 CONTROL HIGIENICO

Proceder según POE-CC-MB-008 “Control higiénico de material de empaque primario”

versión vigente.

Preparación de la muestra

- Enjuague: Colocar 10 unidades de Actuador de Tukol Buc Spray y colocarlos en un

recipiente estéril (Frasco/Bolsa de muestreo) con 100 mL solución fisiológica estéril
(también puede utilizarse agua destilada o agua peptona, estéril). Asegurar que
todas las unidades queden totalmente sumergidas. Dejar reposar 2 a 5 minutos
bajo flujo laminar.

Recuento en placa de microorganismos aerobios totales

- Tomar 1 mL del enjuague de “Preparación de la muestra” y colocarlo en placa

estéril. Agregar 15-20 mL de TSA, previamente fundido y enfriado a menos de
45ºC.

- Homogeneizar mediante suaves movimientos circulares y dejar enfriar bajo el flujo

laminar.

- Realizar por duplicado.

- Tapar las placas e incubar 30-35ºC en posición invertida (tapa hacia abajo) durante
3-5 días (*).

- Finalizada la incubación promediar el crecimiento de ambas placas y multiplicar por

10. Expresar en términos de UFC/unidad. En caso de no observarse crecimiento,
informar <10 UFC/unidad.

Recuento en placa de hongos filamentosos y levaduras

- Tomar 1 mL del enjuague de “Preparación de la muestra” y colocarlo en placa

estéril. Agregar 15-20 mL de SDA, previamente fundido y enfriado a menos de
45ºC.

- Homogeneizar mediante suaves movimientos circulares y dejar enfriar bajo el flujo

laminar.

- Realizar por duplicado.

- Tapar las placas e incubar 20-25ºC en posición invertida (tapa hacia abajo) durante
5-7 días (*).
- Finalizada la incubación promediar el crecimiento de ambas placas y multiplicar por
10. Expresar en términos de UFC/unidad. En caso de no observarse crecimiento,
informar <10 UFC/unidad.

(*) Revisar las placas a diario ya que hay microorganismos que se desarrollan de
forma invasiva a las 48 hs. de ser incubadas.

Investigación de microorganismos específicos

- Enriquecimiento

 Tomar 10 mL del enjuague de “Preparación de la muestra” y transferir a 90 mL

de TSB.
 Incubar a 30 -35º C durante 18 a 24 hs para la investigación de Pseudomonas
aeruginosa y Staphylococcus aureus; y continuar incubando a la misma
temperatura por 24 a 48 hs más, para la investigación del complejo
Burkholderia cepacea.
 Observar el medio en busca de desarrollo, en forma de turbidez.

Investigación de Pseudomonas aeruginosa:

- Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en el punto
“Enriquecimiento” y realizar un repique sobre placa de Agar Cetrimida. Incubar a
30°C- 35°C durante 18-72 hs.

- Si hay desarrollo de colonias generalmente verdosas con halo azul y fluorescentes

a la luz UV (254 ηm), identificarlas según POE CC-MB-003 CEPARIO DE
MICROBIOLOGIA CONTROL USO MANTENIMIENTO E IDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS, versión vigente, para descartar o confirmar la presencia de
Pseudomonas aeruginosa.

Investigación de Staphylococcus aureus

- Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en el punto
“Enriquecimiento” y realizar un repique sobre placa de Agar Manitol Salado.
Incubar a 30°C- 35°C durante 18-72 hs.

- Si hay desarrollo de colonias típicas amarillas o blancas rodeadas de una zona

amarilla, identificarlas según POE CC-MB-003 CEPARIO DE MICROBIOLOGIA
CONTROL USO MANTENIMIENTO E IDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS, versión vigente, para descartar o confirmar la presencia de
Staphylococcus aureus
Investigación del complejo Burkholderia cepacea

- Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en el punto
“Enriquecimiento”, y realizar un repique sobre placa de agar selectivo para
Burkholderia cepacia (BCSA), e incubar a 30 °C - 35 °C durante 48 - 72 horas.
Generalmente las colonias del cBc desarrollan en el medio con las siguientes
características: colonias de color marrón verdoso con halos de color amarillo o
colonias de color blanco rodeadas de una zona de color rosado–rojo. Toda colonia
que desarrolle en el medio selectivo para cBc debe ser identificada según el POE-
CC-MB-003 CEPARIO DE MICROBIOLOGIA CONTROL USO, MANTENIMIENTO
E IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS, VERSIÓN VIGENTE, para
descartar o confirmar presencia de del complejo Burkholderia cepacea.

- Especificaciones:

-Recuento de bacterias aerobias totales < 200 UFC/unidad

-Recuento de hongos filamentosos y levaduras < 20 UFC/unidad

- Ausencia de Staphylococcus aureus / unidad

- Ausencia de Pseudomona aeruginosa / unidad

- Ausencia del complejo Burkholderia cepacea/ unidad