Cuestionario

1. ¿Cuál es la naturaleza de reacción en torno a la formación del complejo púrpura que se

desarrolla mediante el método de Buiret?

R/ La intensidad del color es proporcional a la concentración de la proteína en

solución. El color se debe a la formación de un complejo de coordinación del ion Cu2+
y cuatro N de enlaces peptídicos. La unión depende, por tanto, del N del esqueleto
peptídico y no de grupos funcionales en la cadena lateral (R).

2. ¿Qué papel juegan los diferentes constituyentes del reactivo de Biuret en la reacción?

R/ El reactivo de Biuret consiste de una solución alcalina de:

• CuSO4 5H2: El sulfato de cobre es la forma más común, triclínico y de color azul
brillante.
• Tartrato de sodio y potasio: para prevenir la precipitación de iones cúpricos.
• Kl: a veces se utiliza para evitar la auto reducción del hidróxido cúprico

3. ¿Por qué razón se empleó en el experimento de Folin menos cantidad de muestra que
cuando se realizó el ensayo de Biuret?

R/ No se trabajó con el método Folin.

4. ¿Qué papel juegan los diferentes constituyentes del reactivo de Folin en la reacción?

R/ A este método se le añade un reactivo que le da un complejo colorido a la proteína

siendo la intensidad de color de la disolución resultante proporcional a la
concentración de proteínas, según la ley de Lambert-Beer. Este reactivo de Folin para
poder realizarlo se debe incubar la muestra en una solución detergente de Sulfato
dodecil y sodio para que así la solución se pueda disolver y luego aplicar el método de
Lowry.

5. Elabore un cuadro de los métodos y diga las ventajas y desventajas que presenta cada
método.

Método de Biuret Método de Folin Lowry

Ventajas Ventajas
➢ Menos caro que el método de ➢ Muy sensible.
KJELDAHL. ➢ Menos afectado por la turbidez de la
➢ Rápido (se puede completar en muestra.
menos de 30 minutos). ➢ Más específico que la mayoría de los
➢ Es el método más simple de análisis otros métodos.
de proteínas. ➢ Relativamente simple.
➢ No es frecuente encontrar ➢ Se puede completar en 1 a 1.5 horas.
derivaciones de color
➢ Pocas substancias no proteínas
interfieren con la reacción de Biuret.
 ➢ No detecta N2 de fuentes no
proteicas o no peptídicas.
Desventajas
➢ No es muy sensible comparado con el
método de Lowry.
➢ Requiere de al menos 2 a 4 mg de
proteína por prueba.
➢ Las concentraciones altas de sales de
amonio interfieren con la reacción.
➢ Puede ocurrir opalescencia en la
solución final si están presentes altas
concentraciones de lípidos o
carbohidratos.
Desventajas
➢ El color varia con diferentes proteínas
(más que el método de Biuret)
➢ El color no es estrictamente
proporcional a la concentración de
proteínas.
➢ Las altas concentraciones de azucares
reductores, sulfato de amonio y
compuestos con sulfhidrilo interfieren
con la reacción.
➢ La sacarosa lípidos, Buffers Fosfato,
Monosacáridos y hexoaminas interfieren
con la reacción.

6. Investigue y escriba la reacción completa para la formación del complejo púrpura de

Biuret.

R/ Esta reacción es positiva cuando la molécula contiene dos uniones peptídicas o más,
cercanas entre si (es decir, tripéptidos en adelante). Se realiza tratando la solución a
ensayar con CuSO4 en medio alcalino de NaOH. Las proteínas dan color violeta, las
peptonas (PM mayor 5000) color rojo-morado. El color desarrollado se debe a la
formación de un complejo de coordinación con el Cu++.

Desarrollo de las actividades de laboratorio: