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Agroindustrial (UNMSM)
EAP. Ingeniera
RESUMEN
El objetivo del presente trabajo fue el dominio de la tcnica y manejo del instrumento as como tambin fue encontrar la
curva de absorcin de los pigmentos presentes en el maz morado (Zea mays L.) y de una bebida a base de maz
morado (Chicha morada de Gloria) con el fin de comparar con la bibliografa encontrada. La tcnica usada fue
Espectrofotometra de absorcin, que es la absorcin de radiaciones electromagnticas por las sustancias, en el
fenmeno de absorcin si una radiacin que proveniente de una fuente o foco incide sobre otra sustancia (tomo,
molcula, in), y su energa cuntica es exactamente la necesaria para que se produzca una excitacin en alguno de
los niveles energticos permitidos de la sustancia, la radiacin podr ser absorbida produciendo la excitacin
correspondiente.
Palabras Clave: Espectrofotometra, Absorcin, Zea mays L., pigmentos
ABSTRACT
The purpose of this work was the domain of technical and management of the instrument and
was also find the absorption curve of the pigments in purple corn (Zea mays L.) and a drink
made of purple corn (chicha morada Gloria) in order to compare with the bibibliografa found.
The technique used was Absorption spectrophotometry, which is absorption of electromagnetic
radiation by substances in the absorption phenomenon if radiation from a source or focus
incident on another substance (atom, molecule, ion), and quantum energy is exactly required
for excitation in any of the allowed energy levels of the substance can be absorbed radiation
producing the corresponding excitation occurs.
Keywords: spectrophotometry, Absorption, Maz Morado ( Zea mays L) , pigments
1. PRINCIPIOS TEORICOS
La espectroscopia es el estudio de la
interaccin de la radiacin electromagntica
y la materia, y los aparatos que miden esa
interaccin se llaman espectrofotmetros.
La partcula es una estructura energtica:
Se mueven sus molculas, los grupos de
tomos en las molculas. El grado de
agitacin depende del tipo de sustancia, de
la influencia del medio en que se halle y del
efecto de energa externa que le llegue.
Dependiendo de su complejidad, una
sustancia puede llegar a una infinidad de
estados energticos.
EAP. Ingeniera
EAP. Ingeniera
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
2.2.1 Materiales y reactivos; 4 Vasos de 50 mL, 2 Tubos de Ensayo,2 fiolas de 25mL,1 pipeta
volumtrica de 5mL y 2mL , CoCl2 HCl, Agua destilada y Etanol
2.2.2 Muestras a analizar; Maiz Morado (Zea mays L), Bebida a base de Maiz morado.
2.3
METODOLOGA
2.3.1 Verificacin del Espectrofotometro Genesys 20 Thermo Scientific con CoCl2 en HCl
al 1%
El proceso se inici con la elaboracin de la solucin CoCl 2 en HCl (1:1), tras lo ello se puso esta
solucin preparada en un tubo de ensayo y tambin en el otro tubo el solvente (HCl al 1%),
este sirve como la muestra en blanco para obtener una medida nicamente del CoCl 2 , luego de
encender el espectrofotmetro se coloc primero el blanco y se seleccion el rango de
Absorbancia se taro y se procedio a medir la muestra problema, este procedimiento se hizo
para todos las longitudes de onda que se iba a medir (450nm-700nm). Los datos obtenidos se
graficaron y se compararon con los datos tericos.
Tambin se prepar CoCl2 diluida con agua destilada en un tubo, y en otro tubo se puso agua
destilada sirviendo este como el blanco. El procedimiento fue igual a la manera anterior.
2.3.2 Determinacin del Espectro de Absorcin del Maiz Morado (Zea mays L) y una bebida
elaborada de chica morada
2.3.2.1
Determinacin del Espectro de Absorcin del Maiz Morado (Zea mays L) y una
bebida elaborada de chica morada en etanol
3
EAP. Ingeniera
Se empez preparando la solucin de maz morado para lo cual se disolvi en etanol 3 granos
de Maz Morado en un vaso de 50mL, controlando que el color de la solucin sea tenue, esta
solucin se disolvi en un tubo de ensayo mientras que en el otro se puso el blanco (etanol), el
procedmiento fue el ya descrito en la seccin 2.3.1 para las longitudes de onda desde 450 nm
hasta 700 nm.
2.3.2.2
Determinacin del Espectro de Absorcin del Maiz Morado (Zea mays L) y una bebida
elaborada de chica morada en agua
Se empez preparando la solucin de maz morado para lo cual se disolvi en agua destilada 3
granos de Maz Morado en un vaso de 50mL este se llev a una cocinilla donde se calent por
20 min, controlando que el color de la solucin sea tenue, esta solucin se disolvi en un tubo
de ensayo mientras que en el otro se puso el blanco (etanol), el procedimiento fue el ya
descrito en la seccin 2.3.1 para las longitudes de onda desde 450 nm hasta 700 nm.
Para la bebida de chicha morada, se disolvi con 50 mL de agua destilada. Tomar 2mL de la
muestra y llevar a una fiola de 25mL con agua destilada, luego de esto sigui el mismo
procedimiento ya antes descrito
3. EJEMPLO DE CALCULOS
3.2
Determinacin de la transmitancia
T = 10-A
En el cloruro de Cobalto para = 450nm y %A= 0.09
%T= 10-0.09
%T= 0.813
3.3
Determinacin de la absorbancia
% A =1
Log ( T
1
%A= Log ( 0.237 )= 0.625
3.4
EAP. Ingeniera
0.18
0.16
80
0.14
0.12
60
%T
0.1
40
0.08
20
0.04
0.06
0.02
(nm)
Transmitancia
y Absorbancia
A teorico
0.05
0
440 490 540 590 640 690
(nm)
%T
120
100
80
60
40 A
20
0
0.400
0.350
0.300
0.250
0.200
0.150
0.100
0.050
0.000
(nm)
120
0.500
100
0.400
80
%T
EAP. Ingeniera
0.300
60
0.200
40
20
0.100
0.000
(nm)
1.600
1.400
1.200
1.000
0.800
0.600 A
0.400
0.200
0.000
0.700
0.600
80
%T
0.500
60
0.400
40
0.300
0.200
20
0.100
0.000
(nm)
5. DISCUCON DE RESULTADOS
5.1. Calibracin Del Espectrofotmetro Con Cocl2
GRAFICA 7. ESPECTRO DE ABSORCIN DE CLORURO DE COBALTO (SEGN FEDERMN CASTRO EUSSE, 2014)
VS ESPECTRO DE ABSORCIN
HALLADO EN EL LABORATORIO
1.19
0.99
0.79
0.59
0.39
0.19
-0.01
450
500
550
600
650
EAP. Ingeniera
0.18
0.16
0.14
0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
700
Gl Cuadrado
Medio
1 1.12947E6
Razn-F
Valor-P
2701.72
0.0000
16 418.056
17
Se observa que P<0.05, lo que indica que hay una diferencia significativa entre el espectro de
absorcin terico y el experimental, esto se puede explicar por las diferencias de
concentraciones empleadas, en el caso del terico no se indica a que presin se trabaj.
Esta diferencia entre los espectros no significa necesariamente que el equipo se encuentre des
calibrado ya que existen otras razones de la variacin.
7
EAP. Ingeniera
EAP. Ingeniera
60
(nm
0
)
%T 66.2
65
0
91
66
0
67
0
68
0
69
0
70
0
Se puede observar a simple vista que hay una diferencia notoria en los espectros de absorcin,
lo cual indica que hay una marcada influencia de la temperatura en la transmitancia. Esto es
debido a que al elevar la temperatura aumenta la energa interna de la molcula, que es un
aumento de la vibracin y rotacin de la partcula, por decirlo de otra manera hay una
excitacin de los electrones de la molcula y lo que modifica la capacidad de absorber ciertos
rangos de longitud de onda.
5.7 ANALISIS DE PIGMENTOS ENCONTRADOS
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Para la calibracin del espectrofotmetro es importante que sea realizado con una
solucin patrn el cual tenga un espectro de absorcin conocido a una concentracin
conocida.
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La solucin que se utilizara debe ser pura debe exenta de contaminantes ya que esto
puede generar que el instrumento indique %T diferentes al real, haciendo as que se crea
que esta descalibrado
El solvente es importante al momento de analizar el espectro de absorcin de una
muestra, ya que los cromoforos pueden ser solubles en un solvente ms que en otros.
Con ayuda de la bibliografa encontrada, se sabe que el pigmento que tiene una mayor
absorcin es cianidina-b-glucsido, por lo tanto, es el que se encuentra en mayor
proporcin en el Maz Morado.
La temperatura es un factor muy influyente en la determinacin del espectro de
absorcin.
6. BIBLIOGRAFA
LITERATURA CONSULTADA
http://web.educastur.princast.es/proyectos/biogeo_ov/2BCH/B3_METABOLISMO/t32_FOTOSINTE
SIS/EJERCICiOS.htm
10
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7. ANEXOS
11
Tema:
%T
450
460
470
480
490
500
502
504
506
508
510
512
514
516
518
520
525
530
540
550
560
570
580
590
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
82
79.2
76.6
74.6
73.2
71.4
70.7
69.9
69.1
69.1
69
69
69.2
68.8
69.1
69.9
70.7
72.7
78.1
83.9
88.9
93.2
95.7
96.3
96.5
97
97.2
98.8
97.1
96.9
97.8
98.9
98.7
98.7
98.8
ABSORBANCIA = - logT
0.086
0.101
0.116
0.127
0.135
0.146
0.151
0.156
0.161
0.161
0.161
0.161
0.160
0.162
0.161
0.156
0.151
0.138
0.107
0.076
0.051
0.031
0.019
0.016
0.015
0.013
0.012
0.005
0.013
0.014
0.010
0.005
0.006
0.006
0.005
Aexperimental
0.09
0.104
0.112
0.129
0.131
0.15
0.155
0.155
0.157
0.158
0.16
0.162
0.162
0.162
0.157
0.156
0.139
0.109
0.077
0.079
0.03
0.018
0.014
0.014
0.013
0.012
0.01
0.01
0.012
0.01
0.004
0.006
0.004
0.002
Tema:
(nm)
450
460
470
480
490
492
494
496
498
500
501
502
503
504
505
506
507
508
509
510
512
514
516
518
519
520
521
522
523
524
525
526
527
528
529
530
%T
49.6
50.8
50.9
49.9
48.2
47.7
47.9
47.5
46.7
46.5
46.1
46
45.7
45.2
45
44.8
44.6
44.4
44.1
44.1
43.6
43.3
43
43
42.5
42.5
42.5
42.4
42.3
42.3
42.2
42.2
42
42.1
42
41.8
ABSORBAN
CIA = - logT
%T
66.2
53.7
52.6
47
42
41.2
40.6
40.4
39.3
39.2
39.2
39.1
38.9
38.8
38.9
38.6
38.6
38.7
38.8
38.8
39
39.2
39.4
39.7
40
40.3
40.3
40.3
40.6
41.1
41.2
40.8
41.7
41.9
42.3
42.8
0.179
0.270
0.279
0.328
0.377
0.385
0.391
0.394
0.406
0.407
0.407
0.408
0.410
0.411
0.410
0.413
0.413
0.412
0.411
0.411
0.409
0.407
0.405
0.401
0.398
0.395
0.395
0.395
0.391
0.386
0.385
0.389
0.380
0.378
0.374
0.369
Tema:
532
533
534
535
536
538
540
542
544
545
546
547
548
550
560
570
580
590
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
42
42
42
42.1
42.2
42.3
42.9
42.8
43.2
42.9
43.7
43.7
43.7
44.2
46.3
50.7
55.7
61.1
66.2
73.3
79.9
85
88.7
91
93
94.2
95.4
96.8
0.377
0.377
0.377
0.376
0.375
0.374
0.368
0.369
0.365
0.368
0.360
0.360
0.360
0.355
0.334
0.295
0.254
0.214
0.179
0.135
0.097
0.071
0.052
0.041
0.032
0.026
0.020
0.014
43.6
43.6
44
44
45
46.2
47.1
48.4
50
51.1
52.6
53.8
55.3
55.8
67.8
79.4
84
85.9
83.6
83.5
79.3
75.9
79.6
85.3
90.8
94.1
95.7
96
0.361
0.361
0.357
0.357
0.347
0.335
0.327
0.315
0.301
0.292
0.279
0.269
0.257
0.253
0.169
0.100
0.076
0.066
0.078
0.078
0.101
0.120
0.099
0.069
0.042
0.026
0.019
0.018
(nm)
%T
%T
ABSORBANCIA
= - logT
Tema:
450
460
470
480
490
492
494
496
498
500
501
502
503
504
505
506
507
508
509
510
512
514
516
518
519
520
521
522
523
524
525
526
527
528
529
530
532
533
534
535
23.7
17.7
11.7
7.8
5.2
4.7
4.4
4.1
3.8
3.6
3.4
3.4
3.3
3.2
3.1
3.1
3
3
3
3
3
3
3.1
3.1
3.1
3
3.2
3.2
3.3
3.3
3.4
3.4
3.5
3.5
3.6
3.6
3.7
3.8
3.9
4
0.625
0.752
0.932
1.108
1.284
1.328
1.357
1.387
1.420
1.444
1.469
1.469
1.481
1.495
1.509
1.509
1.523
1.523
1.523
1.523
1.523
1.523
1.509
1.509
1.509
1.523
1.495
1.495
1.481
1.481
1.469
1.469
1.456
1.456
1.444
1.444
1.432
1.420
1.409
1.398
23.8
26.3
28.2
29.5
30.9
31.1
31
31.4
31.8
31.8
31.7
31.7
31.7
31.8
31.8
31.7
31.3
31.6
31.7
31.6
31.3
31.3
31.1
30.9
31.1
30.7
31
30.8
30.4
30.7
30.4
30.6
30.6
30.7
30.8
30.6
30.3
30.5
30.2
30.2
0.623
0.580
0.550
0.530
0.510
0.507
0.509
0.503
0.498
0.498
0.499
0.499
0.499
0.498
0.498
0.499
0.504
0.500
0.499
0.500
0.504
0.504
0.507
0.510
0.507
0.513
0.509
0.511
0.517
0.513
0.517
0.514
0.514
0.513
0.511
0.514
0.519
0.516
0.520
0.520
Tema:
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538
540
542
544
545
546
547
548
550
560
570
580
590
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
4.1
4.5
4.8
5.2
5.8
6.2
6.6
7.5
8
9
22.7
43.9
56.9
61.8
6.6
53.7
43.9
39.4
45.7
61.3
66.5
85.9
91.1
92.9
93.5
1.387
1.347
1.319
1.284
1.237
1.208
1.180
1.125
1.097
1.046
0.644
0.358
0.245
0.209
1.180
0.270
0.358
0.405
0.340
0.213
0.177
0.066
0.040
0.032
0.029
30.1
30.1
30
29.9
29.6
29.3
29.7
29.7
29.6
29.6
29.6
30.2
31.5
33.7
36.1
39.5
44.9
52
61.2
70.9
78.6
85.9
90.3
93.1
94.8
0.521
0.521
0.523
0.524
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Aexperimental
(nm)
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1
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Tema:
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