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Práctica 2. Técnicas especiales: Histoquímica e Inmunohistoquímica.

1- Establecer qué tiñe, qué color adquieren las estructuras y para que se usan cada
una de las siguientes tinciones:

• PAS

Periodic Acid-Schiff, es una de las tinciones más comúnmente utilizada en histología y se

utiliza para evidenciar la presencia de grupos aldehídos formados por oxidación previa de
los hidratos de carbono. tiñe de color magenta y azul los carbohidratos y el núcleo.

• Tricrómico

Emplea tres colorantes: la hematoxilina, la fucsina y la verde luz. Esta tinción es muy útil
para poner de manifiesto las fibras de colágeno, y el conectivo en general, en comparación
células musculares o epitelios. Se emplea mucho en la diagnosis de procesos tumorales.
Este tiñe de color azul claro el colágeno y mucinógeno, de rojo los músculos, la queratina,
citoplasma y, por último, el núcleo de azul oscuro. Hay muchas variantes de esta tinción
adaptadas a las necesidades particulares de cada laboratorio.

• Reticulina

Es una tinción muy útil para evidenciar lesiones de la pituitaria y malformaciones vasculares.
Tiñe de negro, purpura y gris la membrana basal y el colágeno.

• Oil red / Suddan Black

Se utiliza para la detección de grasas neutras o gránulos de polietileno en tejidos

histológicos, en la patología articular, así como en material de muestra citológico. Tiñe de
rojo o anaranjado los lípidos.

• Fontana

Utiliza la propiedad reducción del pigmento melanina para reducir las sales de plata que se
encuentran en la solución de tinción. Se encarga de teñir de negro la melanina.

• Perls

Pone de manifiesto la presencia de hemosiderina en el citoplasma de los hematíes en

sangre periférica o en médula ósea. Estos gránulos no se ven en frotis teñidos con tinciones
panópticas y, para poder observarlos, es necesario realizar esta tinción con la que se tiñen
de color azul turquesa.
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• Weigert

Es una combinación de tinciones utilizados en histología que resulta útil en la identificación

de fibras elásticas. Resulta de la combinación de Orceina, Resorcinol y Fucsina. Tiñe de
color azul, negro, rojo, azul oscuro y amarillo las fibras.

• Mucicarmin

Usado en la identificación de sitios de tumores primarios, ayudando a la distinción de

células escamosas indiferenciadas mucina-negativas de los adenocarcinomas mucina-
positivos. La cápsula de los criptococos (hongos) se tiñe de rosa oscuro. La tartrazina tiñe el
citoplasma de amarillo.

• Rojo Congo

Se usa para teñir preparaciones microscópicas, especialmente en tinciones para el

citoplasma y los eritrocitos. Verde manzana por birrefringencia de tinciones de rojo
congo bajo luz polarizada es indicativo de presencia de fibras amiloides. Tiñe de color rojo
anaranjado pálido y verde

• Giemsa

Este método tiene utilidad sobre todo para poner de manifiesto las rickettsias localizadas
dentro de las células huéspedes. Este tiñe de color rosado, morado y azul los eritrocitos,
citoplasma y núcleo.

• Grocott

Se usa para la identificación de hongos y bacterias, mayormente en muestras de pacientes

con infecciones respiratorias y neumonías. Este tiñe elementos fúngicos de color negro.

• Ziehl Neelsen

Es usada para la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR). tiñe de color

rojo-rosa.

• Gram

Se realiza sobre las bacterias para observarlas mejor bajo el microscopio. Según la
distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u
otra. Así, las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se
denominan Gram negativas. tiñe bacterias positivas de color azul-negro y las negativas de
color rojo-rosa.
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• Fite

El ácido se diluye para que los organismos acidorresistentes, por ejemplo, la micobacteria
atípica pueda ser teñida. Tiñe bacilos acido-alcohol resistentes y núcleos de mycobacterium

2- Defina inmunohistoquímica.

La inmunohistoquímica (IHC) es la aplicación más común de la inmunotinción. Implica el

proceso de identificación selectiva de antígenos (proteínas) en las células de una sección
de tejido mediante la explotación del principio de los anticuerpos que se unen
específicamente a los antígenos en los tejidos biológicos. Albert Coons conceptualizó y
puso en práctica por primera vez el procedimiento en 1941.

3- Mencione la diversidad de usos en los que tiene aplicabilidad.

La inmunohistoquímica (IHC) es una aplicación importante de los anticuerpos monoclonales

y policlonales para determinar la distribución tisular de un antígeno de interés para la salud
y la enfermedad. La IHC se utiliza ampliamente para el diagnóstico de cánceres; los
antígenos específicos de los tumores se expresan de novo o se regulan al alza en ciertos
cánceres. Este artículo trata de las diversas aplicaciones de la IHC en el diagnóstico de
enfermedades, y la IHC desempeña un papel importante en los laboratorios de diagnóstico
e investigación.

4- Enliste 20 marcadores más usados y qué tiñe cada uno.

• CD15 -> enfermedad de Hodgkin

• SIUD -> células de Schwann

• REN -> receptores musculares de estrógeno

• CD79a -> linfocitos B

• AE1 -> citoqueratina bajo pm

• CD31 -> células endoteliales

• AE3 -> citoqueratina alto pm

• CD30 -> células de red stemberg

• CD68 -> microfagos

• CD117 -> tumor de estroma gastrointestinal

• Actina -> musculo liso

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• CD3 -> linfocitos T

• MAC387 -> macrófagos

• CD4 -> linfocito de auxilio

• PSA -> cáncer de próstata desmina -> musculo

• CD45 -> leucocitos

• CD8 -> linfocito citotóxico

• HMB45 -> melanocitos

• CD1a -> células de Langerhans

5- Explique la relación de la inmunohistoquímica con los filamentos intermedios.

La inmunohistoquímica nos ayuda a determinar los filamentos intermedios que podemos

encontrar en las células para así poder identificar de una manera mas sencilla los diferentes
tipos de célula.

6- Diga la diferencia entre inmunohistoquímica e inmunocitoquímica.

Ambos utilizan anticuerpos para proporcionar detalles visuales sobre la abundancia,

distribución y localización de las proteínas.

Tipo de muestra. - Tejido vs. Células -

Como su nombre indica, IHC utiliza secciones de tejido, ya sea incrustado en parafina o
congelado, mientras que ICC se refiere a la tinción de células aisladas o cultivadas intactas.
Las muestras de ICC pueden provenir de líneas celulares de cultivo de tejidos (adheridas o
en suspensión), así como directamente de una fuente humana o animal. Antes de la tinción,
las muestras IHC y ICC también se procesan de forma diferente. Algunos ejemplos de
estas diferencias son:

o Las muestras ICC, comparadas con las IHC, se someten a un período de fijación
más corto.
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o Los fijadores, como el formaldehído, pueden enmascarar los epítopos y reducir la

unión antígeno-anticuerpo. Normalmente se incluye un método de recuperación de
antígenos antes de comenzar la tinción IHC para restaurar la antigenicidad del tejido.

o En la IHC, las muestras se incrustan en parafina o se congelan para preservar la

morfología del tejido.

Método de etiquetado. - cromogénico vs. fluorescente -

La IHC y la ICC han usado tradicionalmente reactivos cromógenos para detectar antígenos
objetivo. Sin embargo, con la extensa lista de etiquetas fluorescentes disponibles y su
facilidad de uso en aplicaciones de multiplexación, los investigadores utilizan más a menudo
el IF con el ICC. La detección por fluorescencia para IHC también está ganando
popularidad.

o En la detección cromogénica, una enzima como la peroxidasa del rábano picante

(HRP) convierte un sustrato soluble que incluye 3,3'-diaminobencidina (DAB) y 3-
amino-9-etilcarbazol (AEC) en un producto coloreado insoluble en el lugar del
antígeno.

o En la detección de IF, el reactivo conjugado de fluorocromo se une, directa o

indirectamente, al anticuerpo primario y, una vez excitado, emitirá luz a una longitud
de onda específica.

7- Explique la diferencia entre inmunohistoquímica e inmunofluorescencia.

La inmunofluorescencia se utiliza comúnmente para teñir las células microbiológicas.

La inmunohistoquímica se utiliza comúnmente para teñir secciones de tejido biológico.

La inmunohistoquímica (IHC) y la inmunofluorescencia (IF) implican la unión de un

anticuerpo a un antígeno celular o tisular de interés y luego la visualización del producto
unido por fluorescencia/con el sistema de detección de cromógeno de 3,3'-diaminobenzidina
(DAB).