TECNICAS HISTOLOGICAS: Ortocromacia: El tejido toma al colorante q se le está
aplicando
DEFINICION: Es el conjunto de operaciones que se somete un
material organizado para hacer posible su estudio por medio del
microscopio, posibilitando la observación de las estructuras no
visibles al ojo humano.
Colorantes tipo Acidos:
-Son para teñir el citoplasma.
-Cuando la propiedad colorante está en el radical ácido de la sal
neutra se habla de un colorante ácido que tiene carga negativa
-Las estructuras que se tiñen con colorantes ácidos por ejm el
citoplasma son acidófilas
Colorantes básicos:
-Son para teñir el núcleo
Cuando la propiedad colorante está en el radical básico de la
sal neutra se habla de un colorante básico que tiene carga
positiva
-Las estructuras que se tiñen con colorantes básicos por ejm el
núcleo son básicas
Colorantes: Todos pueden ser naturales y artificiales
Naturales: Pueden ser de origen animal y vegetal
Artificiales: Pueden ser pigmentos biliares y colorantes de la
anilina
Colorantes más usados:
Acidos: Eosina colorea el citoplasma de color rojo
Básicos: Hematoxilina: colorea el núcleo de color azul
Neutros: Sin cargas: Giemsa estudios de sangre, para
diferenciar bacterias gram posit-negat.
Metacromacia: El tejido toma coloración diferente a la q se le
aplica
Basofilia: El tejido tomo el colorante básico
Acidofilia: El tejido toma el colorante ácido
Diferencia entre frotis sanguíneo y corte histológico
PREPARACIÓN DE TEJIDOS MUERTOS
1.-Fijación: Para conservar el protoplasma.Al M.O: Formol-
Alcohol-Acetona. Al M.E: Acido crómico-Glutaldehido.
Se lava para quitar el exceso de fijador.
2.-Deshidratación: Pasa por concentraciones crecientes de
alcohol etílico.
3.-Aclaramiento: Se utiliza Xilol para eliminar el agente
deshidratante.
4.-Inclusión: Con parafina o con celoidina
o endurecimiento: Criostato por congelación-
Microtomo por inclusión.
METODOS HISTOLOGICOS
MÉTODO MEDIATO O POST-MORTEN:
Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de
pasos, la Técnica histológica.
a.-Obtención de muestra.
b.-Fijación. reacciones enzimáticas de autólisis.
c.-Inclusión.
d.-Corte y montaje.
e.-Coloración
f.-Montaje final.
MÉTODOS HISTOQUÍMICAS:
1.- Método de Pas (Ácido Periódico de Schiff).(Hidratos de
carbono)
2.-Método de Feulgen.(ADN)
3.- Método de Sudan.(Lipidos)
Cualidades de un buen fijador:
METODOS CITOQUIMICOS.
1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolíticos.
METODOS INMUNOCITOQUIMICOS.
Buen poder de penetración.
Conservar lo mas fielmente la estructura del tejido.
PASOS DE LA TECNICA: 4) No interferir y facilitar los procesos posteriores.
5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia.
1- OBTENCIÓN DEL MATERIAL: 6) Insolubilizar los componentes de los tejidos.
Pueden provenir de: 7) No producir estructuras artificiales.
* biopsias quirúrgicas
* material obtenido de necropsias Mecanismo de acción de los fijadores:
* utilizando animales de laboratorio a) Por coagulación de las proteínas, sin combinarse con ellas:
* estudios experimentales en animales alcohol, formol, ácido Pícrico, etc.
* material de cultivos de tejidos b) Formando combinaciones químicas con las sustancias
* frotis o extendidos orgánicas: ácido crómico, bicromato de potasio, de amoniaco,
etc.
c) Por reducción, al contacto con las sustancias orgánicas
formando un precipitado fino: ácido ósmico, bicloruro de
mercurio.
d) Por oxidación: bicromato de potasio.

3- INCLUSIÓN
2- FIJACIÓN: Es impregnar la pieza con una sustancia que le confiere
Es el proceso Físico (Histoquímico) que logra una situación dureza y permite obtener cortes uniformes y delgados.
estable de los constituyentes tisulares, interrumpiendo las En la técnica corriente, se utiliza la parafina; que es
insoluble en agua, está condicionada por la extracción de toda
el agua del material a incluir. Los pasos de la inclusión son los
siguientes:
Impregnación en parafina:
Es la inclusión propiamente dicha.
Confección del taco: Es la inclusión definitiva del trozo de
tejido. Se utiliza un molde metálico especial denominado barras
de Leuckart, donde se vierte parafina liquida (60°C).
TECNICAS HISTOQUIMICAS:
Son técnicas utilizadas para determinar la presencia y
localización de elementos químicos en el tejido mediante ciertos
colorantes afines.
A-Ácidos nucleicos: Azul de Metileno o de Toluidina y la
hematoxilina. La reacción de Feulgen, que es especifica para
ADN.
B-Hidratos de carbono: se utiliza la Reacción del PAS (ácido
peryodico y reactivo de Schiff) y para polisacáridos ácidos el
método del Azul de Alcian (Alcian Blue).
C-Lípidos: colorantes del tipo Sudan III, el Escarlata R o Sudan
IV, el Sudan negro B (Sudan black B).
También se pueden determinar ciertas sustancias utilizando las
Técnicas inmunohistoquimicas, usando anticuerpos específicos
marcados para ciertos elementos puntuales.
Coloración de Hematoxilina-Eosina
• Lámina de tiroides en que se
observan las células foliculares con
sus núcleos teñidos de azul
violáceo y el citoplasma de rosado.
• La eosina es un colorante ácido que
tiñe estructuras básicas de rojo o
rosa.
• La hematoxilina es un colorante
básico que tiñe las las estructuras
ácidas de azul purpúreo por lo que
es afín aa los núcleos, ribosomas y
RER, elementos ricos en y ARN
respectivamente.
COLORACIÓN DE GIEMSA
Representa el método estándar para la coloración de las células
Tricrómico de Masson
sanguíneas y de médula ósea.
-Los núcleos se tiñen de azul oscuro a violeta. • El Tricrómico de Masson permite
observar las fibras de colágeno
-El citoplasma toma un tono azul pálido verdes o azules.

• Es ampliamente utilizada para

identificar tejido conectivo.

• Produce tres colores:

• - Negro: (Hemat. Férrica): Núcleos
• - Azul (Azul de anilina):Colágeno.
• - Rojo: (Escarlata de
Biebrich):citoplasma, fibras
musculares, eritrocitos.
• La preparación observada
. corresponde a piel delgada.
-Los eritrocitos se tiñen de rosado pálido.

Coloración de PAS Hematoxilina Férrica

• La re acción de PAS o de Acido Peryódico de
Schiff es una técnica histoquím ica utilizada
para teñir c arbohidratos complejos de color
rojo osc uro o magenta.
• Preparación de papilas gustativas
• Es ampliame nte utilizado pa ra identificar con coloración de Hematoxilina
membranas, basales, mucopolisac áridos,
bordes e n cepillo como los pr esentes en los
Férrica.
túbulos renales y en el intestino delgado, así
como carbohidra tos complejos com o el
glucógeno. • Este método modificado del HE
• En la lámina a nexa se le observa tiñendo los
tiñe estructuras basófilas como el
folículos tiroide s re pletos de un coloide ADN y ARN y acidófilas como las
constituido por tiroglobulina.
mitocondrias.
 Diferencias entre cortes histológicos y frotis:

Coloración de Nissl Cortes histológicos. Abarcan la preparación de cortes

teñidos, delgados (menos de 5 micras, ó 0.005 mm) montados
sobre una laminilla, por debajo de un cuadro muy delgado de
vidrio llamado cubreobjetos

Frotis. El ejemplar es un líquido, o pequeños trozos sólidos

• Preparación de neuronas del
tronco encefálico efectuada con
coloración de Nissl.
• Utiliza un colorante básico para
teñir el RER presente en las
neuronas, el cuál aparece en
forma de grumos y se conoce
como sustancia de Nissl.
suspendidos en líquido. Se extiende el material sobre una
laminilla para microscopio y se permite que seque al aire o se
“fija” por rociado o inmersión en un líquido. Entonces, los frotis
fijados se tiñen, se tapan con un cubreobjetos y son
examinados con un microscopio

Coloración con reacción

inmunohistoquímica

• Preparación para observar

neuronas hipotalámicas mediante
técnicas utilizando reacciones
inmunohistoquímicas.