Análisis gráfico 6

Acción enzimática:
Prueba de actividad de catalasa
(Sensor de presión de gas)

Muchos organismos pueden descomponer el peróxido de hidrógeno (H2O2) enzimáticamente. Las

enzimas son proteínas globulares, responsables de la mayoría de las actividades químicas de los
organismos vivos. Actúan como catalizadores, como sustancias que aceleran las reacciones
químicas sin destruirse ni alterarse durante el proceso. Las enzimas son extremadamente
eficientes y pueden usarse una y otra vez. Una enzima puede catalizar miles de reacciones cada
segundo. Tanto la temperatura como el pH al que funcionan las enzimas son extremadamente
importantes. La mayoría de los organismos tienen un rango de temperatura preferido en el que
sobreviven, y sus enzimas normalmente funcionan mejor dentro de ese rango de temperatura. Si
el ambiente de la enzima es demasiado ácido o demasiado básico, la enzima puede
desnaturalizarse irreversiblemente, o desmoronarse, hasta que ya no tenga la forma necesaria
para su correcto funcionamiento.

H2O2es tóxico para la mayoría de los organismos vivos. Muchos organismos son capaces de
descomponer enzimáticamente el H2O2antes de que pueda hacer mucho daño. H2O2se puede
convertir en oxígeno y agua, de la siguiente manera:

2 H2O2→ 2 H2O + O2

Aunque esta reacción ocurre espontáneamente, la enzima catalasa aumenta la velocidad

considerablemente. La catalasa se encuentra en la mayoría de los organismos vivos.

Se puede aprender mucho sobre las enzimas estudiando las velocidades de las reacciones
catalizadas por enzimas. La velocidad de una reacción química se puede estudiar de varias
maneras, entre ellas:
 Medición de la presión del producto tal como aparece
 Medición de la velocidad de desaparición del sustrato
 Medir la tasa de aparición de un producto

En este experimento, medirá la tasa de actividad enzimática en varias condiciones, como

diferentes concentraciones de enzima, valores de pH y temperaturas. Es posible medir la presión
del oxígeno gaseoso formado como H2O2Esta destruido.

OBJETIVOS
 Mida la producción de gas oxígeno a medida que la enzima catalasa o peroxidasa
descompone el peróxido de hidrógeno en varias concentraciones de enzima.
 Mida y compare las velocidades iniciales de reacción de esta enzima cuando diferentes
concentraciones de enzima reaccionan con H2O2.

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Acción enzimática: prueba de la actividad de la catalasa

 Mida la producción de gas oxígeno a medida que la enzima catalasa o peroxidasa

descompone el peróxido de hidrógeno a varias temperaturas.
 Mida y compare las velocidades iniciales de reacción de la enzima a cada temperatura.
 Mida la producción de oxígeno gaseoso a medida que la enzima catalasa o peroxidasa
descompone el peróxido de hidrógeno a varios valores de pH.
 Mida y compare las velocidades iniciales de reacción de la enzima en cada valor de pH.

Figura 1
MATERIALES
Chromebook, computadora, o dispositivo móvil
Aplicación de análisis gráfico 4
Vaya a la presión de gas directa
Conjunto de tapón de goma de 1 orificio
tubo de plástico con conexión Luer-lock
Probeta graduada de 10 ml
vaso de precipitados de 250 ml de agua
tres pipetas beral
3% H2O2
vaso de precipitados de 600 ml
suspensión de enzimas
tres tubos de ensayo de 18 × 150 mm
hielo
tampones de pH
Gradilla
termómetro
gafas de protección

PROCEDIMIENTO
1. Consiga y use gafas.

2. Conecte el tubo de plástico a la válvula del sensor de presión de gas.

3. Inicie el análisis gráfico. Conecte el sensor de presión de gas a su Chromebook, computadora

o dispositivo móvil.

4. Configurar el modo de recopilación de datos

a. Haga clic o toque Modo para abrir la Configuración de recopilación de datos.

2 Biología con Vernier

 Acción enzimática: prueba de la actividad de la catalasa

b. Cambie la velocidad a 0,5 muestras/s y finalice la recopilación a 180 s.

c. Haga clic o toque Listo.
Parte I Efecto de la concentración de enzima
5. Coloque tres tubos de ensayo en una gradilla y etiquételos con 1, 2 y 3.

6. Agregar 3 mL de 3.0% H2O2y 3 mL de agua a cada tubo de ensayo.

7. Iniciar la reacción catalizada por enzimas. Nota: Los siguientes pasos deben completarse lo
más rápido posible.

a. Con una pipeta cuentagotas limpia, agregue 1 gota de suspensión de enzimas al tubo de
ensayo 1. Nota: Asegúrese de no dejar que la enzima caiga contra el costado del tubo de
ensayo.
b. Tape el tubo de ensayo y agítelo suavemente para mezclar el contenido. La reacción debe
comenzar inmediatamente.
c. Conecte el extremo libre del tubo de plástico al conector del tapón antirrobo como se
muestra en la Figura 2.
d. Haga clic o toque Recopilar para iniciar la recopilación de datos. La recopilación de datos
finalizará después de 180 s. Nota: Controle las lecturas de presión que se muestran en la
pantalla. Si la presión supera los 130 kPa, la presión dentro del tubo será demasiado alta y
es probable que el tapón de goma salte. Desconecte el tubo de plástico del sensor de
presión de gas si la presión supera los 130 kPa.

Figura 2
8. Cuando haya finalizado la recopilación de datos, desconecte el conector del tubo de plástico
del tapón de goma. Retire el tapón de goma del tubo de ensayo y deseche el contenido en un
vaso de precipitados.

9. Determine la tasa de actividad enzimática:

a. Seleccione los datos en la región más lineal del gráfico.

b. Haga clic o toque Herramientas gráficas, y seleccione Aplicar ajuste de curva.
c. Seleccione Lineal como ajuste de la curva. Haga clic o toque Aplicar.
d. Registrar la pendiente, m, como la velocidad de reacción en la Tabla 2.
e. Descarte el cuadro Ajuste de curva.
10. Encuentre la tasa de actividad enzimática para los tubos de ensayo 2 y 3:

a. Agregue 2 gotas de la solución enzimática al tubo de ensayo 2. Repita los pasos 7 a 9.

Nota: El conjunto de datos anterior se guarda automáticamente.
b. Agregue 3 gotas de la solución enzimática al tubo de ensayo 3. Repita los pasos 7 a 9.
11. Muestre las tres series de datos en un solo gráfico.

Biología con Vernier 3

 Acción enzimática: prueba de la actividad de la catalasa

a. Para mostrar varios conjuntos de datos en un solo gráfico, haga clic o toque la etiqueta
del eje y y seleccione solo los conjuntos de datos que desea mostrar. Descarte el cuadro
para ver el gráfico.
b. Use el gráfico que se muestra y los datos de la Tabla 2 para responder las preguntas de la
Parte I.

Parte II Efecto de la temperatura

Tu maestro asignará un rango de temperatura para que tu grupo de laboratorio lo pruebe.

Dependiendo de su rango de temperatura asignado, configure su baño de agua como se describe
a continuación. Coloque un termómetro en su baño de agua para ayudar a mantener la
temperatura adecuada.
 0–5 °C: vaso de precipitados de 400 ml lleno de hielo y agua
 20–25 °C: no se necesita baño de agua para mantener la temperatura ambiente
 30–35 °C: vaso de precipitados de 400 ml lleno de agua tibia
 50–55 °C: vaso de precipitados de 400 ml lleno de agua caliente

12. Enjuague los tres tubos de ensayo numerados utilizados para la Parte I. Llene cada tubo de
ensayo con 3 mL de 3.0% H2O2y 3 mL de agua luego coloque los tubos de ensayo en el baño
de agua. Los tubos de ensayo deben estar en el baño de agua durante 3 minutos antes de
continuar con el Paso 13. Registre la temperatura del baño de agua, como se indica en el
termómetro, en el espacio provisto en la Tabla 3.

13. Encuentre la tasa de actividad enzimática para los tubos de ensayo 1, 2 y 3:

 Agregue 2 gotas de suspensión de enzimas al tubo de ensayo 1. Repita los pasos 7 a 9.

Registre la velocidad de reacción en la Tabla 3.
 Agregue 2 gotas de suspensión de enzimas al tubo de ensayo 2. Repita los pasos 7 a 9.
Registre la velocidad de reacción en la Tabla 3.
 Agregue 2 gotas de suspensión de enzimas al tubo de ensayo 3. Repita los pasos 7 a 9.
Registre la velocidad de reacción en la Tabla 3.
14. Calcule la tasa promedio para los tres intentos que probó. Registre el promedio en la Tabla 3.

15. Registre la tasa promedio y la temperatura de su baño de agua de la Tabla 3 en la tabla de

datos de la clase. Cuando toda la clase haya informado sus datos, registre los datos de la clase
en la Tabla 4.

Parte III Efecto del pH

16. Coloque tres tubos de ensayo limpios en una gradilla y etiquételos como pH 4, pH 7 y pH 10.

17. Agregar 3 mL de 3% H2O2y 3 mL de cada tampón de pH a cada tubo de ensayo, como en la

Tabla 1.

tabla 1

pH del Volumen de 3% H2O2 Volumen de

4 Biología con Vernier

 Acción enzimática: prueba de la actividad de la catalasa

búfer
tampón (ml)
(ml)

pH 4 3 3

pH 7 3 3

pH 10 3 3

18. Encuentre la tasa de actividad enzimática para tubos de ensayo etiquetados como pH 4, pH 7
y pH 10:

 Agregue 2 gotas de suspensión de enzimas en el tubo de ensayo pH 4. Repita los pasos 7

a 9. Registre la velocidad de reacción en la Tabla 5.
 Agregue 2 gotas de suspensión de enzimas en el tubo de ensayo pH 7. Repita los pasos 7
a 9. Registre la velocidad de reacción en la Tabla 5.
 Agregue 2 gotas de suspensión de enzimas en el tubo de ensayo pH 10. Repita los pasos 7
a 9. Registre la velocidad de reacción en la Tabla 5.
19. Muestre las tres series de datos en un solo gráfico. Use el gráfico mostrado y los datos en
Tabla 5 para responder las preguntas de la Parte III.

DATOS
Parte I Efecto de la concentración de enzima

Tabla 2

Tasa de reacción
Concentración
(kPa/min)

1% Promedio de m (pendiente o
tasa)

2%

3%

Parte II Efecto de la temperatura

Tabla 3 Tabla 4: Datos de clase

Tasa de reacción Temperatura

Muestra Tasa promedio
(kPa/min) probada
(kPa/min)
(°C)
Prueba 1

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Acción enzimática: prueba de la actividad de la catalasa

Prueba 2

Prueba 3

Promedio

Rango de temperatura:

________ °C

Parte III Efecto del pH

Tabla 5

Tasa de reacción
Muestra
(kPa/min)

pH 4

pH 7

pH 10

PROCESAMIENTO DE DATOS
1. Multiplique su tasa por 60 s/min para convertir a kPa/min. Registre las tasas en la Tabla 3.

2. Para la Parte I de este experimento, haga una gráfica de la tasa de actividad enzimática
contra concentración de enzimas. Trace los valores de velocidad de la Tabla 3 en el eje y y el
número de gotas de enzima en el eje x.

3. Para la Parte II de este experimento, haz un gráfico de la tasa de actividad enzimática contra.
temperatura. Trace los valores de velocidad de la Tabla 3 en el eje y y la temperatura en el
eje x.

4. Para la Parte III de este experimento, haz un gráfico de la tasa de actividad enzimática
contra. pH. Trace los valores de velocidad de la Tabla 3 en el eje y y el pH en el eje x.

PREGUNTAS
Parte I Efecto de la concentración de enzima
1. ¿Cómo afecta el cambio de la concentración de enzima a la velocidad de descomposición del
H2O2?

6 Biología con Vernier

 Acción enzimática: prueba de la actividad de la catalasa

2. ¿Qué crees que sucederá con la velocidad de reacción si la concentración de enzima aumenta
a 5 gotas? Prediga cuál sería la tasa para 5 gotas.

Parte II Efecto de la temperatura

3. ¿A qué temperatura es máxima la tasa de actividad enzimática? ¿El más bajo? Explicar.

4. ¿Cómo afecta el cambio de temperatura a la tasa de actividad enzimática? ¿Sigue esto un

patrón que anticipaste?

5. ¿Por qué podría disminuir la actividad enzimática a temperaturas muy altas?

Parte III Efecto del pH

6. ¿A qué pH es máxima la tasa de actividad enzimática? ¿El más bajo?

7. ¿Cómo afecta el cambio de pH a la tasa de actividad enzimática? ¿Sigue esto un patrón que
anticipaste?

EXTENSIONES
1. Determine las velocidades de reacción de las pruebas de la Parte I para cada intervalo de 30
segundos. ¿Qué patrones ves? ¿Qué podría explicar las diferentes tasas que determinaste?

2. Diferentes organismos a menudo viven en hábitats muy diferentes. Diseñe una serie de
experimentos para investigar cómo los diferentes tipos de organismos pueden afectar la tasa
de actividad enzimática. Considere probar una planta, un animal y un protista.

3. Presumiblemente, a concentraciones más altas de H2O2, hay una mayor posibilidad de que
una molécula de enzima pueda chocar con H2O2. Si es así, la concentración de H2O2podría
alterar la tasa de producción de oxígeno. Diseñe una serie de experimentos para investigar
cómo las diferentes concentraciones del sustrato peróxido de hidrógeno podrían afectar la
tasa de actividad enzimática.

4. Diseñe un experimento para determinar el efecto de hervir la catalasa en la velocidad de

reacción.

5. Explicar cómo los factores ambientales afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas.

Biología con Vernier 7