1.

CONTROL HIGIÉNICO

1.1. Preparación de la muestra

- Pesar 10 gr de producto terminado y agregar 90 mL de LPTB. Agitar hasta
disolución total. Esta dilución contiene 1 g de producto cada 10 mL de solución.

1.2. Recuento en placa de microorganismos aerobios totales

- Colocar 1 mL de la solución preparada en “Preparación de la muestra” en placa
estéril. Agregar 15-20 mL de Agar Casoy (TSA), previamente fundido y enfriado
a menos de 45ºC.
- Homogeneizar mediante suaves movimientos circulares y dejar enfriar bajo el
flujo laminar.
- Realizar por duplicado.
- Tapar las placas e incubar 30-35ºC en posición invertida (tapa hacia abajo)
durante 3 – 5 días (*).
- Finalizada la incubación contar el número de colonias de ambas placas y
promediar. El resultado obtenido debe multiplicarse por 10, que es el factor de
dilución empleado. Expresar el resultado en términos de UFC/g. En caso de no
observarse crecimiento, informar <10 UFC/g

1.3. Recuento en placa de hongos y Levaduras

- Colocar 1 mL de la solución preparada en “Preparación de la muestra” en placa
estéril. Agregar 15-20 mL de Agar Sabouraud (SDA), previamente fundido y
enfriado a menos de 45ºC.
- Homogeneizar mediante suaves movimientos circulares y dejar enfriar bajo el
flujo laminar.
- Realizar por duplicado.
- Tapar las placas e incubar a 20-25ºC durante de 5 a 7 días (*).
- Finalizada la incubación contar el número de colonias de ambas placas y
promediar. El resultado obtenido debe multiplicarse por 10 que es el factor de
dilución empleado. Expresar el resultado en términos de UFC/g. En caso de no
observarse crecimiento, informar < 10 UFC/g.
(*) Revisar las placas a diario ya que hay bacterias que se desarrollan de forma
invasiva a las 48 hs. de ser incubadas.

1.4. Investigación de Microorganismos específicos y Microorganismos objetables

1.4.1. Enriquecimiento de muestra

- Tomar 10 mL de la solución preparada en “Preparación de la muestra” y
transferir a 90 mL de caldo casoy (TSB).
- Incubar a 30°C-35°C durante 18 a 24 hs para la investigación de
Escherichia coli y 48 a 72 hs para la investigación de complejo
Burkholderia cepacia.
 - Observar el medio en busca de desarrollo, en forma de turbidez.

1.4.2. Investigación de Escherichia coli

- Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en el punto
1.4.1., y realizar un repique sobre placa de Agar Mac Conkey. Incubar a
30°C- 35°C durante 18-72 hs.
- Si hay desarrollo de colonias típicas amarillas o blancas rodeadas de una
zona amarilla, identificarlas según el POE-CC-MB-003 CEPARIO DE
MICROBIOLOGIA CONTROL USO, MANTENIMIENTO E
IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS, VERSIÓN VIGENTE, para
descartar o confirmar presencia de Escherichia coli. De no haber desarrollo
expresar el resultado como Ausencia/g.
- En caso de confirmarse la presencia de Escherichia coli la muestra no
cumple el ensayo.

1.4.3. Investigación del complejo de Burkholderia cepacia (cBc)

- Tomar con ansa estéril una muestra del caldo TSB preparado en el punto
1.4.1., y realizar un repique sobre placa de agar selectivo para
Burkholderia cepacea (BCSA), e incubar a 30 °C - 35 °C durante 48 - 72
horas. Generalmente las colonias del cBc desarrollan en el medio con las
siguientes características: colonias de color marrón verdoso con halos de
color amarillo o colonias de color blanco rodeadas de una zona de color
rosado–rojo.
- Toda colonia que desarrolle en el medio selectivo para cBc debe ser
identificada según el POE-CC-MB-003 CEPARIO DE MICROBIOLOGIA
CONTROL USO, MANTENIMIENTO E IDENTIFICACION DE
MICROORGANISMOS, VERSIÓN VIGENTE, para descartar o confirmar
presencia de del complejo Burkholderia cepacia.
- La muestra cumple con el ensayo si la identificación es negativa. De no
haber desarrollo expresar el resultado como Ausencia/g.

1.4.4. Investigación de Microorganismos Objetables

- Finalizada la incubación del caldo TSB tomar una ansada y realizar un
repique en placa de TSA, incubar a 30º-35º C durante 18-72 hs.
- Si hay desarrollo de colonias, proceder según el POE-CC-MB-054
MICROORGANISMOS OBJETABLES, VERSIÓN VIGENTE.

1.5. Especificaciones:
- Recuento de aerobios totales: ≤2000 UFC/g
- Recuento de hongos y levaduras: ≤200 UFC/g
- Investigación de Escherichia coli: Ausencia/g