Informe-de-Practica-No-3.

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Ensayos microbiológicos

1º Laboratorio de Análisis y de Control de Calidad

Zaidín-Vergeles

Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
 Pablo Jesús Fernández Cano
Elaboración de práctica: 30/09/21
Elaboración de informe: 06/10/21

Guión de Práctica Nº 3
Preparación de un medio de cultivo sólido en placa Petri y tubo inclinado
Objetivos.

 Aprender a preparar medios de cultivo en placa basados en agar guardando las

precauciones necesarias para su esterilidad.
 Aprender a manejar matraces calientes con ayuda de una tira de papel doblada.
 Aprender a manejar el autoclave.
 Aprender a conservar los medios preparados.

Fundamento teórico.

Usamos el autoclave para esterilizar los dos medios de cultivo preparados, tanto la placa de
Petri como los tubos de ensayo. El fundamento del autoclave se estudiará en la Unidad de
Trabajo 3 y se incluirá en una práctica correspondiente a dicha unidad en la que se haga uso
del mismo. Podemos adelantar que el autoclave esteriliza mediante vapor de agua a presión y
elevada temperatura, en nuestro caso, 1 atm y 121 C durante 15 minutos.

Se debe hacer hincapié en no autoclavar frascos cerrados herméticamente porque pueden

estallar debido a: cuando el autoclave está enfriándose, la presión en la cámara va
disminuyendo y llegaría a ser menor que la de un frasco cerrado porque está más caliente su
contenido de agua.

Los medios de cultivo aportan los nutrientes necesarios para el crecimiento microbiano.
También aportan condiciones fisicoquímicas adecuadas (pH y presión osmótica).

Por último, un medio de cultivo sólido tiene la composición de un caldo de cultivo pero
además se le ha agregado agar-agar, que es un polisacárido no ramificado procedente de
algún alga de los géneros Gelidium, Eucheuma o Gracilaria. Químicamente es un carrageno:
polisacárido que rellena huecos en la estructura celulosa de varias algas rojas. A esta sustancia
se le llama agar-agar o agar, pero hay algo de confusión porque a un medio de cultivo sólido
que lleve agar-agar también se llama “agar” a todo el medio.

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Elaboración de práctica: 30/09/21
Elaboración de informe: 06/10/21

Materiales.

 Frascos ISO 400 mL  Papel

 2 matraces Erlenmeyer 250 mL  Cucharilla
 Tubos de ensayo  Cinta de carrocero

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 Placas de Petri  Rotulador
 Agar TSA (Agar Triptona Soja)  Rejilla
 Agar VRBG ( Violeta cristal, Rojo de  Trípode
metilo, sales Biliares y Glucosa)
 Probeta  Mechero Bunsen

Procedimiento.

Los medios que van a placa se van a esterilizar antes de fraccionarlos en las placas mientras
que, los medios que van a tubo, se fraccionan antes de esterilizarlo y así también esterilizar los
tubos de ensayo. Esto se hace así porque las placas de Petri ya vienen esterilizadas de fábrica.

Para medios sólidos en placa:

1. Encender el mechero Bunsen con llama ligeramente oxidante para que proporcione el
calor necesario.
2. Medir en una probeta 400 mL de agua purificada y verter en un frasco ISO
3. Calentar el frasco ISO sobre un soporte y rejilla encima del mechero Bunsen y esperar
a que esté templado
4. Para pesar el medio preparar una superficie con un folio, realizando 2 dobleces hacia
el interior y dejando forma de “cuenco”
5. Pesar 19,6 g de medio TSA para un frasco ISO y 16,6 g de medio VRBG para el otro
6. Verter en los distintos frascos y matraces con un embudo de papel
7. Mezclar el medio con el agua con ayuda de una varilla de vidrio y ayuda de un guante
térmico
8. Introducir en el autoclave regulando el programa deseado, en este caso 121 C y 15
min
9. Esperar a que se enfríe aproximadamente hasta los 55 C
10. Verter en placas Petri, aproximadamente 5 mL de la altura de la placa, todo esto con el
mechero Bunsen encendido dentro de la zona aséptica que este crea
11. Apilar las placas en torre para luego poder introdocirlas fácilmente en la bolsa para
conservarlas en la nevera. Se han de introducir las placas cuando solidifiquen y dadas
la vuelta para evitar caidas de gotas de agua cuando se evapore agua y condense sobre
la tapa.
12. Tener cuidado de que las placas no se congelen porque se deteriora el medio
13. Anotar en la bolsa donde se guardan las placas de qué tipo son

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 Pablo Jesús Fernández Cano
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Para los medios de tubos inclinados:

1. Encender el mechero Bunsen

2. Medir 150 mL de agua purificada en una probeta y verter en el matraz Erlenmeyer
3. Calentar el matraz sobre un trípode y rejilla con el mechero Bunsen

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4. Pesar con ayuda del papel, como se explica anteriormente, 7,35 g de medio
deshidratado TSA y verter con ayuda del embudo dentro del matraz
5. Poner a calentar y cuando vaya a empezar a hervir retirar del fuego con ayuda de la
tira de papel doblada
6. Verter dentro de cada tubo de ensayo aproximadamente 15 mL con ayuda de un
embudo de cristal
7. Introducir en el autoclave con el mismo programa que utilzamos para los medios sobre
placa
8. Cuando termine el autoclave colocar los tubos de ensayo sobre un apoyo para crear la
lengua para el posterior cultivo.

Cálculos.

Según el medio VRBG de Cultimed para 1000 mL hacen falta 41,5 g de medio deshidratado.

Por lo tanto para 400 mL x 41,5 g medio /1000 mL = 16,6 g medio VRBG (Frasco ISO)

Según el medio agar TSA de Cultimed para 1000 mL hacen falta 49 g de medio deshidratado.

Por lo tanto para 400 mL x 49 g medio/1000 mL = 19,6 g medio TSA (Frasco ISO)

150 mL x 49 g medio/1000 mL = 7,35 g medio TSA (Matraz Erlenmeyer)

Resultados y Conclusiones.

Hemos conseguido realizar con éxito los medios de cultivo sólidos tanto en placa de Petri como
en tubos inclinados que nos servirán posteriormente para hacer cultivos en ellos.

En los medios de TSA crecerán indistintamente cualquier tipo de bacteria mientras que el
medio VRBG es específico para enterobacterias, en nuestro laboratorio utilizaremos
Escherichia coli y Salmonella.

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