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Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de

la Educación
Departamento de Biología

RECONOCIMIENTO DE REACTIVOS PARA TINCION DE


TEJIDO CELULAR

INTRODUCCIÓN
La tinción es bastante usada en el campo de las ciencias exactas, debido a las funciones
específicas para las cuales estas fueron diseñadas. Los estudios que se realizan en estos
campos de investigación, en general son muy específicos, y cuando se trata de hacer
estudios en tejidos microscópicos, que tienden a ser incoloros o con tonos muy poco
perceptibles para el ojo humano, además de usar el microscopio, se usan ciertas
sustancias para hacer una identificación más concreta del tejido a estudiar. En este punto
entran los colorantes, sustancias creadas para adherirse a elementos específicos, ya
sean grasas del cuerpo o partes de una célula. Según la naturaleza del reactivo pueden
ser útiles para teñir múltiples partes de la célula, todo depende del pH, también de la
solubilidad y de los iones con los que estén cargados los reactivos (catiónico, aniónico,
neutro).

RESULTADOS Y ANÁLISIS
La práctica de laboratorio se realizó con el objetivo de ver con más detalle los
componentes de ciertos organismos animales, más específicamente los presentes en el
tejido ocular de un pescado y un pollo; y en el tejido muscular de este último. Este ensayo
se realizó con tintes químicos a diferentes concentraciones (10, 100 y 1000) en los
anteriores compuestos.
Para tincionar los diferentes tejidos se usaron los reactivos Azul de Metileno, Rojo Congo,
Sudan III y Eosina.

Azul de Metileno

Con nombre químico 3,7-bis (dimetilamino)-cloruro de fenazationio y formula


C16H18N3ClS, es un colorante orgánico básico utilizado para teñir organelos ácidos
como el núcleo, también tienen apetencia por sustancias ácidas del tejido como el ADN, el
ARN, sobre todo el ARNr presente en los ribosomas por ser muy abundante, así como
ciertas matrices extracelulares ricas en componentes ácidos, como la matriz mitocondrial.
Posee un peso molecular de 319,85 g/mol y un punto de fusión 100 °C. En solución tiene
una densidad de 1.757 g/cm³ y es completamente inodoro.

Tejido de pollo teñido Tejido de pollo teñido Tejido de pollo teñido


con Azul de Metileno a con Azul de Metileno a con Azul de Metileno a
1/10. Vista en 10x 1/100. Vista en 10x 1/1000. Vista en 10x
Rojo
Congo
Rojo Congo es una sal de sodio soluble en agua, conformando una solución roja
coloidal; su solubilidad es mucho mejor en solventes orgánica como el etanol. Se
usa para teñir preparaciones microscópicas, especialmente en tinciones para el
citoplasma y los eritrocitos. También se usa en bacteriología para determinar
rápidamente la presencia del serotipo 2a de Shigella flexneri, donde el colorante
se une a una estructura tipo lipopolisacárido (LPS) única en este tipo de bacteria.
El colorante rojo Congo también es utilizado para teñir amiloides, ya que es
altamente selectivo para los depósitos de amiloide. Esta unión se consigue por los
enlaces de hidrógeno no polares formados entre las moléculas de depósito Congo
rojo y amiloide.
En este caso en el laboratorio no se pudo visualizar nada de lo que este tinte hace
relucir, tal vez porque no se hallaban en la muestra o porque al realizar el lavado
del exceso se retiró de más.

Tejido de pollo teñido Tejido de pollo teñido Tejido de pollo teñido


con Rojo Congo a 1/10. con Rojo Congo a 1/100. con Rojo Congo a 1/1000.
Sudan
Vista III
en 10x Vista en 10x Vista en 10x

Sudan III
El nombre químico de esta sustancia es 1-((4-(fenildiazenil)fenil)diazenil)
naftaleno-2-ol, con PM 352.89 p/mol, conocido comúnmente como Sudán III, es un
tinte diazo (átomos de nitrógeno enlazados), el cual tiene una solubilidad afín a las
grasas, es usado en el campo de la investigación para la señalización de
triglicéridos en secciones congeladas, algunos lípidos y lipoproteínas. Posee una
absorción máxima en 507 (304) nanómetros.
Al ser del grupo de colorantes indiferentes, no tiene como característica una
afinidad con estructuras ácidas o básicas. Esta lizoenzima permite diferencias las
gradas neutras tiñéndola en un tono amarillo y las ácidas de un tono rojo (las
grasas minerales conservan su propiedad incolora)
En el caso de este laboratorio, se puso identificar una tinción amarilla cuando se
usó la tinción con el Sudán III a una concentración de 1:10, mientras que con las
diferentes concentraciones solo se pudo identificar partes del tejido muscular del
pollo.

Tejido de pollo teñido Tejido de pollo teñido Tejido de pollo teñido


Eosina
con Sudan III a 1/10. con Sudan III a 1/100. con Sudan III a 1/1000.
Vista en 10x Vista en 10x Vista en 10x

Eosina Y Eosina B
La eosina es un colorante que tiñe de color rojo o rosado. Es insoluble en agua,
aunque hay una versión hidrosoluble. Tiñe citoplasmas, fibras musculares,
organelos citoplasmáticos y colágeno, pero no tiñe los núcleos celulares. Esto es
debido a que se encuentra cargada de forma negativa, por tanto, tiene afinidad por
las estructuras cargadas positivamente.
Existen dos tipos de eosina la “Y” y la “B”. La eosina “Y” se le conoce como eosina
amarilla. Su fórmula química es C20H8Br4O5. Por otra parte, la eosina “B” es a
veces denominada eritrosina B azulada. Su fórmula es C20H8Br2N2O9. Ambas
son muy similares y realmente no es perceptible la diferencia de utilizar una u otra.
Sin embargo, la más popular es la eosina “Y”.
La eosina tiene la propiedad de distinguir entre una célula viva y una muerta, pues
solo es capaz de atravesar la membrana para teñir su citoplasma cuando las
células están muertas, quedando el citoplasma de la célula incolora si esta
permanece viva
Tiene carácter ácido, por lo cual tiñe sustancias básicas, que a su vez son
denominadas eosinófilas por su afinidad por la eosina; del mismo modo, se
denomina eosinofilos a los leucocitos que se tiñen notablemente con eosina.
De acuerdo a la teoría en la práctica del laboratorio se logró identificar su
coloración rosado-anaranjado en el citoplasma de las células musculares de la
pechuga de pollo, puesto que este reactivo tiene características ácidas, no se
evidenció en la muestra la coloración de los núcleos debido a que la eosina solo
afecta estructuras con composición básica.
No se lograron obtener buenas visualizaciones de estructuras específicas de la
muestra, posiblemente por la pérdida del reactivo al momento de hacer múltiples
lavados, se logró identificar solo el arreglo de las fibras musculares gracias a la
coloración del citoplasma de las células.

Tejido de pollo teñido


con eosina a 1/10. Vista
en 40x.
Preguntas
1. ¿Por qué es importante el saber y conocer el fundamento de los reactivos
químicos?
El fundamento químico de cada sustancia que de este manejando, es importante a
la hora de su implementación, ya que, no todas tienen la misma función, conocerlo
ayudara a reducir el área de estudio hasta llegar al punto más concreto de la
misma.
2. ¿Para qué le sirve el conocer las características de los colorantes químicos en
el laboratorio de Biología Celular?
En este caso, estos colorantes han ayudado drásticamente a hacer la
identificación de ciertos tejidos, los cuales ayudan en gran magnitud al estudiante
promedio a ampliar sus conocimientos por medio de la práctica y el análisis de
múltiples sustancias de gran variedad de organismos.
3. ¿Cree que se va utilizar la tinción celular en otros cursos del programa de
biología?
En el área de las ciencias exactas y específicamente la biología, son usados en
gran medida estos compuestos al momento de realizar ciertas investigaciones que
van dirigidas a ciertas sustancias específicas. Pueden ser usadas en áreas como
la botánica, la microbiología, la biología celular y la molecular.
4. Como biólogo profesional ¿usara nuevamente la tinción celular?
Como biólogos el uso de estos medios de señalización de tejidos es de suma
importancia y utilidad, debido a que todas las áreas de investigación están
conectadas entre ellas, y para realizar un estudio que tenga una gran utilidad
académica es necesario investigar cada uno de los ángulos wue sean necesarios
para hacer más verídico las pruebas o resultados que se quieran dar a conocer.
5. Investigue la formula química de los reactivos: Sudán III, Azul de metileno,
Hematoxilina, Eosina y Rojo Congo.
A. Sudán III: C22 H16 N4 O
B. Azul de metileno: C16 H18 Cl N3 S
C. Hematoxilina: C16 H14 O6
D. Eosina: C20 H6 Br4 Na2 O5
E. Rojo Congo: C32 H22 N6 Na2 O6 S2

Conclusiones
1. El reactivo eosina es más eficaz usarlo en combinación de otros para
generar un contraste entre de las demás estructuras, como por ejemplo la
combinación de hematoxilina-eosina la cual es bastante empleada donde la
hematoxilina tiñe los núcleos y otras estructuras ácidas y la eosina el
citoplasma y estructuras básicas de la célula para proporcionar contrastes
entre estas.
2. El azul de metileno es utilizado para teñir estructuras o sustancias acidas
en las células, sin embargo, también se conocen sus propiedades médicas
para ayudar contra el tratamiento de la metahemoglobinemia, restaurando
el hierro de la hemoglobina a su estado transportador de oxígeno normal, y
sus propiedades anti fúngicas en los peces, atacando al parasito
Ichthyophthirius multifiliis quien aparece en los peces domésticos.
3. El sudan III muy efectivo al momento de realizar tinciones de tejidos,
siempre y cuando la tinción se encuentre a un nivel significativo de
concentración. El tipo de grasa que se pudo encontrar en el tejido muscular
del pollo es principalmente neutro, muy común en los seres vivos, ya que es
usada con el fin de almacenar energía. Este compuesto tambien es de gran
ayuda en estudios médicos, ya que ayuda a verificar que los cuerpos están
realizando el metabolismo de manera correcta.
Bibliografía
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Gil, Marielsa. Tinción de hematoxilina-eosina: características, usos, técnicas.
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