ESPECTROMETRIA

I. INTRODUCCION
la espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la
detección especifica de moléculas .se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su
aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y
estado de agregación (solido, liquido, gas), los fundamentos físico-quimicos de la
espectrofotometría son relativamente sencillos.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forme de
energía interna. esto permite que se inicien ciclos vitales en muchos organismos,
entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias.
la mecánica cuántica nos dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los
cuales tiene una energía. los espectros de absorción se miden mediante un
instrumentos denominado espectrómetro los instrumentos que vamos usar constan
de una fuente de luz “blanca “caracterizada por un espectro de emisión continuo
en un intervalo amplio de longitudes de onda (en nuestro caso 325nm-900nm)y de
un monocromador que actúa como filtro óptico transmitiendo un haz de luz de
longitud de onda fija e intensidad 10, este haz penetra en la cubeta de análisis
donde se encuentra la muestra .un detector sensible a la luz mide la intensidad
del haz a la salida.

II. OBJETIVO

 Aprender a manejar bien el espectrofotómetro

 Realizar una curva de absorbancia y concentración
 Obtener mediciones rápidas

III. REVISION BIBLIOGRAFICA

3.1 Espectrofotómetro
Un espectrofotómetro es un aparato electrónico que se utiliza para medir las
proporciones de la luz de diferentes longitudes de onda, que son absorbidas y
transmitidas por una solución usualmente coloreada. La luz del sol es una
forma de energía conocida como energías electromagnéticas se conoce con el
nombre de longitud de onda, se representa por una letra griega llamada (ʎ) y su
dimensional se expresa en manómetros (1nm=10°m) las partículas cuando
interactúan con el haz de la luz tienen capacidad de absorber la energía y
excitarse. los cambios producidos en la partícula dependerán de la naturaleza
propia de la partícula, y que la energía de la luz incide. Cada especie
absorvente (cromatogeno) tiene u espectro de absorción característico. este
espectro representa la relación entre longitud de onda (ʎ)incide y la
absorbancia

Relación entre luz incidente y la transmitida se denomina transmitancia

𝑰
𝑻% = 𝑰𝟎 . 𝟏𝟎𝟎% donde: I: luz transmitancia

I0: luz incidente A=-logT=2-log%T

En la práctica se utiliza el valor de la absorbancia en lugar de transmitancia
A= 2- 𝒍𝒐𝒈𝟏𝟎 T% relación matemáticamente entre la absorbancia y % luz
transmitancia es el siguiente:
 El % T va de 0-100: si%T=100 entonces A=0
 La absorbancia va de infinito a cero
 Si % transmitancia =0, absorbancia=infinito
Para evitar la interacción por parte del disolvente o cubeta se hace una
mediada previa que será el blanco para eliminar dichas interferencias. todas las
medidas que se hagan con posterioridad serán referidas a media inicial y se
deben hacer en la misma cubeta que el blanco, pues si la siguiente medida la
concentración es mayor, no habrá gran variación posible, cuidado con hacerlo
del revés, no se puede.
 3.2 ley de Lambert -Beer
Establece relación entre absorbancia de una solución y concentración de
sustancia absorbente y longitud de que recorre la luz a través de la solución

A=ϵxCxL

Siendo:
A= absorbancia C=concentración absorbente L=longitud de paso de luz (cm)

Esta ecuación constituye la base del análisis cuantitativo por

espectrofotometría épsilon es el coeficiente de extinción molar, una constante,
por compuesto dado sino se varían las condiciones de la luz de onda, pH,
temperatura.
La longitud del paso de luz dependerá de la cubeta a utilizar suele se de 1cm
La ley de Lambert-Beer se cumple para las soluciones diluidas ya que con
valores de concentración altos (ϵ) varia debido a fenómenos de dispersión de
luz.
IV. MATERIALES Y METODOS

4.1 Materiales

 Espectrofotómetro uv visible
 Celdas de vidrio
 Pipetas volumétricas de 1.0,2.5,5. ml
 Vasos precipitados

4.2 Métodos
Enciende el espectrofotómetro: la mayoría del espectrofotómetro necesitan
calentarse antes de poder una lectura precisa.
Limpia las cubetas o los tubos de ensayo: cuando estes manipulando una
cubeta evita tocar los lados por los que pasara la luz (generalmente, los lados
transparentes del recipiente)
Vierte la cantidad adecuada de la muestra en la cubeta: mientras el laser
que produce la luz este atravesando el líquido y no un aparte vacío del
recipiente conseguirás una lectura rigurosa.
Prepara la solución de control: la solución de control contiene únicamente el
en que el soluto a analizar este disuelto, por ejemplo, si tenías sal disuelta en
agua, la solución de control será solo agua si habías teñido el agua de rojo la
de control también debería ser roja.
Elige y determina la longitud de onda de la luz con la que analizar la
muestra: utiliza una longitud de una onda lumínica única (olor monocromático)
para que el experimento se más efectivo el color elegido debe ser uno que
sepa que absorbe uno de los productos químicos que se cree que hay en el
soluto de la muestra configura le longitud de onda deseada de acuerdo con las
especificaciones del espectrofotómetro
Calibra el aparto utilizando la solución de muestra : coloca la solución de
muestra en el compartimento de muestra y cierra la tapa en un
espectrofotómetro analógico habrá una pantalla con una ajuga que se mueve
en función de la intensidad de la detección lumínica cuando la muestra este
dentro deberías ver que la ajuga se mueve hacia la derecha registra ese valor
por si lo necesitas más adelante con la solución de control aun en la maquina
regula la aguja al cero utilizando el botón de ajuste .
Mide la absorbancia de tu muestra: retira la solución de control y colocar a la
muestra del experimento en el aparato espera unos 10segudos hasta que la
aguja se estabilice o hasta que los números digitales dejen de cambiar registra
los valores de %de transmitancia o absorbancia
Calcular la absorbancia de la muestra
V. RESULTADOS Y DISCUSIONES