Electroforesis experiencia de

laboratorio
Biología
Universidad de Panamá
4 pag.

Document shared on https://www.docsity.com/es/electroforesis-experiencia-de-laboratorio/4227969/

Downloaded by: mery-romero-2 (rxuthx@gmail.com)
 Preguntas

1. Explique detalladamente cuales son los buffers utilizados en la corrida electroforética y

sus componentes.
Los Buffers que se utilizaron en la experiencia son el TAE compuesto de Tris – Ácido Acético –
Na2 EDTA y TBE compuesto de Tris – Ácido Bórico – EDTA. La concentración utilizada del TAE en
esta experiencia fue de 50X.

2. ¿Cuáles son sus propiedades y cuándo se utilizan?

Dentro de sus propiedades tenemos que el TAE tiene una menor capacidad de amortiguación
que el TBE, y puede resultar en una acidificación del medio si la electroforesis se desarrolla durante
un periodo muy prolongado. Sin embargo, funciona muy bien con tiempos normales de
electroforesis, además tiene una mayor capacidad de resolución que el TBE para tamaños más
grandes de ADN.

3. ¿Cuáles son los métodos más utilizados para visualizar y cuantificar el ADN en una
corrida electroforética?
Uno de los métodos más utilizados para la cuantificación del ADN es el análisis de la absorción
de luz UV, ya que los nucleótidos poseen una capacidad de absorción de alrededor de 260nm. Este
método proporciona una estimación simple y precisa de la concentración de una muestra, pero solo
si esta se encuentra pura, sin contaminación significativa de proteínas o solventes orgánicos que
absorben a longitudes de ondas cercanas.

Otro método muy utilizado es la estimación mediante el espectrofotómetro. En este método se

utiliza el instrumento conocido como espectrofotómetro que mide la absorbancia a 260nm y 280nm
ven un equipo automatizado.

4. ¿Qué es el buffer de carga y qué propósitos cumple en la electroforesis?

Los Buffers de carga facilitan la visualiz3ación y sedimentación del producto de la PCR o de
ácidos nucleicos en los mediante la implementación de distintos tipos de colorantes.

Cada uno de estos amortiguadores de carga exhibe un patrón de migración diferente.

Normalmente los buffers de carga (por sus colorantes) nos indican en qué momento se debe detener
la electroforesis.

5. ¿En qué caso se utiliza la poliacrilamida para separación de ácidos nucleicos?

La poliacrilamida es un polímero formado por largas cadenas del monómero acrilamida que se
unen transversalmente mediante N, N´-metilenbisacrilamida. La principal ventaja de los geles de

Document shared on https://www.docsity.com/es/electroforesis-experiencia-de-laboratorio/4227969/

Downloaded by: mery-romero-2 (rxuthx@gmail.com)
acrilamida sobre los de agarosa es su mayor cantidad de ADN, mientras que una de las desventajas
es la limitación en el tamaño del ADN a separar (alrededor de 500-600pb). Los geles de
poliacrilamida desnaturalizantes se usan para separar fragmentos de ADN monocatenario, y se
utilizan técnicas como la secuenciación, DGGE o extensión del primer, mientras que los no
desnaturalizantes se usan para separar ADN bicatenario.

6. ¿Qué factores afectan la velocidad de migración del ADN en geles de agarosa?

El tamaño es un factor que determina la velocidad de la migración en geles de agarosa. Si los

ácidos nucleicos son sometidos a movimiento a través de un gel formado por una malla
tridimensional de un polímero, como la agarosa, la fricción hará que las moléculas de mayor tamaño
migren con más lentitud, mientras las de menor tamaño avancen con mayor rapidez en el gel. Este
hecho permite que las diferentes moléculas se separen en función de su tamaño. Del mismo modo,
moléculas de ADN o ARN con topologías o estructuras tridimensionales diferentes también se
comportarán de forma distinta ante la fricción con la malla de polímero y por consecuente se logra su
separación.

7. ¿Por qué se utiliza la poliacrilamida para separación de ácidos nucleicos?

Los geles de poliacrilamida constituyen un excelente medio de soporte para separaciones

electroforéticas, dado que reúnen una serie de propiedades idóneas: transparencia, elasticidad,
porosidad controlable y compatibilidad con una gran variedad de compuestos químicos.

8. Entre un ADN lineal, enrollado (con un corte) y súper enrollado, ¿cuál migra más rápido y
por qué?
Entre estos tres tipos de ADN, el super enrollado migra más rápido. Esto ocurre debido a que
este super enrollamiento conlleva a que la molécula en sí sea más compacta, es decir, menos
longitud por recorrer y migrar, logrando así que esta molécula super enrollada tenga una migración
con una mayor rapidez.

9. ¿Cómo funciona el bromuro de Etidio en la visualización de ácidos nucleicos?

El bromuro de etidio (BrEt) es un agente intercalante (se intercala entre las bases nitrogenadas)
que se usa como colorante fluorescente para la visualización de ácidos nucleicos en geles de
agarosa y poliacrilamida. El BrEt absorbe luz ultravioleta de λ ≈ 300 nm, y emite una luz anaranjada
de 590 nm, mediante la cual podemos observar la posición y cantidad relativa de ADN en el gel tras
la electroforesis.

10. ¿Cuáles son los efectos biológicos adversos que tiene el bromuro de Etidio?

Document shared on https://www.docsity.com/es/electroforesis-experiencia-de-laboratorio/4227969/

Downloaded by: mery-romero-2 (rxuthx@gmail.com)
 El bromuro de etidio al intercalarse en el ADN, tiene un gran efecto mutagénico y es un agente
cancerígeno. Además, es una sustancia nociva y causa irritación en la piel, en los ojos y en las vías
respiratorias.

11. ¿Para qué se usa la electroforesis en campo pulsado y en qué se diferencia de la

convencional que usted aprendió en esta práctica?
El fundamento de esta técnica es la reorientación de las moléculas cuando cambia la dirección
del campo eléctrico. En la electroforesis convencional las moléculas de ADN de gran tamaño quedan
“atrapadas” en la malla que forma la agarosa en su avance a través del gel, pero la aplicación de
dos campos eléctricos alternantes en ángulo permite una reorientación de las moléculas que de esta
forma avanzaran un tramo más, antes de quedar atrapadas nuevamente. Cuanto más grandes son
las moléculas, mayor debe ser la duración de los campos eléctricos alternos para permitir la
reorientación y en última instancia la separación de las mismas.

12. ¿A qué longitud de onda el ADN tiene la máxima absorbancia? ¿Cómo se puede
cuantificar espectrofotométricamente el ADN?
El ADN tiene su absorbancia a los 260nm, espectrofotométricamente se puede cuantificar el ADN
mediante la ley de Lambert con un espectrofotómetro tradicional, o con la técnica del nanodrop.

Infografía

1. 2011. QuimiNet.” La importancia de la luz en los equipos de laboratorio”.

https://www.quiminet.com/articulos/la-importancia-de-la-luz-en-los-equipos-de-
laboratorio-2637374.htm

2. 2012. Anónimo. “qué es y para qué sirve una micropipeta”.

http://paraquesirve.info/que-es-y-para-que-sirve-una-micropipeta/

3. 2009. Castro, D. “por qué tanto miedo al bromuro de etidio”

http://biologos-unalm.blogspot.com/2009/07/por-que-tanto-miedo-al-bromuro-de.html

4. 2013. Golla, U & Seperhimanesh, M. “Tampones TAE y TBE”

https://www.researchgate.net/post/
What_is_difference_between_TAE_and_TBE_buffers_and_their_properties_regarding_use_in_agaro
se_gel_electrophoresis

Document shared on https://www.docsity.com/es/electroforesis-experiencia-de-laboratorio/4227969/

Downloaded by: mery-romero-2 (rxuthx@gmail.com)
Document shared on https://www.docsity.com/es/electroforesis-experiencia-de-laboratorio/4227969/
Downloaded by: mery-romero-2 (rxuthx@gmail.com)