Métodos para

identificar
proteínas
Integrantes:
- Calixtro Machacuay , Nayeli Sadith
- Flores Fow ,Diego Fernando
- Oimas Yajo, Maria Fernanda
- Uchasara Maraza , Dayana Nicole
- Tello Zamora, Linda Winnie
 ABSORBER LUZ EN EL
ESPECTRO
Se basa en el principio físico de absorciónUV
de luz de ciertos aminoácidos en las
proteínas, en concreto en el espectro ultravioleta (alrededor de 280 nm).
Aplicado en la industria láctea y cárnica.

VENTAJAS: DESVENTAJAS:

● La mayoría de las proteínas muestran una ● Variabilidad entre proteínas

absorción a 280 nm, la cual se atribuye al grupo
fenólico de la tirosina y al grupo indólico del
triptófano.
● Para el cálculo de la concentración de dicha
solución se aplica la ley de Lambert –Beer: A = ε
·c ·l
● No requiere estándares.
● No se consume muestra.
● Tiene la ventaja de que no es necesario utilizar
reactivos y la muestra no se daña o destruye
durante la determinación.
● Es incompatible con los
métodos de extracción que
empleen detergentes o agentes
desnaturalizantes.
● No es un método específico
Donde:
• A = absorbancia
• ε= Coeficiente de extinción molar.
• l = longitud de la celda.
• C = concentración
 Bradford
Es una prueba desarrollada para determinar la concentración de proteína total de
una muestra.

ventaja
● Es rápido
● Utiliza luz visible, no UV
● Puede detectar concentraciones muy pequeñas.
● extremadamente sensible

Desventaja
● Interfiere con detergentes, el colorante reacciona con aminoácidos básicos
● No funciona a pH alto
● Solo identifica los aminoácidos específicos arginina, lisina e histidina.
● No se puede utilizar en proteínas de bajo peso molecular.
 Biuret
Principio: Método colorimétrico: Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu2+
y los grupos NH de los enlaces peptídicos en medio básico
Fundamento: Determinación de proteínas.

Ventajas: Desventajas
● Tiene menor costo. ● Requiere por lo menos 2-4 mg de proteína por
● Es rápido.. prueba.
● Es el método más simple para el análisis de ● Baja sensibilidad 1000-10000 µg.
proteínas. ● Las sales de amonio en altas concentraciones
● No es frecuente encontrar derivaciones de color. interfieren con la reacción.
● Pocas sustancias interfieren con la reacción biuret. ● Puede ocurrir opalescencia en la solución final si
● No detecta N2 de fuentes no proteicas o no están presentes altas concentraciones de lípido o
peptídicas. carbohidratos.
● Debe estandarizarse el color mediante cantidades de
proteína conocida.
 Método de Lowry
Consta de dos etapas

Primera etapa: método de Biuret ( el Cu +2 reacciona en un medio alcalino con los enlaces peptídicos de la
proteína, esto provoca el desdoblamiento de la estructura tridimensional exponiendo los residuos fenólicos de
tirosina, triptófano, cisteína, asparagina.

Segunda etapa: En esta segunda etapa los grupos fenólicos y el cobre formaron un complejo el cual va a actuar
con el reactivo folin ciocalteu ( color marillo), en esta etapa el cobre actúa como catalizador, el reactivo al ser
reducido por los grupos fenólicos da lugar a un complejo azul intenso.

- Absorbancia a 580 nm
- Este método se diferencia con el Biuret porque detecta proteínas a una baja concentración
 Método Lowry
Ventajas
- Mayor sensibilidad
- Duración de 1 a 1,5 horas
- Método relativamente simple
- Alta precisión
- Es el más usado y es tomado como
estándar
Desventajas
- Puede reaccionar con otras
sustancias a la misma longitud de
onda
- el color varía en diferentes proteínas
- La sacarosa, lípidos, buffer fosfatos,
monosacáridos y hexosas interfieren
en la reacción
 Ácido Bicinconínico
La concentración de proteínas se determinaBCA
Rección de las proteínas en medio alcalino con CU+2 para posteriormente ser reducido a CU+
mediante una curva de calibración con una muestra
conocida
Absorbancia 592 nm

Ventajas Desventajas

- Menor límite de detección que - Interfiere con agentes reductores y

bradford y lowry quelantes.
- Simple y rápido
- con este método también se pueden
medir iones cobre y azúcares.
- Menor susceptibilidad a detergentes
 Kjeldahl
El método Kjeldahl se basa en la transformación del nitrógeno contenido en la muestra en
sulfato de amonio mediante la digestión con ácido sulfúrico en presencia de un catalizador.

Consta de 3 etapas:
- 1- Digestión
n - C -NH2 + H2SO4 → CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2

- 2- Neutralización y Destilación

NH3 + H3BO3 → NH4 + H2BO3-

(NH2)SO4 + 2 NaOH → 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

- 3- Valoración o Titulación
H2BO3 - + H+ → H3BO3
 Kjeldahl
● Expresión de los resultados
Para calcular el contenido de nitrógeno se utiliza la siguiente expresión:

Para calcular el contenido de proteína se utiliza la siguiente expresión:

Ventajas: Desventajas:

● Es clásico y muy usado ● Mide el nitrógeno total

● Aplica para todo tipo de ● Usa reactivos corrosivos
alimentos
GRACIAS