MÉTODO DE BIURET

El Método de Biuret es una prueba cuantitativa.

Mediante la reacción de Biuret se consigue con mayor precisión la determinación

cuantitativa de proteínas en orina de 24 horas. Este método consiste que en presencia de
iones cúpricos el reactivo provoca la formación de un complejo de composición
desconocida, entre el ion Cu++ y los grupos (= C = O) y (= N-H) de los enlaces de
péptidos; se necesitan por lo menos dos de cada uno de estos grupos, por lo que la
reacción no la darán aminoácidos y dipéptidos, pero sí tripéptidos, polipéptidos y
proteínas.

Cuanto mayor es la cantidad de proteína presente, más enlaces de péptidos hay

disponibles para la reacción. La intensidad del color producido es proporcional al
número de enlaces de péptidos que reaccionan. El método es simple y rápido. La
precisión es suficiente, por lo que se ha convertido en el método más utilizado.

Los grupos – CO-NH unidos entre sí dan una reacción con formación de color violeta
con las sales cúpricas en medio alcalino, siendo la más representativa y simple la que da
con el Biuret NH-CO-NH-CO-NH.

En estos momentos es el método colorimétrico más exacto y simple para la

determinación de proteínas totales que se cuantifican espectrofotométricamente (540
nm). Como estándar se utiliza una solución de albúmina.

Ventajas

 Barato en comparación al método de Kjeldahl

 Rápido (Se puede completar en menos de 30 minutos)
 Es el método más simple de análisis de proteínas.
 No es frecuente encontrar derivaciones de color
 Pocas sustancias no proteicas interfieren con la reacción de biuret
 No detecta N2 de fuentes no proteicas o no peptídicas

Limitaciones

 No es muy sensible comparado con el método de Lowry

 Requiere de al menos 2 a 4mg de proteína por prueba
 Las concentraciones altas de sales de amonio interfieren con la reacción
 Puede ocurrir opalescencia en la solución final, si están presentes altas
concentraciones de lípidos o carbohidratos
 Debe estandarizarse el color mediante cantidades de proteínas conocidas