1.

CONTROL HIGIÉNICO
Procedimiento
1.1. Preparación de la muestra
1.1.1. En un Erlenmeyer o frasco schott de 250 ml conteniendo 90 ml APB
(Agua Peptonada Bufferizada), pesar asépticamente y disolver 10 gramos
de la muestra a examinar.
1.2. Método de recuento por siembra en profundidad
1.2.1. Recuento de Microorganismos Aerobios Totales
1.2.1.1. Transferir 1 ml de la solución preparada en “Preparación de la
muestra” a placa de Petri estéril, colocar entre 15-20 ml de Agar
Digerido de Caseína-Soja (TSA) previamente fundido y enfriado
hasta 45ºC.
1.2.1.2. Repetir el punto anterior por duplicado.
1.2.1.3. Homogeneizar mediante suaves movimientos circulares y dejar
enfriar bajo el flujo laminar.
1.2.1.4. Tapar las placas e incubar a 30-35ºC en posición invertida (tapa
hacia abajo) de 3 a 5 días. Luego de la incubación examinar las
placas para ver si hubo desarrollo.
1.2.1.5. Terminada la incubación, realizar el recuento obtenido en las
placas, promediar y multiplicar por un factor de 10, expresar el
resultado en unidades de UFC/g de muestra. Si no se detectan
colonias en las placas expresar los resultados como menos de 10
UFC/g de muestra.
1.2.2. Recuento combinado de Hongos filamentosos y levaduras
1.2.2.1. Transferir 1 mL de la solución preparada en “Preparación de la
muestra” a placa de Petri estéril, colocar entre 15-20 mL de Agar
Sabouraud (SDA) previamente fundido y enfriado a 45º C.
1.2.2.2. Repetir el punto anterior por duplicado.
1.2.2.3. Homogeneizar mediante suaves movimientos circulares y dejar
enfriar bajo el flujo laminar.
1.2.2.4. Tapar las placas e incubar a 20-25ºC durante un período de 5 a
7 días.
1.2.2.5. Terminada la incubación, realizar el recuento obtenido en las
placas, promediar y multiplicar por un factor de 10, expresar el
resultado en unidades de UFC/g. Si se detectan colonias en las
placas expresar los resultados como menos de 10 UFC/g de
muestra.
1.3. Determinación de Microorganismos específicos:
1.3.1. Preparación de homogenato:
1.3.1.1. Tomar 10 ml de la solución preparada en el ítem “Preparación de
la muestra” y transferir a 90 ml de caldo casoy (TSB).
1.3.1.2. Incubar a 30°C-35°C durante 18 a 24 hs para continuar con la
investigacion de Escherichia coli.
1.3.2. Investigación de Escherichia coli.
1.3.2.1. Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en
el punto “Preparación de homogenato”, y realizar un repique sobre
placa de Agar Mac Conkey. Incubar a 30°C- 35°C durante 18-72 hs.
1.3.2.2. Si hay desarrollo de colonias, identificarlas según el POE-CC-
MB-003 CEPARIO DE MICROBIOLOGIA CONTROL USO,
MANTENIMIENTO E IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS,
VERSIÓN VIGENTE, para descartar o confirmar presencia de
Escherichia coli. De no haber desarrollo expresar el resultado como
Ausencia/g.
 1.3.3. Investigación de Pseudomonas aeruginosa.
1.3.3.1. Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en
el punto “Preparación de homogenato”, y realizar un repique sobre
placa de Agar Cetrimide. Incubar a 30°C- 35°C durante 18-72 hs.
1.3.3.2. Si hay desarrollo de colonias generalmente verdosas,
identificarlas según el POE-CC-MB-003 CEPARIO DE
MICROBIOLOGIA CONTROL USO, MANTENIMIENTO E
IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS, VERSIÓN VIGENTE,
para descartar o confirmar presencia de Pseudomonas aeruginosa.
De no haber desarrollo expresar el resultado como Ausencia/g.
1.3.4. Investigación de Staphylococcus aureus.
1.3.4.1. Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en
el punto “Preparación de homogenato”, y realizar un repique sobre
placa de Agar Manitol Saldado. Incubar a 30°C- 35°C durante 18-72
hs.
1.3.4.2. Si hay desarrollo de colonias típicas amarillas o blancas
rodeadas de una zona amarilla, identificarlas según el POE-CC-MB-
003 CEPARIO DE MICROBIOLOGIA CONTROL USO,
MANTENIMIENTO E IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS,
VERSIÓN VIGENTE, para descartar o confirmar presencia de
Staphylococcus aureus. De no haber desarrollo expresar el resultado
como Ausencia/g.
1.4. Especificación
 Recuento en placa de microorganismos aerobios totales: Menor o igual a
2000 UFC/g.
 Recuento de Hongos y Levaduras totales: Menor o igual a 200 UFC/g.
 Investigación de Escherichia coli: Ausencia/g.
 Investigación de Pseudomonas aeruginosa: Ausencia/g.
 Investigación de Staphylococcus aureus: Ausencia/g.