incidente como la transmitida deben ser
medidas a la misma longitud de onda.

𝐼 𝐼
T = 𝐼 = 10−𝑎𝑏𝑐 o % T = 𝐼 * 100
𝑜 𝑜

Se acostumbra a considerar la transmitancia como la razón de la luz transmitida

por la muestra y la luz transmitida por un patrón parcial. Este patrón puede ser el
líquido (solvente) en que esta disuelta la muestra, aire, blanco analítico u otra
sustancia elegida arbitrariamente. Debido a que la transmitancia de este patrón no

4
es precisamente el 100 %, es necesario detallar el patrón con el cual la muestra es
contrastada (Harris, 2006).

Absorbancia

Representa la cantidad de luz o energía radiante que es absorbida por una sustancia
pura o en solución muestra. Puntualmente, corresponde al logaritmo negativo de
la transmitancia, transmitancia expresada como fracción decimal.

𝐼
A = −log[ ]
𝐼𝑜

Cada sustancia posee su propio espectro de absorción, el cual es una curva que
expone la cantidad de energía radiante absorbida, la sustancia en cada longitud de
onda del espectro electromagnético, es decir es una determinada longitud de onda
de la energía radiante, cada sustancia atrae una cantidad de radiación que es distinta
a la que atrae otro compuesto (Harris, 2006).

Figura 2. Espectro de absorción de dos compuestos diferentes.

Mediciones de absorbancia y transmitancia

Estas mediciones se realizan por comparación entre la muestra problema y un

estándar arbitrario o de referencia. Como la referencia debe poseer un porcentaje
de transmitancia del 100 %, esta es llamada referencia del 100 %., o una
absorbancia de cero (Harris, 2006).

5
La ley de Beer-Lambert:

Esta ley se basa en los métodos espectrofotométricos en el cual se establece una

relación lineal entre la absorbancia y la concentración y el camino óptico. Esto se
demuestra con la siguiente expresión.

𝐴=𝜀∙𝑐 ∙𝐼

Donde A: absorbancia.

l: camino óptico.

ε: Coeficiente de absortividad molar.

c: concentración

Esta ley tiene una importancia significativa para la cuantificación de un

determinado analito en una muestra. En el grafico se puede observar la relación
lineal de la absorbancia y de la concentración a un camino óptico constante
(Martinez et al., 2009).

Figura 3. Porcentaje de Transmitancia y Absorbancia vs. Concentración

Cuando se cometen errores en el análisis de esta técnica la ley se ve afectada, estas

alteraciones se los conoce como desviaciones de la ley de Lambert, y esto se puede
dar por los siguientes factores.

6
  Limitaciones fundamentales:

Es una ley limitante solo para concentraciones bajas de analitos menores de

0.01M. A concentraciones muy altas las especies absorbentes pierden su
libertad.

 Interferencias químicas:

Son consecuencias de la asociación, disociación o reacción de las especies de

interés, estas presentan una dependencia fundamentalmente del pH de la
solución.

 Interferencias espectrales:

Es debido a la radiación no monocromática, es decir no se expresa una sola

longitud de onda, para que se cumpla debe existir un solo coeficiente de
absortividad.

 Interferencias instrumentales:

Se trata de los errores al momento de la lectura que siempre se producen, pero

se hacen más graves a valores pequeños o muy grandes de absorbancias.

Instrumentación para la medición de absorbancias de la luz visible y

ultravioleta: espectrofotómetro UV-visible

Los espectrofotómetros UV-VIS son instrumentos de laboratorio utilizados para

análisis cualitativos y cuantitativos de compuestos químicos, estas técnicas de
análisis tienen gran importancia para los diferentes sectores de la industria, estas
industrias son: química, petroquímica, farmacéutica, entre muchas otras.

Una de los principales usos del espectrofotómetro es que tiene la capacidad de

proyectar un haz de luz monocromática (de una longitud de onda particular) a
través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha
muestra.

7
Los componentes principales de un espectrómetro son:

 Fuente de radiación (Fuente de luz)

 Selector de longitud de onda (Monocromador)
 Recipiente de la muestra (Cubeta de muestra)
 Detector (Foto multiplicador)
 Amplificador de la señal
 Dispositivo de lectura (Ordenador)

Figura 4. Esquema del funcionamiento de un espectrofotómetro UV-VIS

Se aplica esta técnica a los campos de análisis de agua, industria farmacéutica,

bioquímica y toxicología, metalurgia, edafología, industria alimentaria, piensos
animales, fertilizantes, productos petrolíferos, plásticos y fibras sintéticas, rocas y
suelos, minería, vidrios y productos cerámicos, cementos etc. (Martinez et al.,
2009).

Curva de calibración.

Para obtener una curva de calibrado de un compuesto se preparan soluciones de

diferentes concentraciones del mismo, determinándose para cada una de ellas el
valor de absorbancia a λ máx. Estos valores de absorbancia se representan en el
eje de abscisas (eje de x) y los de concentración en el eje de ordenadas (eje de y).
Se observará que, a bajas concentraciones, el aumento de concentración se
corresponde con un incremento lineal en la absorbancia. A concentraciones altas

8
la linealidad se pierde y se observa que la línea se aplana, por lo que las medidas
son poco fiables.

Figura 5. Curva de calibracion

Después de haber obtenido esta gráfica, se determina la función matemática que

presenta dicha recta a través del tratamiento estadístico de regresión de los
mínimos cuadrados, la cual relaciona la absorbancia y la concentración de un
analito. La siguiente ecuación matemática corresponde a dicha función:

𝐴 = 𝑚𝑐 + 𝑛

Donde:

A: Absorbancia.

n: Intercepto de la recta.

m: Pendiente de la recta y que corresponde al producto entre

absortividad a de la muestra y el espesor b de la cubeta.

Posteriormente se mide la absorbancia de la solución problema y se interpola su

valor en la gráfica o se reemplaza en la ecuación anteriormente mencionada, para
obtener el valor de concentración del analito. La concentración de la solución
problema debe estar comprendida en el rango de concentración que comprende la
curva de calibración (Harris, 2006).

9
 Figura 6. Interpolación grafica

3.1 USOS INDUSTRIALES

Uso de la espectrofotometría UV-Visible en laboratorio de análisis y en industria:

 Ámbito de la metalurgia

En la metalurgia, se utiliza para analizar muestras de aleaciones, siempre y cuando

se puedan poner en disolución y el tiempo para hacerlo no sea excesivamente largo
(Uboho, 2011).

 Ámbito de la farmacéutica
Es especialmente útil en la identificación de materias primas. La posibilidad de
dar una conformidad rápida en el mismo lugar de entrada de materias primas,
permite acelera el inicio del proceso de cualquier fármaco (Alcalà, 2006).

 Ámbito medio ambiental

Con el espectro electromagnético en las regiones visibles y ultravioletas se puede

utilizar para determinar los metales en muestras del agua o de los macizos.

 Ámbito ciencias biomédicas

El uso biomédico de la luz comprende usos diagnósticos y terapéuticos. La

espectroscopia de la hora de vuelo del fotón puede ayudar a ciertos métodos

10
terapéuticos (tales como terapia fotodinámica) proporcionándole los datos sobre
las propiedades ópticas que regulan la reacción del tejido.

 Ámbito de la astronomía

Se puede obtener la información sobre la composición, la densidad, la temperatura,

y otros procesos físicos principales de cierto objeto astronómico (Tomislav, 2017).

 Ámbito de los alimentos

Con la ayuda de la curva espectral los datos pueden ser fácilmente analizados para
dar una medida cuantificable de color de la muestra. Esto es importante en la
industria alimenticia ya que los alimentos tienen colorantes específicos permitidos,
y cualquier desviación puede ser la causa de que se deseche un lote de productos
(“Identificando colorantes alimenticios con espectrofotómetros,” 2013).

 Ámbito de los suelos

Con la ayuda de la espectroscopia infrarrojo se puede incorporar los análisis de

fertilidad de suelos considerando su versatilidad ya que esta es la técnica más
usada y adecuada considerando su bajo costo y reproducibilidad (Rodríguez et al.,
2016).

 Ámbito de la minería

La espectrofotometría es una herramienta importante para el análisis de los metales

en el campo de la minería, control de medio ambiente. Con esta herramienta se
puede controlar el proceso, efectuar en control de calidad, analizar el excedente de
contaminantes y registrar los metales nocivos (Marin, 2010).

 Aplicaciones cuantitativas
 Compuestos orgánicos.

Los compuestos que tienen un coeficiente de absortividad molar alto se pueden

establecer directamente en caso contrario se debe preparar un derivado con

11
 coeficiente molar alto. Cuando un compuesto es puro o se encuentra en una
mezcla en la que dicho compuesto es el único que absorbe.

 Compuestos inorgánicos.

Es necesario preparar complejos, usualmente se leen como complejos

coloridos. Esta aplicación se usa mucho para las mediciones de compuestos
metálicos tóxicos en el campo de las ciencias ambientales (García, 2016).

4. MÉTODO
Material y reactivos
 1 espátula  1 pipeta 1,5 y 10 mL
 1 vidrio de reloj  Agua destilada
 1 balanza analítica  KI/I2
 5 matraces aforados de 100 
mL  Espectrofotómetro
 1 pera de succión UV/Visible
 1 vaso de precipitación de 50  Cubetas de vidrio
mL

Metodología
 Solución madre de 𝐼2 de 0,14 N
Preparar 100 mL de 𝐼2 a 10−3 𝑁
𝑒𝑞1 = 𝑒𝑒𝑞2
𝑁1 𝑉1 = 𝑁2 𝑉2
0,14 𝑉1 = (0,001)(100)
𝑉1 = 0,71 𝑚𝐿
 Curva de calibración:
Preparar soluciones hijas:
 100 mL de 𝐼2 a 1,0x10−4 𝑁
𝑒𝑞1 = 𝑒𝑒𝑞2

12
 𝑁1 𝑉1 = 𝑁2 𝑉2
10−3 𝑉1 = (1,0x10−4 )(100)
𝑉1 = 10 𝑚𝐿
 100 mL de 𝐼2 a 7,5x 10−5 𝑁
𝑒𝑞1 = 𝑒𝑒𝑞2
𝑁1 𝑉1 = 𝑁2 𝑉2
10−3 𝑉1 = (7,5x 10−5 )(100)
𝑉1 = 7,5 𝑚𝐿
 100 mL de 𝐼2 a 5x 10−5 𝑁
𝑒𝑞1 = 𝑒𝑒𝑞2
𝑁1 𝑉1 = 𝑁2 𝑉2
10−3 𝑉1 = (5x 10−5 )(100)
𝑉1 = 5 𝑚𝐿

 100 mL de 𝐼2 a 2,5x 10−5 𝑁

𝑒𝑞1 = 𝑒𝑒𝑞2
𝑁1 𝑉1 = 𝑁2 𝑉2
10−3 𝑉1 = (2,5x 10−5 )(100)
𝑉1 = 2,5 𝑚𝐿

 100 mL de 𝐼2 a 1,0x 10−5 𝑁

𝑒𝑞1 = 𝑒𝑒𝑞2
𝑁1 𝑉1 = 𝑁2 𝑉2
10−3 𝑉1 = (1,0x 10−5 )(100)
𝑉1 = 1 𝑚𝐿

 Determinación de la absorbancia:

Se llenó dos cubetas con aproximadamente 2/3 de su volumen, una con la solución
hija de concentración de 5x 10−5 𝑁 y la otra con el agua. Se puso el rango de longitudes

13
 de 190 a 1100 nm en el espectrofotómetro. La mayor absorbancia obtenida fue 5, 607
en una longitud de onda de 366 nm.

Luego se midieron las absorbancias de las hijas llenando también 2/3 de las cubetas y
en una cubeta se puso con agua y se colocó en el punto blanco del espectrofotómetro.

5. RESULTADOS
5.1 Grafica Abs = f ([KI/I2])

Abs
0.014
y = 130.07x
0.012 R² = -0.012

0.01

0.008

0.006

0.004

0.002

0 Concentracion [mol/L]
0 0.00002 0.00004 0.00006 0.00008 0.0001 0.00012
Abs Lineal (Abs)

Grafica 1. Abs = f ([KI/I2])

* Para la conversión de las concentraciones de las soluciones hijas de eq.L-1 a mol.L—1
se tomó en cuenta el número de equivalentes.
5.2 Concentración de KI/I2
𝐶 = 2,31𝑥10−2 𝑚𝑜𝑙. 𝐿−1 𝐾𝐼/𝐼2
6. DISCUSION
Primeramente, se eligió la longitud de onda correspondiente a un máximo, debido
a que así el error de medición es mínimo y la sensibilidad sea máxima para poder
hacer una determinación cuantitativa.
Para realizar la gráfica se tomaron en cuenta dos aspectos: Las unidades de las
concentraciones en mol.L-1, éstos valores son iguales que los valores de

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 normalidad debido a que el número de equivalencia es 1 en KI/I2. El segundo
aspecto fueron los valores de la absorbancia (Tabla 1.), no se tomaron en cuenta
los valores negativos debido a que afecta a la curva de tendencia haciendo que la
pendiente sea negativa y así generando una concentración errónea.
En el análisis cuantitativo se aplicó una linealidad para obtener la pendiente de la
recta para poder calcular la concentración de la solución de concentración
desconocida.
Se pudo observar que los dos primeros puntos de absorbancia positivos (0,009 y
0,007) se encuentran por debajo del límite de detección, por ende, dichos valores
son indicativos de la ausencia del analito en cantidades detectables. Así también
se observó que el valor de absorbancia de 0,011 hallado se encuentra por encima
del LD que puede ser atribuido a la presencia del analito.
Los errores también pueden ser atribuidos al mal manejo de los instrumentos y
preparación de las muestras para ser analizadas, ya que se prepararon dos muestras
con la misma concentración, por lo cual se tuvo que volver a preparar la que
faltaba.

7. CONCLUSIONES
Se obtuvo una curva representativa basándonos en las concentraciones de las
soluciones hijas a partir de una solución madre de KI/I2 con sus respectivas
absorbancias halladas con la ayuda del espectrofotómetro, dichas absorbancias son
directamente proporcionales a las concentraciones por lo cual, se aplicó una
linealidad para obtener la pendiente de la recta y así con la ecuación de Lambert-
Beer calcular la concentración de la solución de concentración desconocida con
un valor de 2,31𝑥10−2 𝑚𝑜𝑙. 𝐿−1.
*Recomendaciones: Al momento de obtener los datos y anotarlos se debe ser muy
cauteloso ya que tan solo un error puede variar y así mismo perjudicar los
resultados.

15
 8. BIBLIOGRAFIA

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 ANEXOS
 Determinar la concentración de KI/I2 en la solución desconocida
Concentración de solución madre 10−3 𝑁 con un absorbancia de 0,730

𝑆𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛𝑒𝑠 ℎ𝑖𝑗𝑎 [𝐾𝐼 ⁄𝐼2 ] 𝑚𝑜𝑙. 𝐿−1 𝐴𝑏𝑠 𝑎 366 𝑛𝑚

1 0 0
2 10−4 1,10𝑥10−2
3 2,5𝑥10−5 9𝑥10−3
4 10−5 7𝑥10−3

𝐴 = 𝜀𝑏 𝐶 + 𝑏

𝑦 = 𝑚 𝑋 +𝑏

Abs
0.014
y = 130.07x
0.012 R² = -0.012

0.01

0.008

0.006

0.004

0.002

0 Concentracion [mol/L]
0 0.00002 0.00004 0.00006 0.00008 0.0001 0.00012
Abs Lineal (Abs)

 b = longitud del ancho de la celda con valor de 1 cm

𝐴𝑏𝑠 𝐾𝐼⁄𝐼2 = 0,730
𝜀𝑏 = 130,07 𝐿. (𝑚𝑜𝑙. 𝑐𝑚)−1 (1 𝑐𝑚) = 130,07 𝐿. 𝑚𝑜𝑙 −1
𝐴 3
𝐶= = = 2,31𝑥10−2 𝑚𝑜𝑙. 𝐿−1
𝜀𝑏 130,07 𝐿. 𝑚𝑜𝑙 −1

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