Capítulo 5

Técnicas de Tinción Histoquímicas

 Técnicas de Tinción Histoquímicas
• Definición de histoquímica: la histoquímica se define como la
“aplicación de reacciones químicas y bioquímicas sobre tejidos
histológicos con el fin de localizar y determinar ciertas
sustancias o su actividad y microorganismos”.
 Técnicas de Tinción Histoquímicas
• Sustancias a reconocer:

• a) Hidratos de carbono
• b) Lípidos o grasas
• c) Proteínas
• d) Iones y pigmentos
• e) Microorganismos
II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• Se basan en la detección de grupos carbonilo formados sobre
los hidratos de carbono por oxidación previa:
II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• Técnica de Pas
• Es la más utilizada en muchos laboratorios, consiste en oxidar
los tejidos mediante el ácido periódico (HIO4) para incrementar
el número de grupos carbonilo presentes (aldehído o cetona)
presentes en ellos, de forma que puedan ser mostrados
posteriormente mediante reactivo de SCHIFF.
II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• Técnica de Pas
• El material de PAS positivo se ve rojo oscuro o magenta.
Detecta polisacáridos simples y complejos ( neutros y
mucoproteínas).
 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• Técnica de Pas
• El material de PAS positivo se ve rojo oscuro o magenta.
Detecta polisacáridos simples y complejos ( neutros y
mucoproteínas).

• No se pueden detectar mediante esta técnica los

mucopolisacáridos.

• https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/protocolos/p-tinc
ion-pas-h.php
 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• Técnica de Pas

Magenta o rosa PAS positivo

Fuente:
https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/protocolos/p-tin
cion-pas-h.php
 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• Técnica de Pas

• Se emplea para ver moco o sustancias mucinosas, membranas

basales, muchos hongos y parásitos.
• La variante PAS-digestión con diastasa sirve para para
distinguir si el material PAS positivo es glucógeno en cuyo caso
desparecerá la diastasa.
 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• Técnica de Pas

• Protocolo:

• 1) Desparafinar e hidratar (xilol y decrecientes alcoholes).

• 2) Ácido periódico 0,5 %, 5 min.
• 3) Lavar en agua.
• 4) Reactivo de Schiff, 15-30 min.
 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• AZUL ALCIÁN

• Técnica para determinar mucopolisacáridos ácidos. El pH debe

estar en torno a 2,4-2,6 y los mucopolisacáridos ácidos
(carboxilos y sulfatos) se tiñen de azul.

• Si se usa un pH inferior a 1 o 0,5 solo se tiñen de azul los

mucopolisacáridos ácidos sulfatados.
 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
• AZUL ALCIÁN

• PROCEDIMIENTO:

• Filtrar todas las soluciones antes de usar. Las soluciones son estables durante dos semanas
aproximadamente.

• Desparafinar e hidratar.

• Tratar con la solución deseada de azul alcián durante 30 min.

• Lavar con auga

• Contrastar, si se desea, con rojo nuclear

• Deshidratar, aclarar y montar.

 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
AZUL ALCIÁN

Este método de tinción se emplea para detectar polisacáridos en tejidos, tanto glucógeno como
mucopolisacáridos. También es una buena tinción para membranas basales y cartílago. Cualquier fijador
es apropiado para esta técnica.

La combinación del PAS con el azul alcián nos permite distinguir a los
mucopolisacáridos ácidos, teñidos con el azul alcián, del resto de polisacáridos.
Todos los polisacáridos se tiñen con el PAS.
 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
AZUL ALCIÁN

(imagen tinción PAS-AZUL ALCIÁN)

 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
AZUL DE TOLUIDINA

Es la técnica de metacromasia más habitual cuando un colorante puro tiñe una estructura
tisular de “color diferente” al de la solución diluida, La estructura responsable de este cambio
de color se llama “cromotropa” y pueden ser mucopoliscáridos ácidos , ácidos nucleicos,
lípidos de carácter ácido y partículas de sílice, las sustancias .
 II. TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS PARA
HIDRATOS DE CARBONO
Mucicarmín:

Resultado

Mucinas de rosa oscuro a rojo

Núcleos azul - violeta

Otros componentes naranja

 II. Histoquímica de grasas, proteínas y
ácidos nucleicos
Rojo Congo: para detectar la presencia de proteína amiloide
 II. Histoquímica de grasas, proteínas y
ácidos nucleicos
Fontana-Masson: para detectar la presencia de melanina,
gránulos argentafines y cromafines o pigmentos como
lipofuscina. Se usa especialmente para diagnosticar
melanomas y tumores neuroendocrinos.
 II. Histoquímica de grasas, proteínas y
ácidos nucleicos
Grimelius: antiguamente se empleaba también para diagnosticar
tumores neuroendocrinos, porque detectaba las proteínas y los
gránulos argentafines y argirófilos.

Reticulina: Las técnicas de reticulina (Gomori, Gordon-Sweet)

sirven para distinguir diferentes tipos de colágeno, el maduro o
tipo I y los inmaduros o tipos III y IV, en marrón los primeros y en
negro estos últimos y para distinguir por ejemplo en negro las
membranas basales que tienen colágeno tipo IV.
 II. Histoquímica de grasas, proteínas y
ácidos nucleicos
Tricrómico de Masson: técnica muy utilizada que combina
distintos colorantes que tiñen de manera diversa distintas
sustancias: colágeno tipo I de azul oscuro y tipos III de azul claro;
mucina de verde o azul, núcleo de negro, queratina y músculo
liso de rojo.

Los usos más habitutales son las biopsias de hígado o

riñón.
 Identificación de grasa, lípidos o tejido
adiposo
• La identificación de grasas,lípidos o tejido adiposo es
importante porque se disuelven con la mayoría de los fijadores
durante el procesado, es mejor emplear material en
congelación. Las técnicas más habituales son

• Sudán y Oil red O

 Identificación de pigmentos e iones
metálicos
• AZUL DE PERLS

• Para detectar hierro tanto en forma iónica, formando sales

ferrosas y férricas como ligado a proteínas.
• Sirve para detectar hemosiderina

• Se observa el hierro en azul y los núcleos en rojo.

 Identificación de pigmentos e iones
metálicos
• VON KOSSA

• Se emplea para detectar sales de calcio, tanto el presente en

condiciones normales, como el que aparece de manera
patológica en distintas lesiones o áreas de calcificación en
tejidos desprovistos de ellas.
 Identificación de pigmentos e iones
metálicos
• Fontana Masson

• Se emplea para detectar melanina.

 Técnicas para microorganismos
• Giemsa

• Tinción muy habitual e importante que está formada por varios colorantes:
azul de metileno, (colorante metacromático) como tinte básico y eosina
como tinte ácido, que dan una amplia gama de colores. El pH de la
solución de coloración es crítico y se debe ajustar idealmente, según
diversos fijadores, en un rango entre 6,4-6,9 . Se usa para ver con más
detalle los núcleos y las características de la cromatina, identificar células
cebadas o mastocitos y tinción de bacterias y parásitos. Es especialmente
• Útil para detectar H pylori, Rickettsias y protozoos. Se observa el
citoplasma rosa, los núcleos azues, los glóbulos rojos de naranja, los
gránulos de las células cebadas de púrpura, las bacterias y parásitos
azules,
 Técnicas para microorganismos
Ziehl-Neelsen

Para detectar micobacterias, sobre todo bacilos

ácido-alcohol resistentes como el bacilo de la tuberculosis.
 Técnicas para microorganismos
GRAM

Distingue taxonómicamente las bacterias ( ya visto)

 Técnicas para microorganismos
PLATA DE METENAMINA Y OTRAS TÉCNICAS DE PLATA
Para detectar hongos y Pneumocystis (se visualizan de color
negro).

PAS

Se emplea para visualizar hongos

 TÉCNICAS DE HISTOQUÍMICA
ENZIMÁTICA
¿ En qué se basa?
Se basa en la metabolización de un sustrato mediante
enzimas.
La visualización se realiza con un colorante insoluble combinado
con la ventaja de localizar en el microscopio la actividad
enzimática.
Prácticamente cualquier enzima puede ser detectada

Actualmente en desuso debido al uso de la inmuno histoquímica

y de técnicas de patología molecular,
 TÉCNICAS DE HISTOQUÍMICA
ENZIMÁTICA
Descubierta por Pearse en los años 50.

Las técnicas de histoquímica enzimática se emplearon para

detectar infartos de miocardio, lesiones cerebrales o enfermedad
celíaca.
TÉCNICAS PARA LA DETERMINACIÓN DE
ENZIMAS
Para la determinación de enzimas casi todas las muestras se
realizan con tejido congelado porque muchas se inactivan con el
formol.
(Hielo seco a -80 grados o isopentano a -25ºC). Se suele
emplear un tubo Eppendorf ( Biopsias) o bolsa de plástico (
resecciones quirúrgicas).

Fundamental hacer cortes de sección finos.

 HISTOQUÍMICA DE LAS LECTINAS
• Las lectinas son proteínas que se unen a oligosacáridos o
carbohidratos de manera específica como los anticuerpos en
inmunohistoquímica para obtener una reacción colorimétrica.
• Son muy útiles para identificar distintos tipos de tumores.

• Usos:
• Marcadores tumorales
• Microbiología
• Serología
• Inflamación