UNIVERSIDAD

D E C ON C E P C I O N

FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA VEGETAL

INFORME LABORATORIO N2: ENZIMAS

Asignatura: Bioqumica Vegetal

Nombre Alumno: Enzo lvarez L.
Roco Contreras C.
Benjamn Jara B.
Prof. Gua: Carolina Iturra
Daniela Corts

CONCEPCION CHILE
2015

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I.-INTRODUCCION

Las enzimas son catalizadores de origen orgnico, que permiten el desarrollo de todo el
metabolismo celular. Por esta razn comprender su funcionamiento es de vital importancia
para realizar cualquier tipo de estudio bioqumico., puesto que cada enzima posee una
temperatura y pH en el que funciones forma ptima. Adems es importante destacar que las
enzimas actan de forma especfica sobre sustratos determinados, que poseen afinidad con
la enzima y vice versa. (Figueroa y Vega 1974).
La catalasa es una enzima que interviene en la proteccin de los organismos frente a los
radicales libres producidos en el metabolismo, especficamente al perxido de hidrgeno
(H2O2). Funciona de tal modo que disocia, en dos pasos, a dos molculas de H2O2 para
producir dos molculas de agua y una de oxigeno gaseoso (Cspedes et al. 1996). Por esta
razn, el analizar esta reaccin es un muy buen mtodo para apreciar grficamente el efecto
de una enzima.

II.OBJETIVOS

Definir qu es una enzima y cmo sta acta en las reacciones dentro de la clula.
Identificar los diferentes factores que pueden afectar la actividad enzimtica.

III. METODOLOGIA
Ejercicio 1: Funcionamiento de la catalasa en distintos organismos
Materiales
Perxido de hidrogeno 3%

Gasa

Goteros

Tubos de ensayos

Gradillas

Posibles Muestras
Hgado

Tomate

Setas (Championes)

Pepino

Cebolla

Manzana

Rbanos

Lechuga

Papa

Naranja

Hojas de plantas

Procedimiento
Se prepararon homogeneizados con cada muestra asignada.
Se cortaron por separado, muestras de papa, hgado, lechuga y setas.

Con un mortero, se molieron con un poco de agua para diluir la muestra

Se filtr el macerado con una gasa

Se rotularon 5 tubos con las letras A a la E y se pusieron 3ml de homogeneizado en cada

tubo de la siguiente forma:
A - Hgado.

B - Papa

C - Lechuga

D - Setas

E - Agua

Se agregaron 3ml de perxido de hidrogeno en cada tubo, se observ la reaccin.

Ejercicio 2: Efecto de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas

Materiales
Homogeneizado de hgado

Bao de agua

Hielo

Congelador

Gradilla

Tubos de ensayo

Procedimiento
Se rotularon 4 tubos de ensayo de ensayo con los nmeros del 1 al 4, los cuales fueron
llenados con 3ml de homogeneizado de hgado. Luego se someti cada tubo a una
temperatura distinta, como sigue:
Tubo 1 = 80C por 5 minutos

Tubo 2 = 37C por 5 minutos

Tubo 3 = Temperatura ambiental

Tubo 4 = Hielo por 30 minutos

Se aadieron 2 ml de perxido de hidrogeno a cada tubo y se midi el tiempo transcurrido

desde que se aadi el perxido hasta que se produjeron burbujas.
Ejercicio 3: Efecto del pH sobre el funcionamiento de las enzimas
Materiales
Homogeneizado de hgado

HCl 3M

NaOH 3M

Agua

Gradilla

Tubos de ensayo

Perxido de hidrogeno

Procedimiento

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Se rotularon 3 tubos de ensayo con las letras A, B y C, a los que se aadi 1 ml de
homogeneizado de hgado. Se agreg acido, base y agua a los tubos de la siguiente forma:
Tubo A = 3ml de HCl 3M

Tubo B = 3ml de NaOH 3M

Tubo C = 3ml de agua

Se agregaron 3ml de perxido de hidrogeno a los 3 tubos, se midi el tiempo de aparicin

de burbujas.

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IV. RESULTADO
Ejercicio 1: Funcionamiento de la catalasa en distintos organismos.
Tabla 1: Resultados reaccin de catalasa en varios organismos.
Resultados reaccin de catalasa en varios organismos
Tubo

Cantidad de burbujas

A Hgado

Burbujeo intenso

B Papa

Burbujeo lento

C Lechuga

Muy poco burbujeo

D Champin

Burbujeo intenso

E Agua

NHR

Cantidad de homogenizado
consumido
3 ml de homogenizado+ 3ml
de perxido de hidrogeno.
3 ml de homogenizado+ 3ml
de perxido de hidrogeno.
3 ml de homogenizado+ 3ml
de perxido de hidrogeno.
3 ml de homogenizado+ 3ml
de perxido de hidrogeno.
3 ml de homogenizado+ 3ml
de perxido de hidrogeno.

Ejercicio 2: Efecto de la temperatura sobre el funcionamiento de las enzimas.

Tabla 2: Resultados del efecto de la temperatura.

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Tubo

Temperatura

Tiempo que tard en

comenzar reaccin.

80C

No hay efervescencia

No hay burbujas, formacin de

precipitado

37C

Ambiente

Gran cantidad de burbujas

Cantidad considerable de
burbujas
Burbujeo progresivo, lento
inicialmente

15s
4

Hielo
10s

Observaciones

Ejercicio 3: Efecto del pH sobre el funcionamiento de las enzimas.

Tabla 3: Resultados del efecto del pH sobre la actividad enzimtica.
Tubo
Tiempo de reaccin Descripcin de la reaccin
A

No hay
efervescencia

No hay burbujas, formacin de

precipitado

60s

Muy poca burbuja, casi nada

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17s

Burbujeo progresivo

V.-DISCUSION
Al aadir el perxido la enzima catalasa comienza a reaccionar de manera casi inmediata,
al entrar en contacto la catalasa con el perxido de hidrogeno, se liberara oxgeno y agua,
esto permite la formacin de burbujas, la cantidad y velocidad en que aparecen depender
de la especie a tratar, por lo observamos, las especies que mayor cantidad de burbujas
produjeron fueron las muestras A y D, siendo muestras homogenizadas de hgado y
champin respectivamente, estos datos son correctos, ya que en el hgado es donde
principalmente se procesa el perxido de hidrogeno, mientras que los championes tambin
son organismos productores de perxido de hidrogeno, por lo que para no verse afectados
por los efectos adversos que conlleva mantener este reactivo en el medio intracelular, este
debe ser catalizado de alguna forma, esto quiere decir que, entre otras cosas, recurren a la
utilizacin de la enzima catalasa ; pese a que todas las muestras produjeron burbujas, a
excepcin de la muestra de agua, este experimento no puede ser realizado en todo tipo de

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organismos, ya que se conoce que solo los organismos que viven en condiciones aerbicas
son capaces de producir perxido de hidrogeno dentro de sus clulas, por lo que algn
organismo que no disponga de perxido de hidrogeno, no se ver en necesidad de producir
la enzima para degradarlo.
La estructura proteica es la que determina la actividad enzimtica, cualquier causa u efecto
que cambie esta estructura puede llevar a una gran prdida de la actividad enzimtica como
por ejemplo la temperatura, esta afectara a la actividad de la enzima debido a que esta
necesita una temperatura adecuada u ptima para que no se desnaturalice. Primero en el
tubo 1 de a 80C no hubo efervescencia por lo cual no hubieron burbujas ni actividad
alguna, debido a que la enzima ya no estaba en una temperatura optima, luego vemos en el
tubo 2 a 37C la efervescencia fue en un tiempo menor o igual a 1 ya que la enzima estaba
en tu temperatura optima, hubo una gran cantidad de burbujas y efervescencia, lo que
podemos decir que la actividad enzimtica fue mayor y estuvo en su punto mximo,
siguiendo con el tubo 3 el cual estaba en una temperatura ambiente tu tiempo en demora
para que apareciera la actividad enzimtica fue de 15 s y con una cantidad de considerable
de burbujas Ya por ultimo en el tubo 4 en el hielo la rapidez de la enzima fue de 10s ,
con un burbujeo lento pero progresivo a medida que avanza el tiempo, esto es debido a que
la enzima a temperaturas muy bajas se volver ms rgida y su actividad enzimtica se
volver ms lenta, durante el experimento se puso un tubo de ensayo con muestra en una
superficie cubierta de hielo, por lo que se esperaba que la temperatura afectara el
funcionamiento de la enzima, luego de aadir el perxido de hidrogeno, la reaccin ocurri
casi sin ningn cambio, esto se puede explicar, ya que la sustancia aadida a la muestra, se
encontraba a temperatura ambiente, por lo que rpidamente regulariz la temperatura de la
enzima que se encontraba en la muestra.

Al exponer el homogeneizado de hgado a pH cido (con cido clorhdrico) y bsico (con

hidrxido de sodio) observamos lo siguiente. En primera instancia (tubo A) al agregar los 3
ml de cido clorhdrico (HCl), la solucin se torn ligeramente blanca y luego se form un
precipitado. Este precipitado corresponde a la protena denaturada que, en este estado,
disminuye su afinidad con el solvente, producto de una desorganizacin molecular, que
expone grupos hidrfobos hacia la parte externa de la protena (Figueroa y Vega 1974).Tal
precipitacin fue causada por el cambio en el pH producido por el HCl. En el segundo caso
(tubo B) al agregar 3ml de hidrxido de sodio (NaOH) y en el tercer caso (tubo C) al
agregar agua no hubo cambio aparente en el agua. Luego de agregar los 3ml de perxido se
observ lo siguiente: En el caso B, se generaron pocas burbujas, aproximadamente a los 60
s luego de agregar el perxido; en el caso A, no se gener ninguna burbuja y en el caso C la
reaccin se produjo con normalidad. La explicacin a lo sucedido en B y C radica en que el
pH ptimo de reaccin para la catalasa est entre un rango de 6,8 y 7,5 (Castro et al. 2006),
por lo tanto, la razn por a cual la catalasa reaccion ante el perxido lentamente en B y
normalmente en C es, porque en B la solucin se encontraba en un pH mucho ms bsico
que el pH optimo, mientras que en C el agua no cambi mucho las condiciones de la
muestra. Con respecto a A la reaccin no se llev a cabo, porque la catalasa esta

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desnaturalizada y dicho estado, la enzima no es apta para cumplir su actividad biolgica
(Figueroa y Vega 1974). Es posible decir, por lo tanto, que la capacidad de una enzima para
catalizar una reaccin depende directamente del pH del medio al cual est sometida, de
modo que cada enzima tendr un pH ptimo en el que se generar la mxima reaccin de la
enzima. Esto es porque una variacin en el pH puede concluir en la ionizacin de los
grupos qumicos del sitio activo de la enzima o bien, puede inducir a la ionizacin del
sustrato, disminuyendo la afinidad de la enzima con el antes mencionado (Figueroa y Vega
1974).
La importancia de lo dicho anteriormente se ve reflejada claramente si, por ejemplo
suponemos que el pH del estmago se torna igual a 4. En esta situacin, por ejemplo, la
enzima pepsina, que posee un pH ptimo de 1,5 estar muy lejos del punto en que realiza
de mejor forma su funcin (ruptura de protenas). Adems, el pH acido del estmago
permite la denaturacion de las protenas, lo cual las torna ms susceptibles a ser atacadas
por las enzimas proteolticas, como la tripsina, secretada hacia el duodeno (zona del tubo
digestivo que sigue luego del estmago) para terminar el trabajo de degradacin proteica
(Figueroa y Vega 1974). Si el pH del estmago se torna ligeramente ms alcalino, las
enzimas digestivas que actan especficamente a pH cido no cumplirn su funcin
eficientemente y adems, los sustratos no estarn en condiciones para ser degradados por
enzimas secretadas ms adelante en el tubo digestivo.
Desde otra perspectiva, como se dijo anteriormente, cada enzima actuar de mejor forma a
determinada temperatura y al elevar la temperatura, esta aumentar su actividad siempre y
cuando no se desnature. En el caso hipottico en el que exista fiebre alta , por ejemplo
41C, la actividad enzimtica no afectar de forma negativa al sistema, ya que la
temperatura humana ronda naturalmente los 37C y tal cambio de temperatura no es muy
alto. De hecho, la accin enzimtica se ver favorecida, ya que la fiebre es un mecanismo
natural para el combate contra patgenos y una mayor temperatura se traducir en una
acelerada respuesta contra la emergencia (Ramn-Romero y Faras 2014). Sin embargo, es
importante destacar , como declaran Ramn-Romero y Faras que "La fiebre es
metablicamente cara, ya que cada 1 C de elevacin de la temperatura aumenta la tasa
metablica aproximadamente 10%", por lo tanto , efectivamente aumentar la velocidad de
la respuesta inmune , pero se gastar una gran cantidad de energa.
Al verter perxido de hidrgeno en un herida se generar la misma reaccin que se apreci
en todas las muestras: Formacin de burbujas por la liberacin de oxigeno gaseoso.
El oxgeno es un elemento qumico presente en el metabolismo de diversos organismos que
normalmente no es nocivo, pero por determinadas reacciones qumicas (mediadas por
enzimas) o por efecto de radiaciones ionizantes, puede originar formas dainas (y muy
reactivas) del elemento en cuestin, como es el caso del perxido de hidrogeno. Este
compuesto es utilizado, por el ser humano en el proceso de beta-oxidacin lipdica, sin
embargo sigue siendo un compuesto peligroso. Si se expone una membrana lipdica a
perxido de hidrogeno ocurre peroxidacion lipdica, lo cual genera rupturas en la
membrana que genera la muerte celular por edema. Esto explica por qu existe catalasa en
una gran variedad de organismos. Las membranas lipdicas estn presentes en todas las
formas de vida, y es necesario poseer un mecanismo de defensa frente a un compuesto con
la capacidad de degradarlas como lo es el perxido de hidrgeno (Soto 2002).
Todas las reacciones de nuestro metabolismo estn ligadas enzimas para que se lleven a
cabo. Tan solo en el proceso de digestin, que ocurre siempre que ingerimos alimentos, es

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posible encontrar gran cantidad de enzimas actuando para degradar cada tipo de nutriente
que necesitamos hasta un tamao que pueda ser absorbido por nuestro cuerpo. Durante todo
el proceso de respiracin celular, que realizamos constantemente para obtener energa,
tambin es necesario el uso de enzimas. Para sintetizar lpidos para la creacin de nuevas
membranas plasmticas, al hacer divisin celular, es necesario el uso de enzimas. Segn
Figueroa y Vega 1974, "Las enzimas constituyen la base de la vida existente en nuestro
planeta" por lo tanto en nuestro diario vivir convivimos con miles de ellas.

VI.-CONCLUSION
Segn los objetivos anteriormente mencionados, pudimos definir correctamente lo que es
una enzima, su forma de actuar y sus condiciones ptimas, adems observamos cmo es
afectada su reactividad si se cambia algn factor que pueda afectar el buen funcionamiento
de esta, en este caso analizamos como cambia la reactividad frente a temperatura y pH,
obteniendo resultados concorde a lo esperado.

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VII. BIBLIOGRAFIA
[1]- Figueroa E. Vega. Bioquimica. Editorial del pacifico S.A. 1964 Santiago de Chile

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VIII. LINKOGRAFIA
[1]. Dr. Luis Daz Soto. (1999). Dao oxidativo, radicales libres y antioxidantes. 2015, de
Editorial Ciencias Mdicas Sitio web: http://scielo.sld.cu/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0138-65572002000200009
[2]. Dra. Ela M. Cspedes Miranda, Dra. Ingrid Hernndez Lantigua y Dra. Niurka Llpiz
Janer. (1999). Enzimas que participan como barreras fisiolgicas para eliminar los radicales
libres: II. Catalasa. 2015, de Editorial Ciencias Mdicas Sitio web:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-03001996000200001
[3]. Fidel Ramn-Romeroa y Jos Mara Farasa. (2014). La fiebre. 2014, de Revista de la
Facultad de Medicina de la UNAM Sitio web:
http://www.medigraphic.com/pdfs/facmed/un-2014/un144d.pdf
[4]. Jhon Alxeander Castro Rivera, Luca Estrella Baquero Duarte, Carlos Eduardo Narvez
Cuenca.. (2005). Catalasa, peroxidasa y polifenoloxidasa de pintaya amarilla. 2006, de
Revista Colombiana de qumica Sitio web:
http://www.scielo.org.co/pdf/rcq/v35n1/v35n1a09