Wuolah Free Ut9. Microscopio Optico

UT9.-MICROSCOPIO-OPTICO.
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Pablo_fdez23
Ensayos microbiológicos
1º Laboratorio de Análisis y de Control de Calidad
Zaidín-Vergeles
Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
UNIDAD DE TRABAJO 9.
MICROSCOPIO ÓPTICO: DESCRIPCIÓN,

MANEJO Y MANTENIMIENTO.
ÍNDICE.
1. INTRODUCCIÓN.
2. MICROSCOPIOS Y MICROSCOPÍA.
2.1. Tipos de microscopios.
2.2. Tipos de microscopios ópticos.
3. DESCRIPCIÓN Y USO DEL MICROSCOPIO DE CAMPO CLARO.

3.1. Introducción y esquema.
3.2. Descripción y uso de las distintas partes del microscopio de campo claro.
4. INSTALACIÓN DEL MICROSCOPIO Y DEL OBSERVADOR.
5. PROCEDIMIENTO DE ENFOQUE.
6. OPTIMIZACIÓN DE LA VISIÓN: USO DEL DIAFRAGMA Y DEL

CONDENSADOR.
7. CUIDADOS ANTES, DURANTE Y DESPUÉS DEL USO DEL MICROSCOPIO.

7.1. Limpieza de los objetivos.
7.2. Limpieza de los oculares.
7.3. Limpieza del condensador y la pletina.
7.4. Limpieza del brazo y la columna.
7.5. Después de su uso, para guardarlo.
8. PRECAUCIONES EN EL USO Y MANTENIMIENTO.
9. PROCEDIMIENTO DE ENFOQUE CON EL OBJETIVO DE INMERSIÓN.
10. LIMITACIONES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO.
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Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
1. INTRODUCCIÓN.
Los microorganismos son demasiado pequeños para ser observados a simple
vista, por lo que es necesario utilizar el microscopio. (Micro significa pequeño y
skopein significa ver). Al ser tan pequeños, los microorganismos y los elementos que
los componen se miden en unidades que resultan poco familiares en nuestra vida
normal. Para medir los microorganismos usamos el sistema métrico decimal cuya
unidad de longitud es el metro (m). Los microorganismos y sus componentes
estructurales se miden en unidades más pequeñas, como micrómetros (1 µm = 10-6 m),
nanómetros (1 nm = 10-9 m) y angstrom (10-10 m). El microscopio proporciona la
amplificación de imagen gracias a la cual el hombre es capaz de ver organismos y
estructuras que a simple vista serían invisibles. Los distintos tipos de microscopios
existentes pueden cubrir un amplio rango de escalas de aumento: desde pocos
centenares hasta centenares de miles de diámetros.
Desde los comienzos de la microbiología, el microscopio óptico se transformó

en uno de los medios más potentes y rápidos de identificación microbiológica. Incluso
hoy, a pesar del gran avance de los métodos rápidos de diagnóstico (normalmente
métodos serológicos, que necesitan del empleo de reactivos inmunológicos caros y
delicados), la observación microscópica de una muestra fresca o teñida es un aspecto
fundamental del análisis cualitativo microbiológico. Muchos microorganismos
patógenos o destructores de alimentos pueden ser identificados de modo fiable con
ayuda de unos pocos colorantes y un microscopio básico. En este sentido, la tinción de
Gram es aún hoy en día el método individual más eficaz y económico de análisis
microbiológico cualitativo.
2. MICROSCOPIOS Y MICROSCOPÍA.
2.1. Tipos de microscopios.
Hay dos grandes tipos de microscopios, según el fundamento básico de su

funcionamiento:
1. Microscopios ópticos: producen imágenes amplificadas mediante el uso

de luz visible (ondas electromagnéticas del espectro visible). Son los más
usados en microbiología. Se usan rutinariamente para identificar bacterias,
hongos, parásitos y protozoos.
2. Microscopios electrónicos: en lugar de radiación electromagnética

utilizan un haz de electrones para obtener la imagen amplificada. Se utilizan
principalmente en investigación (para el estudio de orgánulos intracelulares)
y en virología.
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2.2. Tipos de microscopios ópticos.
Podemos diferenciar los siguientes tipos de microscopios ópticos:
1. Microscopio de campo claro, también llamado de campo brillante o

de campo luminoso. Es el de uso más común. Permiten la observación de
preparaciones en su color natural o contrastadas mediante tinciones
resaltadas sobre un fondo más brillante
2. Microscopio de campo oscuro. Permiten la observación de formas

celulares que destacan brillantes sobre un fondo oscuro. Este efecto se
consigue utilizando diafragmas especiales
3. Microscopio de contraste de fase. Gracias a la utilización de

diafragmas y objetivos especiales, que consiguen aumentar las
diferencias en el índice de refracción de las células y el medio que las
rodea, permiten la observación de células vivas, ya que no es necesario
realizar ninguna tinción de las mismas.
4. Microscopio de luz ultravioleta.

5. Microscopio de fluorescencia. La fuente de iluminación
proporciona luz ultravioleta que excita ciertas moléculas presentes en las
células (bien de forma natural o añadidas a la preparación) que emiten
fluorescencia de luz visible.
Es necesario puntualizar que los instrumentos de luz UV, fluorescencia o contraste de
fase casi siempre tienen integrada la función de microscopía de campo claro. Asimismo,
hay instrumentos que pueden desarrollar tres o las cuatro funciones citadas.
3. DESCRIPCIÓN Y USO DEL MICROSCOPIO DE CAMPO

CLARO.
3.1. Introducción y esquema.
Los diferentes diseños existentes tienen pocas variaciones de unos a otros. En el

dibujo de la página siguiente aparece un microscopio óptico típico.
La mayor parte de las observaciones microscópicas se realizan con microscopios

de campo claro. En ellos el objeto a observar se intercala entre una fuente luminosa y el
sistema de lentes. Por consiguiente, la iluminación del objeto se consigue mediante
transparencia (a diferencia de los microscopios metalográficos, en los que la
iluminación se consigue mediante reflexión: haciendo incidir un haz de luz sobre la
muestra y observando la luz reflejada). Para conseguir la iluminación mediante
transparencia, la preparación microscópica realizada con la muestra debe ser lo
suficientemente delgada para permitir el paso de la luz a su través.
En este tipo de microscopios un conjunto de lentes finamente talladas forman

una imagen claramente enfocada muchas veces mayor que el espécimen. Este aumento
se logra cuando los rayos de luz procedentes de la fuente luminosa han pasado por un
condensador, que los dirige a través de la muestra; a continuación entran en las lentes
del objetivo, las más próximas al espécimen y la imagen obtenida es ampliada
nuevamente por las lentes del ocular.
El aumento total de la muestra se calcula multiplicando el aumento

proporcionado por las lentes del objetivo por el que suministran las lentes del ocular. La
mayoría de los microscopios utilizados en microbiología poseen varios objetivos, que
proporcionan 10X (bajo aumento), 40X (alto aumento) y 100X (de inmersión en aceite).
La mayoría de los oculares amplían la imagen 10 veces. Existen también oculares de 16
aumentos y microscopios con revólver para 4 objetivos, siendo el 4º de 4 aumentos.
Multiplicando los aumentos de un objetivo concreto por los del ocular se obtiene el
aumento total. Para el ocular de 10X y los objetivos de 10X, 40X y 100X, el
microscopio puede proporcionar 100, 400 o 1.000 aumentos (este último con inmersión
en aceite).
Además del aumento, una propiedad importante de un microscopio es su

PODER RESOLUTIVO: es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos
muy cercanos. Por ejemplo, si un microscopio tiene un poder resolutivo de 0’4 nm es

capaz de distinguir entre dos puntos como objetos separados si distan al menos 0’4 nm.
Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor será la definición de un objeto.
Bajo las condiciones normales de trabajo el campo de visión de un microscopio

óptico está brillantemente iluminado y se le llama microscopio de campo claro. Para
conseguir una imagen clara y finamente detallada con el microscopio de campo claro
pueden teñirse las muestras para distinguirlas claramente del medio que las rodea. Sin
embargo, en muestras no teñidas se pueden observar bien los objetos si se consigue
suficiente contraste, pues las células sin teñir normalmente contrastan poco con su
entorno. Para incrementar el contraste en un microscopio simple de campo claro se
regulan el condensador y el diafragma. Las células sin teñir se observan más
fácilmente con los microscopios modificados.
Descripción y uso de las distintas partes del microscopio de campo claro.
-CABEZAL Y OCULARES. El ocular es un cilindro que contiene un sistema de lentes.
El ocular o los oculares (según su número) van montados sobre un cabezal, que suele
ser giratorio. Los hay de los tipos siguientes:
 Cabezal monocular: un solo ocular.
 Cabezal binocular: dos oculares para los dos ojos de un mismo
observador. (Es el tipo más frecuente).
 Cabezal triocular: consta de un cabezal binocular similar al anterior y un
tubo vertical para fotografías y vídeo.
 Cabezal doble: está formado por dos parejas de oculares para permitir la
observación simultánea del mismo campo por parte de dos observadores.
-USO DEL CABEZAL BINOCULAR. El observador debe acercar sus ojos a los
dos oculares, manteniendo ambos abiertos. Se desaconseja el empleo de pintura de
pestañas cuando vaya a utilizarse el microscopio, pues los oculares pueden mancharse.
Los ojos deben acercarse lo suficiente como para que el campo circular iluminado
observado llene casi por completo el campo de visión del observador.
Si el observador utiliza gafas correctoras de miopía o hipermetropía, debe
quitárselas. Sólo permanecerá con ellas puestas en caso de sufrir un astigmatismo
intenso que pueda perjudicar notablemente la observación de la morfología de los

microorganismos.*
El observador debe ajustar la separación de los dos oculares a su
distancia interpupilar. Esto se consigue cuando las imágenes de los dos campos claros
inicialmente observados se funden en una sola. Debe memorizar su distancia
interpupilar que suele aparecer expresada en milímetros en la regleta cercana a los dos
oculares para recordarla de cara a futuros usos de este u otros microscopios.
*Uno o los dos oculares están provistos de un anillo de corrección o compensación de dioptrías.
Se debe usar después de haber conseguido el enfoque, pero vamos a describir su uso aquí. Estos
anillos permiten la visión correcta por aquellos observadores con distinto grado de miopía o
astigmatismo en un ojo con respecto al otro. Una vez que se ha conseguido el enfoque grueso,
puede cerrarse un ojo para ajustar así el enfoque fino a las dioptrías del ojo abierto. Entonces
puede cerrarse el primer ojo y abrirse el que permaneció cerrado, realizándose el enfoque
girando el anillo de compensación de dioptrías del ocular del ojo abierto hasta que la imagen
sea nítida. A continuación deben realizarse las observaciones con los dos ojos abiertos.
Otra posibilidad, menos sistemática pero también eficaz consiste en realizar un enfoque
lo más fino posible con los dos ojos abiertos. Entonces debe jugarse con los anillos de ambos
oculares hasta que la imagen sea nítida y la visión sea cómoda.
-ESPEJO. La luz que sale de la fuente de iluminación atraviesa el condensador,

el diafragma, la preparación y el objetivo que se esté usando. Como la luz se propaga en
línea recta, para no utilizar oculares en posición vertical que obligarían al observador
a adoptar una postura forzada, en el interior del tubo del microscopio existe un espejo
que desvía la luz de modo que el ángulo de los oculares con respecto a la vertical sea
cómodo para el observador.
-PLATINA, AROS DE ENFOQUE Y TORNILLOS DE MOVIMIENTO DE

LA PREPARACIÓN.
Debajo del revólver de objetivos existe una platina que permite:

a) Fijar la preparación en una posición horizontal.
b) Desplazarla con precisión durante su observación.
c) Realizar el enfoque usando distintos objetivos y grosores de
portaobjetos y extensión.
 La fijación de un portaobjetos a la platina se realiza abriendo la

pinza con ayuda de su tirador, poniendo en contacto una esquina del
portaobjetos con el marco fijo situado sobre la platina y cerrando con
suavidad la pinza, de modo que el portaobjetos quede fijado. La
extensión de la muestra a observar siempre estará en la cara superior
del portaobjetos.
 Para centrar la preparación de modo que haya una zona de interés bajo
el objetivo que se vaya a emplear podemos guiarnos por el círculo
iluminado que se forma en el portaobjetos. Allí debemos situar una zona
de interés. Esto lo logramos usando los tornillos de movimiento de la
preparación, que suelen situarse en posición vertical debajo de la
platina y a su derecha. Uno de los tornillos permite mover la
preparación de izquierda a derecha y el otro de delante hacia atrás. Suele

haber dos escalas milimetradas fijadas a partes fijas y móviles de la
platina que permiten conocer las coordenadas de la posición de una zona
determinada de interés de la preparación.
 La platina se sube y se baja (y con ella la preparación) utilizando los

aros o anillos de enfoque. Son dos, dispuestos de modo concéntrico. Su
situación en el microscopio es en la parte más alejada del observador,
cerca de la base, junto a la platina. Cada aro es doble: hay uno en la parte
derecha y otro en la parte izquierda del cuerpo del microscopio. Cada aro
es solidario a su correspondiente del lado opuesto, de modo que gira con
él. Esto se ha hecho así para permitir el enfoque con ambas manos. El aro
de mayor diámetro se conoce como aro de enfoque grueso o grosero;
con un pequeño ángulo de giro desplaza relativamente mucho la platina.
El aro de enfoque fino con el mismo ángulo de giro produce un
desplazamiento vertical de la platina mucho menor. El procedimiento de
enfoque se verá más adelante.
-REVÓLVER. El revólver es una base donde van fijados los diferentes

objetivos a utilizar. Es giratorio, lo que permite cambiar de objetivo en uso. Para ello
nunca debe empujarse a los objetivos, sino que el giro del revólver se logrará
accionándolo en su rueda dentada. La posición correcta de cada objetivo se hará notar
por un pequeño "clic" que normalmente no se oye sino que se siente al tacto.
-OBJETIVOS. Cada uno de los pequeños cilindros unidos al revólver es un

objetivo. Cada objetivo contiene un sistema de lentes. Hay varios objetivos, cada uno
de ellos con distinto poder de aumento. Los más frecuentes son: 4 ó 5, 10, 40 y 100
aumentos (4-5X, 10X, 40X y 100X). Los de 4, 5, 10 y 40 aumentos se llaman objetivos
secos porque no se sumergen en aceite de inmersión para usarlos.
-Objetivo de 4 ó 5 aumentos: se emplea para observar objetos
grandes (parásitos, etc.) o para localizar una zona de la preparación que merezca la
pena ver a mayor aumento.
-Objetivo de 10 aumentos: tiene usos similares al anterior y también
se usa en la observación de micelio de hongos.
-Objetivo de 40 aumentos: observación de células eucariotas
(animales, vegetales, protozoos y hongos). En general, observación de objetos de 5
micrometros a 20 µm de diámetro.
-Objetivo de 100 aumentos: (observación de bacterias). En general
se usa para la observación de objetos desde 0'2 micrometros hasta 3 ó 4 µm. Se le llama
objetivo de inmersión en aceite y suele estar marcado con "OIL" o "ACEITE",
indicando que debe usarse con aceite de inmersión (aceite de cedro u otro de índice de
refracción similar). Este objetivo requiere operar con un cuidado exquisito, pues su
distancia de trabajo (distancia entre la lente y el objeto para que éste se vea nítido en
el campo de trabajo) es de sólo una fracción de milímetro.
Para trabajar con él se deposita una gota de aceite de inmersión sobre la
preparación y después el extremo libre del objetivo se pone en contacto con el aceite de
inmersión. Este aceite tiene un índice de refracción similar al del vidrio. Es necesario su
uso porque a la amplificación a la que se trabaja, las diferencias en el índice de

refracción entre el aire y el vidrio para las distintas longitudes de onda de la luz
impedirían observar adecuadamente las bacterias y otros objetos de tamaño similar.
El índice de refracción depende de la velocidad con la que la luz atraviesa un
material.
-POTENCIA CONJUNTA DEL SISTEMA DE LENTES. Como hemos visto,

son dos los sistemas de lentes de los que consta un microscopio óptico: los objetivos
(varios secos de diferente potencia y uno de inmersión) que están montados sobre el
revólver y los oculares. La amplificación total de una imagen que proporciona un
determinado microscopio es el resultado de multiplicar la amplificación que
proporcione el objetivo por la amplificación del ocular que se estén utilizando.
OBJETIVO AUMENTO OCULAR AMPLIFICACIÓN

TOTAL
Débil seco 10X 10X 100 aumentos
Fuerte seco 40-45X 10X 400-450 aumentos
Inmersión 90-100 10X 900-1000 aumentos
El número de aumentos se refiere al aumento en longitud: esto significa que

con 1.000 aumentos un objeto circular de 1 micrometro (0'001 mm) de diámetro se
observará como si midiese 1 mm de diámetro.
4. INSTALACIÓN DEL MICROSCOPIO Y DEL OBSERVADOR.

El microscopio.
 Debe permanecer siempre tapado para proteger sus componentes ópticos

del polvo.
 Tras destaparlo, debe procederse a situarlo en la mesa de trabajo frente al
observador. Esta mesa debe ser plana y horizontal. Debe estar situada en
un lugar sin humedad, calor, polvo ni vibraciones.
 También debe eliminarse cualquier luz parásita o demasiado intensa que
incida sobre el lugar de trabajo (luz solar directa, en particular) para
evitar la pronta fatiga visual del observador. En determinadas aplica-
ciones, como la microscopía de fluorescencia, es necesario que el
microscopio se encuentre en un cuarto oscuro.
El observador.
 Debe estar sentado frente al microscopio en un asiento que permita

acercar sus ojos a los oculares con sólo inclinar ligeramente la cabeza.
 La espalda debe permanecer recta y ligeramente inclinada hacia adelante.
 Tras enchufar el microscopio a la toma de corriente, se encenderá la
fuente de iluminación pulsando el interruptor. Esta fuente de
iluminación, situada en la base, suele ser una lámpara de filamento
incandescencia clásica o halógena.
5. PROCEDIMIENTO DE ENFOQUE.
Enfocar la preparación consiste en situarla a la distancia del objetivo que

permita su observación nítida. Esta distancia se conoce como distancia de trabajo. Es
tanto menor cuanto mayor es el poder amplificador del objetivo, de modo que llega a ser
de menos de 1 mm para los objetivos de 40 y de 100 aumentos. Esto hace que sea
preciso actuar de modo cuidadoso y sistemático para evitar contactos de la lente del
extremo del objetivo con la preparación, pues esto podría dañar el objetivo.
1. En primer lugar la platina debe bajarse hasta una distancia prudencial del
revólver que asegure que la preparación no va a contactar con el más largo
de los objetivo. Esto se logra accionando el aro de enfoque grueso.
2. A continuación debe colocarse el portaobjetos en la platina como se

describió antes.
3. Después se centrará la preparación y se hará girar el revólver de modo que

se sitúe en la posición de uso el objetivo de 4 ó 5 aumentos.
4. Entonces, observando la preparación a simple vista, se acercará la

preparación al objetivo girando el aro de enfoque grueso en sentido
contrario al anterior. Se acercará todo lo que el instrumento permita, pero sin
dejar que la preparación contacte con el objetivo. Normalmente los objetivos
de 5 y 10 aumentos no llegan a tocar la preparación, pero los de 40 y el de
inmersión sí pueden chocar con ella. Debe recordarse el sentido de giro
usado para elevar la platina, pues para bajarla se girará al revés, obviamente.
5. Seguidamente, observando a través de los oculares, se girará lentamente el

tornillo de enfoque grueso en sentido contrario al anterior, de modo que la
platina baje. Esto continuará haciéndose hasta que se visualice la preparación
más o menos enfocada.
6. El enfoque se hará más preciso con ayuda del aro de enfoque fino.
Entonces, si es necesario, se accionarán los anillos de compensación de
dioptrías de los oculares hasta optimizar la visión.
PARA CAMBIAR DE OBJETIVO, en primer lugar se hará bajar la platina hasta una
distancia prudencial. A continuación, se hará girar el revólver hasta situar en la posición
de uso el objetivo deseado (debe notarse un clic) y se repetirá el procedimiento anterior.
En caso de querer usar el objetivo de inmersión en aceite, se depositará una sola gota de
aceite en la zona que más interese de la preparación. Hay quien recomienda limpiar el
objetivo de inmersión tras su uso con un paño no abrasivo; otros afirman que, puesto
que el aceite no perjudica la lente, lo mejor para su conservación es no limpiarlo tras
cada uso, pues de este modo se evitan frotes reiterados que pueden ocasionar arañazos.

6. OPTIMIZACIÓN DE LA VISIÓN: USO DE DIAFRAGMA Y
CONDENSADOR.
Debajo de la platina y por encima de la fuente de luz se encuentran el diafragma
y el condensador.
El condensador es una lente que concentra el haz de luz haciéndolo converger
en la zona centrada del portaobjetos. De este modo aumenta la intensidad de la
iluminación. Esto es necesario cuando se trabaja a gran aumento. El condensador se
manipula con una palanquita cuya forma y posición puede variar de un fabricante a otro.
El diafragma es una membrana de apertura variable similar a los conocidos

diafragmas de las cámaras fotográficas. Se utiliza principalmente para observaciones en
fresco (sin colorantes). Como la mayoría de los microorganismos tienen índices de
refracción similares a los del medio acuoso en el que están suspendidos, resultan
difícilmente visibles a menos que ellos o la técnica sufran alguna modificación. La
disminución de la apertura del diafragma puede permitir la visualización de varios de
los protozoos, hongos y otras entidades microscópicas. Esto se debe a que la luz incidirá
sobre los bordes del objeto formando un ángulo más agudo, aumentando así el
contraste.
Acabamos de decir que el diafragma controla el contraste y el condensador

controla la intensidad de la iluminación. Esto es cierto para la mayoría de los
microscopios, pero hay que tener en cuenta que en algunos de estos instrumentos,
debido a sus características constructivas, si se cambia la distancia entre el condensador
y la preparación también se puede hacer que cambie el contraste. En algunos
microscopios el contraste se controla incluso mejor desde el condensador que desde el
diafragma.
7. CUIDADOS ANTES, DURANTE Y DESPUÉS DEL USO DEL

MICROSCOPIO.
El microscopio necesita limpieza cotidiana para conservarlo en buenas
condiciones de trabajo y asegurar resultados fiables cuando sea empleado. El equipo
necesario es:
1. Piezas de trapos viejos y un pañuelo fino, de lino, que estén limpios.
2. Papel de seda especial para lentes o, en su defecto, papel blanco absorbente o
papel de liar cigarros.
3. Frasco pequeño de xilol o tolueno.
4. Cubierta de material plástico.
5. Pincel fino o brocha especial para limpiar lentes.

7.1. Limpieza de los objetivos.
-Objetivos secos. Exhalar aliento sobre la lente y limpiarla con un trapo suave,
moviéndolo de lado a otro y no en círculos. El polvo de los objetivos se quita
arrojándoles aire con una pera de goma. Si es necesario, se limpia el polvo remanente
usando un pincel fino.
-Objetivos de inmersión en aceite. Quitar el aceite con papel especial para lentes,
papel absorbente o papel de fumar. Si quedan restos del aceite de inmersión o se ha
empleado aceite de madera de cedro, humedecer el papel muy ligeramente con xilol o
tolueno y, finalmente, limpiar la lente con papel seco. No abusar del xilol porque
desgasta el cemento que une las piezas del objetivo.
7.2. Limpieza de los oculares.
1. Limpiar la superficie superior de las lentes más altas (en la que se aplica el
ojo) con un trapo suave o papel.
2. Limpiar la superficie interior de la lente más baja, la que se encuentra dentro
del tubo del microscopio, con el pincel fino.
3. Si hay polvo en el interior del ocular, destornillar la lente más alta y limpiar
las lentes interiormente empleando aire, aplicado con una pera de goma y el pincel fino.
7.3. Limpieza del condensador y la pletina.
El condensador se limpia de la misma manera que los objetivos, con un trapo

suave o un pincel humedecido en xilol.
La platina se puede limpiar usando papel absorbente impregnado en vaselina.
7.4. Limpieza del brazo y la columna.
Limpiar con un trapo suave y que no desprenda pelusa. Nunca se debe usar xilol, ya que
puede desprender la pintura del microscopio.
7.5. Después de su uso, para guardarlo.
Se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta el

tope; el condensador debe estar en su posición más baja, para evitar que tropiece con
alguno de los objetivos.
Guárdese en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la formación de
hongos.
Ciertos ácidos y otras sustancias químicas que producen emanaciones fuertes deben
mantenerse alejados del microscopio.

8. PRECAUCIONES EN EL USO Y MANTENIMIENTO.
1. No se deben tocar nunca las lentes con los dedos.
2. Si las lentes se ensucian, nunca se deben limpiar con etanol.
3. Nunca se debe emplear papel ordinario o algodón para limpiar las lentes porque
elimina la capa de antirreflectante. Se debe emplear un pincel fino o un papel de
fumar.
4. Nunca se deben dejar los portaobjetos puestos en la platina cuando no se esté
usando el microscopio.
5. Nunca se debe dejar el microscopio con aceite de inmersión en el objetivo.
6. Si involuntariamente los objetivos secos se manchan de aceite, se deben limpiar
inmediatamente con papel de fumar.
7. Si el aceite se ha secado o endurecido en las lentes, se puede emplear un papel
humedecido con xilol. Nunca se debe sumergir el objetivo en xilol. Como se
indicó anteriormente, el xilol disuelve el cemento que une las piezas de los
objetivos.
8. Se debe mantener seca y limpia la platina.
9. Nunca se debe llevar el microscopio cogiéndolo por la base o la columna con
una mano. Se deben utilizar ambas manos de modo que una sujete el pie y la
otra la columna.
9. PROCEDIMIENTO DE ENFOQUE CON EL OBJETIVO DE

INMERSIÓN.
a. Baje totalmente la platina con el aro de enfoque grueso.

b. Accione el regulador eléctrico para obtener la máxima intensidad luminosa de la
bombilla.
c. Suba el condensador (si es posible) para ver claramente el círculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar.
d. Abra del todo el diafragma.
e. Gire el revólver dejándolo a medio camino entre el objetivo de inmersión y el de
40x.
f. Coloque el portaobjetos con la preparación en la platina sujetándolo con las
pinzas y situando la preparación sobre el círculo de luz.
g. Coloque UNA SOLA gota de aceite de inmersión sobre la preparación.
h. Termine de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de
inmersión. Debe sentirse en los dedos el ‘clic’.
i. Mire directamente al objetivo, suba la platina lentamente hasta que la lente toque
la gota de aceite y esté inmersa en ella. En este momento se nota como si la gota
ascendiera y se adosara a la lente.
j. Con los ojos situados en los oculares se procede cuidadosamente a enfocar con
el anillo o aro de enfoque fino. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación está en torno a una décima de milímetro, por lo que
hay que bajar muy poco a poco hasta observar la preparación con claridad.
k. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca
el objetivo de menos aumento girando el revólver. En este momento ya se puede
retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de
inmersión en posición de observación.
l. Se debe limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel
especial para óptica y si fuese necesario con un disolvente, utilizando muy poca
cantidad de éste.
Hay que tener en cuenta que una vez que se haya puesto aceite de inmersión
sobre la preparación ya no se puede usar el objetivo de 40X sobre esta zona, pues se
mancharía de aceite.
10. LIMITACIONES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO.

Podemos preguntarnos porqué habitualmente sólo se trabaja con un máximo de
1.000 aumentos en los microscopios ópticos y no se construyen con poderes de
amplificación mucho mayores. La limitación básica no es una cuestión de aumentos,
sino de poder de resolución, que es la capacidad de distinción entre dos puntos
adyacentes como distintos y separados. Por cuestiones relacionadas con la longitud de
onda de la luz visible en las que no vamos a entrar, la luz visible no permite distinguir
nítidamente objetos menores de 0'2 µm de diámetro. Con algunas modificaciones
pueden construirse microscopios ópticos de 2.000 o 3.000 aumentos. Sin embargo, los
microscopios ópticos de más de 2.000 o 3.000 aumentos proporcionarán imágenes más
grandes pero más borrosas.

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6. OPTIMIZACIÓN DE LA VISIÓN: USO DEL DIAFRAGMA Y DEL

7. CUIDADOS ANTES, DURANTE Y DESPUÉS DEL USO DEL MICROSCOPIO.

8. PRECAUCIONES EN EL USO Y MANTENIMIENTO.

9. PROCEDIMIENTO DE ENFOQUE CON EL OBJETIVO DE INMERSIÓN.

10. LIMITACIONES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO.

Desde los comienzos de la microbiología, el microscopio óptico se transformó

2.1. Tipos de microscopios.

Hay dos grandes tipos de microscopios, según el fundamento básico de su

1. Microscopios ópticos: producen imágenes amplificadas mediante el uso

2. Microscopios electrónicos: en lugar de radiación electromagnética

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3. Microscopio de contraste de fase. Gracias a la utilización de

4. Microscopio de luz ultravioleta.

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Es necesario puntualizar que los instrumentos de luz UV, fluorescencia o contraste de

3. DESCRIPCIÓN Y USO DEL MICROSCOPIO DE CAMPO

3.1. Introducción y esquema.

Los diferentes diseños existentes tienen pocas variaciones de unos a otros. En el

La mayor parte de las observaciones microscópicas se realizan con microscopios

En este tipo de microscopios un conjunto de lentes finamente talladas forman

El aumento total de la muestra se calcula multiplicando el aumento

Además del aumento, una propiedad importante de un microscopio es su

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Bajo las condiciones normales de trabajo el campo de visión de un microscopio

Descripción y uso de las distintas partes del microscopio de campo claro.

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-ESPEJO. La luz que sale de la fuente de iluminación atraviesa el condensador,

-PLATINA, AROS DE ENFOQUE Y TORNILLOS DE MOVIMIENTO DE

Debajo del revólver de objetivos existe una platina que permite:

 La fijación de un portaobjetos a la platina se realiza abriendo la

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 La platina se sube y se baja (y con ella la preparación) utilizando los

-REVÓLVER. El revólver es una base donde van fijados los diferentes

-OBJETIVOS. Cada uno de los pequeños cilindros unidos al revólver es un

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-POTENCIA CONJUNTA DEL SISTEMA DE LENTES. Como hemos visto,

OBJETIVO AUMENTO OCULAR AMPLIFICACIÓN

El número de aumentos se refiere al aumento en longitud: esto significa que

4. INSTALACIÓN DEL MICROSCOPIO Y DEL OBSERVADOR.

 Debe permanecer siempre tapado para proteger sus componentes ópticos

 Debe estar sentado frente al microscopio en un asiento que permita

Enfocar la preparación consiste en situarla a la distancia del objetivo que

2. A continuación debe colocarse el portaobjetos en la platina como se

3. Después se centrará la preparación y se hará girar el revólver de modo que

4. Entonces, observando la preparación a simple vista, se acercará la

5. Seguidamente, observando a través de los oculares, se girará lentamente el

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El diafragma es una membrana de apertura variable similar a los conocidos

Acabamos de decir que el diafragma controla el contraste y el condensador

7. CUIDADOS ANTES, DURANTE Y DESPUÉS DEL USO DEL

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7.2. Limpieza de los oculares.

7.3. Limpieza del condensador y la pletina.

El condensador se limpia de la misma manera que los objetivos, con un trapo